Att välja en botanisk hudvårdsingrediens bör innebära mer än att hitta en tilltalande växthistoria. För ett hudvårdsmärke, kontraktstillverkare eller ingrediensdistributör är de mer användbara frågorna:

Vilka föreningar finns i extraktet?

Hur konsekvent kan tillverkaren kontrollera sina koncentrationer?

Vilka experiment stödjer den föreslagna tillämpningen?

Gäller bevisen den faktiska ingrediensen som köps?

Vilka ytterligare tester behövs innan en färdig produkt lanseras?

Det tekniska dokumentet som granskas i den här artikeln fokuserar påverbascoside härrörande från Cistancheoch dess föreslagna tillämpningar inom hudlipidproduktion, hydrering och barriärrelaterad forskning.

Den beskriver både en reningsprocess och laboratorieexperiment som jämför renad verbascoside med flera Cistanche-extrakt och andra ingredienser.

 

 

16% verbascoside cistanche-extrakt

Den centrala kommersiella lektionen är enkel: ett allmänt Cistanche-extrakt och en högrenad Cistanche-härledd förening bör inte behandlas som utbytbara ingredienser.

Bevisanteckning:Forskningsresultaten nedan redovisas i den kinesiska patenttexten som tillhandahålls för översättning. Det levererade materialet inkluderar inte originalfigurerna, kompletta numeriska datauppsättningar, patentpublikationsdetaljer eller kliniska studier på människa. Det bör därför läsas som ett tekniskt upplysningar, inte som en oberoende bekräftelse på slutproduktens effekt eller myndighetsgodkännande.

 

1. Vad är Verbascoside?

Verbascoside är också känd somakteosid. Dessa är namn för samma kemiska substans, snarare än två olika aktiva ingredienser. FDA:s ämnesregister listar båda namnen under samma ämnesidentitet. (precision.fda.gov)

 

 

I den bifogade beskrivningen beskrivs verbascoside som en fenyletanoidglykosid erhållen från de torkade köttiga stjälkarna från Cistanche-arter. De huvudsakliga namngivna botaniska källorna är:

Cistanche deserticola

Cistanche tubulosa

Cistanche sinensis

Cistanche salsa

Dokumentet undersöker verbascoside som en potentiell botanisk aktiv för topikala formuleringar, med särskild uppmärksamhet på lipidmetabolism, hyaluronsyraproduktion, tight-junction-proteiner och cellmigrering.

Varför namnet är viktigt när du köper ingredienser

När du jämför leverantörsofferter, begär bekräftelse av:

Den botaniska arten och växtdelen.

Oavsett om materialet är ett helt extrakt, standardiserat extrakt eller renad förening.

Det uppmätta verbascoside-innehållet.

Den analysmetod och referensstandard som används.

Om den angivna procentandelen representerar en analys i massa eller en kromatografisk areaprocent.

Ett citat för "Cistanche-extrakt" ensamt ger inte tillräckligt med information för att avgöra om det motsvarar det material som utvärderats i ett visst experiment.

2. Varför fokuserar avslöjandet på hudbarriären?

Dokumentet presenterar ett forskningskoncept med flera slutpunkter snarare än ett enkelt ytfuktande påstående.

Dess föreslagna sekvens är:

Epidermal cellförnyelse → starkare cell-till-cell-kopplingar → lipidstöd → hyaluronsyraproduktion → reparationsrelaterad aktivitet

För att undersöka detta koncept använde forskarna HaCaT-celler. HaCaT är en immortaliserad human keratinocytcellinje etablerad som en laboratoriemodell för att studera epidermal biologi och keratinisering. Det är inte en celltyp som naturligt heter "HaCaT" i en persons hud. (pmc.ncbi.nlm.nih.gov)

För ingrediensköpare är denna distinktion viktig:resultat i odlade celler är en forskningsutgångspunkt, inte en ersättning för att testa en färdig produkt på mänsklig hud.

Huvudslutpunkterna rapporterade

Forskningsområde	Mått som beskrivs i det medföljande dokumentet	Praktisk tolkning
Cellsvar	CCK-8 analys	En screening endpoint; ytterligare metoder skulle stärka ett spridningsanspråk
Lipidrelaterad aktivitet	Fettsyrasyntasaktivitet; ACC, FASN och N-SMase uttryck	Stöder ytterligare undersökning av lipidmetabolism, men kvantifierar inte direkt den fullständiga hudbarriärens lipidprofil
Hyaluronsyra	HA-innehåll; HAS2, HAS3 och CD44 uttryck	Stöder vidare utredning av HA-relaterade vägar
Cell-till-cell-anslutningar	Claudin-1 och occludinnivåer	Mäter utvalda tight-junction-proteiner snarare än fullständig barriärfunktion
Reparationsrelaterad aktivitet	Cellskrapanalys	En in vitro-slutpunkt för gap-closure, inte en klinisk sårläkningsprövning
Fukthållning	Formuleringsmassaretention på glasplattor	Ett laboratorietest på formuleringsnivå, inte en hydratiseringsstudie på huden

Dessa tolkningar följer av de experimentella metoderna som beskrivs i den medföljande texten.

 

3. Vad gör denna forskning användbar för hudvårdsföretag?

Avslöjandet jämför flera material snarare än att anta att varje Cistanche-härledd ingrediens ger samma svar.

De testade materialen inkluderar:

Ett Cistanche-polysackaridextrakt.

Flera fenyletanoid-glykosid-innehållande extrakt.

Ett totalt fenyletanoidglykosidextrakt.

Echinacoside.

Renad verbascoside.

Enligt det medföljande dokumentet visade renad verbascoside aktivitet över flera av de uppmätta endpoints. Vissa blandade extrakt visade aktivitet i vissa analyser men inte andra.

The Purchasing Takeaway

Köp specifikationen som matchar ditt utvecklingsmål - inte bara växtnamnet.

Till exempel:

Om ditt projekt är baserat på experiment med renat verbascoside, begär data för det renade materialet.

Om din formulering använder ett standardiserat helt utdrag, begär testning på det utdraget.

Om en leverantör citerar forskning om en annan extraktionsprocess, fråga om den testade sammansättningen är jämförbar med det material som erbjuds.

Bevis för en ingrediensklass ska inte automatiskt överföras till en annan.

4. Hur framställs Verbascoside i avslöjandet?

Den beskrivna processen har fyra huvudsteg:

Botanisk beredning:Förbehandla och pulverisera torkade Cistanche köttiga stjälkar.

Extraktion:Använd 50 %–80 % vattenhaltig etanol.

Berikning:Separera fraktioner med ett AB-8 makroporöst adsorptionsharts.

Rening:Använd silikagelkromatografi, följt av koncentrering och frystorkning.

Den angivna slutliga renheten ärminst 98%, även om den tillhandahållna texten inte innehåller den analytiska validering eller batchdata som behövs för att oberoende bekräfta den specifikationen.

En kritisk tillverkningsfråga: Resterande lösningsmedel

Det beskrivna kromatografisteget använderkloroform och metanol.

För ett kommersiellt inköpsprojekt, fråga tillverkaren om den faktiska listan över produktionslösningsmedel, kontroller för borttagning av lösningsmedel och batchspecifika resultat av restlösningsmedel. ICH Q3C tillhandahåller ett farmaceutiskt ramverk för att utvärdera risker med kvarvarande lösningsmedel; det bör inte representeras som en universell kosmetisk acceptansstandard. (ema.europa.eu)

Anta inte att "växthärledd" betyder "gjord endast med vatten och etanol."

 

5. Vad visar faktiskt fukthållningstestet?

Det medföljande dokumentet beskriver en jämförelse av:

Ett serum innehållande2% verbascoside.

Ett serum innehållande2 % echinakosid.

Ett serum med positiv kontroll5% glycerin.

Proverna placerades kl25 grader och 50% relativ luftfuktighet, och deras massa mättes över tiden.

Avslöjandet rapporterar att det verbascoside-innehållande provet behöll mer massa under dessa förhållanden.

Det är en potentiellt användbar formuleringsscreeningsobservation. Den beskrivna metoden fastställer dock inte:

Överlägsen återfuktning på mänsklig hud.

Lägre transepidermal vattenförlust.

Klinisk överlägsenhet över glycerin.

Bättre prestanda i varje formulering.

Att den observerade skillnaden endast berodde på den namngivna aktiva, utan en fullständigt avslöjad matchad fordonsjämförelse.

För ett varumärke som planerar ett jämförande påstående, testa de färdiga formuleringarna med en lämpligt utformad studie.

 

6. En praktisk checklista för inköp av Cistanche-ingredienser

Använd följande frågor när du utvärderar en Cistanche-extraktleverantör eller tillverkare av renat verbascoside.

Köpfråga	Dokumentation att begära
Vad är den botaniska källan?	Artidentifiering, växtdelsdeklaration och spårbarhetsinformation
Vad exakt levereras?	Fullständig sammansättning, inklusive bärare, processhjälpmedel och hjälpämnen där tillämpligt
Hur mycket verbascoside finns?	Batchspecifikt intyg om analys och analysmetod
Hur bekräftas identiteten?	Kromatografisk identifiering och referensstandardinformation
Vilka lösningsmedel används?	Faktisk tillverkningslösningsmedelsdeklaration och testresultat av restlösningsmedel
Hur konsekvent är produktionen?	Representativa resultat från flera partier
Är materialet lämpligt för den avsedda användningen?	Dokumentation för avsedd användning och ett lämpligt säkerhetsunderlag
Kommer det att fungera i den valda formeln?	Löslighet, kompatibilitet, stabilitet och förpackningsutvecklingsdata
Vad stöder de föreslagna påståendena?	Studierapporter för samma ingrediensklass och helst den färdiga formuleringen

 

Använd inte "Natural" som en säkerhetsslutsats

Den medföljande patenttexten ger ett gynnsamt säkerhetsmeddelande baserat på ingrediensens botaniska ursprung. Detta uttalande kräver kvalifikationer för kommersiell publicering.

FDA förklarar att en ingredienss källa inte bestämmer dess säkerhet: växtbaserade material kan också innehålla giftiga eller allergiframkallande ämnen. Säkerheten måste bedömas för de avsedda användningsförhållandena. (fda.gov)

Av denna anledning, begär säkerhetsunderlag snarare än att förlita sig på "naturlig", "växtbaserad" eller "hög renhet" som fristående garantier.

 

7. Hur bör ett varumärke diskutera forskningen?

Håll tre lager åtskilda:

Vad avslöjandet hävdar.

Vad de rapporterade experimenten mätte.

Vad den färdiga produkten har visat sig göra.

Till exempel är "undersökt i HaCaT-celler för lipid-relaterad aktivitet" väsentligt annorlunda från "kliniskt bevisat att reparera hudbarriären."

På samma sätt bör hänvisningar till behandling av eksem, hantering av atopisk dermatit eller läkning av sår inte kopieras direkt till vanliga kosmetiska produkter. I USA kan anspråk på att behandla sjukdom eller påverka kroppens struktur eller funktion göra att en produkt regleras som ett läkemedel. (fda.gov)

En forskningsartikel eller patentreferens är i sig inte tillåtelse att göra ett terapeutiskt marknadsföringsanspråk.

8. Rekommenderad utvecklingsväg

För ett företag som överväger Cistanche-deriverad verbascoside är en användbar utvecklingssekvens:

Definiera den avsedda produktkategorin och målmarknaden.

Välj ingredienskvalitet och analytisk specifikation.

Granska sammansättning, föroreningar, kvarvarande lösningsmedel och säkerhetsdokumentation.

Utveckla en prototyp och bedöm ingrediensens kompatibilitet.

Utvärdera formulering och förpackningsstabilitet.

Genomför lämpliga mikrobiologiska och säkerhetsbedömningar.

Testa den färdiga produkten mot de avsedda prestandakraven.

Granska den slutliga webbplatsen, etiketten och reklamspråket innan lanseringen.

Koncentrationsintervallet i avslöjandet-0.01%–5.0%-bör behandlas som ett avslöjat intervall, inte som en universellt validerad formuleringsrekommendation.

 

Bottom Line för ingrediensköpare

Den medföljande forskningen gör Cistanche-deriverad verbascoside till en kandidat för ytterligare hudvårdsutveckling, särskilt för projekt som utforskar hydrering och barriärrelaterade laboratorieeffekter.

 

Cistanche acteoside innehållslista

 

Klicka för att besöka olika innehåll i akteosidcistanche-extraktlistan

 

 

 

Dess mest användbara lärdom är inte bara att "Cistanche är bra för huden." Det är detextraktionsmetod, innehåll av aktiva ämnen, ingrediensidentitet och beviskvalitet påverkar alla om en botanisk ingrediens är lämplig för ett specifikt kommersiellt projekt.

När du kontaktar en Cistanche-tillverkare, börja med en exakt förfrågan:

"Vänligen tillhandahåll den botaniska identiteten, verbascoside-specifikationen, analysmetoden, representativa analyscertifikat, resultat av restlösningsmedel, säkerhetsdokumentation och formuleringsvägledning för den ingredienskvalitet som föreslås för vårt projekt."

Den begäran skapar en mycket starkare grund för produktutveckling än en generisk förfrågan om örtextraktpulver.

 

(54) Uppfinningens titel

Metod för framställning av Verbascoside och metod för dess tillämpning för att främja hudlipidproduktion

(57) Sammanfattning

Uppfinningen avser ett förfarande för framställning av verbascoside och ett förfarande för dess applicering för att främja hudlipidproduktion, tillhörande det tekniska området hudvård och topikala produkter.

Metoden omfattar följande steg:

Att välja de torkade köttiga stjälkarna från Orobanchaceae-växternaCistanche deserticola, Cistanche tubulosa, Cistanche sinensis, ellerCistanche salsa; pulverisera stjälkarna efter förbehandling; extrahera dem under återflöde med en 50 %–80 % vattenhaltig etanollösning två till fyra gånger under en till tre timmar varje gång; kombinera extrakten; och koncentrera dem under reducerat tryck tills ingen etanollukt kvarstår, varigenom en koncentrerad lösning erhålles.

Passa den koncentrerade lösningen genom en AB-8 makroporös adsorptionshartskolonn; sekventiell eluering med avjoniserat vatten och en 30 %–50 % vattenhaltig etanollösning för att avlägsna föroreningar; sedan eluera målbeståndsdelarna med en 60 %–90 % vattenhaltig etanollösning; uppsamling av eluatet och koncentrering av det under reducerat tryck; rening av det genom silikagelkolonnkromatografi med användning av kloroform-metanol i ett volymförhållande som sträcker sig från 5:1 till 2:1 som elueringsmedel; uppsamling av målfraktionerna; och koncentrera dem under reducerat tryck, följt av frystorkning, för att erhålla renad verbascoside.

De fördelaktiga effekterna som anges för uppfinningen är att verbascoside skyddar huden och uppvisar förbättrad hudvårdsaktivitet när den införlivas i produkter.

 

Anspråk

Påstående 1

En metod för att framställa verbascoside, kännetecknad av att den omfattar följande steg:

Att välja de torkade köttiga stjälkarna från Orobanchaceae-växternaCistanche deserticola, Cistanche tubulosa, Cistanche sinensis, ellerCistanche salsa; pulverisera dem efter förbehandling; extrahera dem under återflöde med en 50 %–80 % vattenhaltig etanollösning två till fyra gånger under en till tre timmar varje gång; kombinera extrakten; och koncentrera dem under reducerat tryck tills ingen etanollukt kvarstår, varigenom en koncentrerad lösning erhålles.

Passa den koncentrerade lösningen genom en AB-8 makroporös adsorptionshartskolonn; sekventiell eluering med avjoniserat vatten och en 30 %–50 % vattenhaltig etanollösning för att avlägsna föroreningar; sedan eluera målbeståndsdelarna med en 60 %–90 % vattenhaltig etanollösning; uppsamling av eluatet och koncentrering av det under reducerat tryck; rening av det genom silikagelkolonnkromatografi med användning av kloroform-metanol i ett volymförhållande som sträcker sig från 5:1 till 2:1 som elueringsmedel; uppsamling av målfraktionerna; koncentrera dem under reducerat tryck; och frystorka dem för att erhålla renad verbascoside med en renhet av minst 98%.

 

Påstående 2

2. Förfarande för framställning av verbascoside enligt krav 1, varvid förhållandet mellan material och lösningsmedel under återflödesextraktion sträcker sig från 1:10 till 1:20, och extraktionstemperaturen sträcker sig från 60 grader till 80 grader.

 

Påstående 3

2. Förfarande för framställning av verbascoside enligt krav 1, varvid diameter-till-höjdförhållandet för den AB-8 makroporösa adsorptionshartskolonnen sträcker sig från 1:8 till 1:15, och elueringsflödeshastigheten sträcker sig från 1 till 3 BV/h.

 

Påstående 4

2. Förfarande för framställning av verbascoside enligt krav 1, varvid frystorkningsförhållandena innefattar en temperatur som sträcker sig från -40 grader till -50 grader, ett vakuumtryck som sträcker sig från 10 till 30 Pa, och en torktid som sträcker sig från 12 till 24 timmar.

 

Påstående 5

5. Metod för applicering av verbascoside för att främja hudlipidproduktion, med användning av verbascoside framställd enligt något av kraven 1–4, kännetecknad av att appliceringsmetoden innefattar:

Tillsats av verbascoside till en topisk produktbas vid en förutbestämd massfraktion och omrörning likformigt för att producera en färdig produkt; applicera den färdiga produkten på hudytan en eller två gånger dagligen; tillåta verbaskosid att penetrera och verka på epidermala HaCaT-celler för att uppreglera genen och proteinuttrycket av ACC, FASN och N-SMase och öka aktiviteten av fettsyrasyntas; och fortsatt användning i en till fyra veckor för att förbättra hudens lipidsyntes.

Verbascoside främjar HaCaT-cellproliferation, sårläkning, tight-junction proteinuttryck och lipid- och hyaluronsyraproduktion, och tillhandahåller därigenom multi-target barriär-reparationsfunktioner.

Den används genom hela hudbarriärens underhållskedja som omfattar förnyelse av epidermala celler, förbättrade intercellulära anslutningar, påfyllning av lipidmatrisen och syntesen av hyaluronsyra som en naturlig fuktgivande faktor.

 

Påstående 6

6. Appliceringsmetod enligt krav 5, varvid massfraktionen av verbaskosid i den topiska produkten sträcker sig från 0,01 % till 5,0 %.

 

Påstående 7

6. Appliceringsmetod enligt krav 5, varvid 0,1–0,5 g av den färdiga produkten används per applicering, följt av mjuk massage i en till tre minuter för att främja absorptionen.

 

Påstående 8

6. Appliceringsmetod enligt krav 5, varvid den topikala produkten är ett medicinskt förband, en reparationsprodukt efter proceduren, en tilläggsbehandlingsprodukt för atopisk dermatit, en hudvårdsprodukt specifikt avsedd för känslig hud, eller en intensiv återfuktande och reparerande hudvårdsprodukt.

 

Anspråk 9

6. Appliceringsförfarande enligt krav 5, varvid hjälpämnen dessutom kan inkorporeras under appliceringen av verbascoside.

 

Anspråk 10

10. Appliceringsmetod enligt krav 9, varvid hjälpämnet väljs från ett fuktighetsbevarande medel, ett emulgeringsmedel, ett konserveringsmedel, en doft eller ett lugnande medel, och doseringsformen för den hjälpämnesinnehållande kompositionen är vald från en lotion, en kräm, en gel, ett serum eller en sheet-mask-lösning.

 

Metod för framställning av Verbascoside och metod för dess tillämpning för att främja hudlipidproduktion

 

Tekniskt område

[0001]Uppfinningen tillhör det tekniska området hudvård och topikala produkter. I synnerhet avser den ett förfarande för framställning av verbaskosid och ett förfarande för dess applicering för att främja hudlipidproduktion.

Mer specifikt avser det en beredningsmetod för verbascoside avsedd att utöva effekter över hela hudbarriärens reparationssekvens av epidermal cellförnyelse → förbättrade intercellulära tight junctions → lipid-matris-påfyllning → hyaluronsyrasyntes → sårläkning, för användning för att skydda huden.

 

Bakgrundskonst

[0002]Epidermal cellförnyelse, förbättrade intercellulära tight junctions, lipid-matris-påfyllning, hyaluronsyrasyntes och sårläkning spelar var och en en oumbärlig roll för att upprätthålla hudbarriärhomeostas.

Epidermal cellförnyelse är grunden för barriärkonstruktion. Genom att påskynda proliferationen och differentieringen av basala keratinocyter säkerställer det att tillräckligt antal celler rör sig uppåt på ett ordnat sätt, vilket ger tillräckligt cellulärt material för barriärbildning.

Intercellulära kopplingsstrukturer, inklusive täta förbindelser och desmosomer, förankrar nybildade celler tillsammans för att skapa en tät, kontinuerlig fysisk barriär som effektivt motstår inträde av yttre irriterande ämnen.

Lipidmatrisen som fyller utrymmena mellan cellerna bildar en organiserad lamellstruktur och är det huvudsakliga sättet att täta vägar genom vilka vatten går förlorat.

Hyaluronsyra som syntetiseras i epidermis och dermis bildar ett kraftfullt vattenkvarhållande nätverk, tillför fukt till stratum corneum och upprätthåller cellulär homeostas. Det kan också tillhandahålla en lämplig fuktig miljö för dessa fysiologiska processer och överföra cellulära signaler.

Sårläkning beror mycket på dessa fyra processer. För det första ger hyaluronsyra en provisorisk matris och signaleringsfunktioner. Epidermal cellförnyelse krävs då för att täcka såret. Nybildade celler måste återupprätta täta förbindelser och fylla på lipidmatrisen för att slutföra återställandet av barriärfunktionen.

Dessa fem processer initieras sekventiellt under sårläkning. Deras sammanlänkade, koordinerade åtgärder - från cellförnyelse och strukturell förstärkning till matrisfyllning och vattenlagring - leder tillsammans till en helt stabiliserad hudbarriär.

De ger inte bara den fysiska styrkan som krävs för att motstå yttre irriterande ämnen utan också den fukthållande förmågan som behövs för att förhindra inre vattenförlust, vilket gör att huden kan bibehålla långsiktig hälsa i ett tillstånd av dynamisk jämvikt.

Följaktligen är flerdimensionell, systematisk rekonstruktion mer grundläggande än att bara förbättra ytfuktigheten. Det kan förbättra hudens motståndskraft och fuktbevarande vid källan, vilket stöder ett mer hållbart och stabilt hälsotillstånd.

[0003]Hudens egen produktion av lipider och hyaluronsyra är grundläggande för att bibehålla hudens hälsa, motstå miljöirritation och bevara ett ungdomligt tillstånd.

Genom fuktretention och försvar mot mikroorganismer och föroreningar bidrar dessa ämnen till att säkerställa normal fysiologisk hudfunktion.

Jämfört med enbart externt tillskott beskrivs att främja hudens egen produktion av lipider och hyaluronsyra som en mer grundläggande och hållbar strategi som direkt stärker dess "självreparationsförmåga" och "motstånd".

För hudsjukdomar som atopisk dermatit och eksem beskrivs stärkande av lipid- och hyaluronsyraproduktionen ha central preventiv och terapeutisk betydelse.

Källan förklarar att dessa tillstånd ofta involverar genetiska defekter som försvagar hudens "tegel-och-murbruk"-struktur, vilket gör att allergener och irriterande ämnen kan penetrera lättare och utlöser en ihållande immun-inflammatorisk cykel.

Därför kan identifiering av aktiva ingredienser som aktiverar viktiga lipidsyntesenzymer, såsom FASN och ACC, eller direkt inducerar hyaluronsyraproduktion proaktivt upprätthålla och reparera cellulär lipid- och hyaluronsyraproduktion.

Enligt avslöjandet kan denna strategi lindra torrhet, klåda och inflammatoriska episoder samtidigt som den minskar externa triggers vid källan, minskar frekvensen och svårighetsgraden av återfall och hjälper till att flytta sjukdomshantering från passiv behandling till aktivt förebyggande.

 

[0004]Verbascoside är en fenyletanoidglykosid och en av huvudbeståndsdelarna i Orobanchaceae-växterna:

Cistanche deserticolaYC Ma;

Cistanche tubulosa(Schenk) Wight;

Cistanche sinensisVink; och

Cistanche salsa(CA Mey.) Beck.

 

Forskning har visat att verbascoside är en potent antioxidant och har farmakologiska aktiviteter inklusive antiinflammatoriska, neuroprotektiva, leverskyddande och anti-aging effekter.

Under screening för hudskyddande medel från många växter fann uppfinnarna att verbascoside inte bara främjar HaCaT-cellproliferation och tight-junction proteinuttryck utan också reglerar fettsyrasyntasaktivitet, och därigenom förbättrar hudens lipidsyntes.

Det aktiverar också vägar involverade i produktionen av hyaluronsyra och främjar sedan sårläkning.

Dessa åtgärder omfattar hela hudbarriärunderhållet och reparationssekvensen av epidermal cellförnyelse → förbättrade intercellulära anslutningar → lipid-matrispåfyllning → hyaluronsyrasyntes → sårläkning.

Verbascoside kan därför användas som ett hudskyddande och fuktgivande medel för flera mål i funktionell hudvård och topikala produkter.

Exempel inkluderar medicinska förband och reparationsprodukter efter proceduren; tilläggsprodukter för atopisk dermatit eller eksem; hudvårdsprodukter speciellt avsedda för känslig hud eller rosacea; och intensiva återfuktande och reparationsprodukter för dagligt bruk.

 

Sammanfattning av uppfinningen

[0005]Uppfinningen tillhandahåller ett förfarande för framställning av verbascoside och ett förfarande för dess applicering för att främja hudlipidproduktion.

Beredningsmetoden avser verbascoside avsedd att stödja den fullständiga hudbarriärreparationssekvensen av epidermal cellförnyelse → förbättrade intercellulära förbindelser → lipid-matrispåfyllning → hyaluronsyrasyntes → sårläkning.

Den tar itu med det tekniska problemet med att tillhandahålla en ny kärnaktiv ingrediens med multi-target-effekter för hudvård eller aktuella produkter.

Verbascoside beskrivs ha fördelen av att verka över hela hudbarriärreparationskedjan, med effekter som är överlägsna befintliga hudvårdsingredienser med ett mål, såsom ingredienser som endast främjar hyaluronsyrasyntes, främjar enbart cellproliferation eller enbart ger fukt.

[0006]För att uppnå de föregående syftena använder uppfinningen följande tekniska lösning.

[0007]En metod för framställning av verbascoside innefattar följande steg.

[0008]Välj de torkade köttiga stjälkarna från Orobanchaceae-växternaCistanche deserticola, Cistanche tubulosa, Cistanche sinensis, ellerCistanche salsa.

Efter blanchering, torkning och pulverisering, extrahera materialet under återflöde med en 50 %–80 % vattenhaltig etanollösning två till fyra gånger i en till tre timmar varje gång.

Kombinera extrakten och koncentrera dem under reducerat tryck tills ingen etanollukt kvarstår, varigenom en koncentrerad lösning erhålls.

[0009]Passera den koncentrerade lösningen genom en AB-8 makroporös adsorptionshartskolonn.

Eluera sekventiellt med avjoniserat vatten och en 30%–50% vattenhaltig etanollösning för att avlägsna föroreningar, följt av en 60%–90% vattenhaltig etanollösning för att eluera målbeståndsdelarna.

Samla upp eluatet och koncentrera det under reducerat tryck.

Rena koncentratet med silikagelkolonnkromatografi med kloroform-metanol i ett volymförhållande som sträcker sig från 5:1 till 2:1 som elueringsmedel.

Samla upp målfraktionerna, koncentrera dem under reducerat tryck och frystorka dem för att erhålla renad verbascoside med en renhet på minst 98 %.

[0010]Eventuellt varierar förhållandet mellan material och lösningsmedel under återflödesextraktion från 1:10 till 1:20, uttryckt i g/ml, och extraktionstemperaturen varierar från 60 grader till 80 grader.

Översättarens anmärkning: Källan anger dessutom att detta förhållande betyder "1 g råmaterial tillsätts till 1 mL lösningsmedel." Det påståendet stämmer inte överens med det specificerade intervallet 1:10–1:20, vilket motsvarar 10–20 ml lösningsmedel per gram råvara.

[0011]Valfritt varierar diameter-till-höjd-förhållandet för den makroporösa adsorptionshartskolonnen AB-8 från 1:8 till 1:15, där förhållandet är kolumndiametern, d, till kolumnhöjden, h. Elueringsflödeshastigheten sträcker sig från 1 till 3 BV/h.

[0012]Valfritt innefattar frystorkningsbetingelserna en temperatur som sträcker sig från -40 grader till -50 grader, ett vakuumtryck som sträcker sig från 10 till 30 Pa och en torktid som sträcker sig från 12 till 24 timmar.

[0013]En metod för att applicera verbascoside för att främja hudlipidproduktion tillhandahålls enligt följande.

[0014]Tillsätt verbascoside till en topisk produktbas vid en förutbestämd massfraktion och rör om jämnt för att producera en färdig produkt.

Applicera den färdiga produkten på hudytan en eller två gånger dagligen.

Genom penetrering verkar verbascoside på epidermala HaCaT-celler för att främja cellproliferation och stärka tight junctions.

Samtidigt uppreglerar det gen- och proteinuttrycket av ACC , FASN och N-SMase, ökar fettsyrasyntasaktiviteten, uppreglerar HAS2, HAS3 och CD44 och ökar hyaluronsyrahalten.

Fortsätt använda i en till fyra veckor för att uppnå en total förbättring av hudbarriären.

[0015]Eventuellt sträcker sig massfraktionen av verbascoside i den topiska produkten från 0,01 % till 5,0 %.

[0016]Använd eventuellt 0,1–0,5 g av den färdiga produkten per applicering och massera försiktigt i en till tre minuter efter appliceringen för att främja absorptionen.

[0017]Eventuellt är den topikala produkten ett medicinskt förband, en reparationsprodukt efter proceduren, en tilläggsbehandlingsprodukt för atopisk dermatit, en hudvårdsprodukt speciellt avsedd för känslig hud, eller en intensiv återfuktande och reparerande hudvårdsprodukt.

[0018]Eventuellt kan hjälpämnen även tillsättas under appliceringen av verbascoside.

[0019]Vidare väljs hjälpämnet från ett fuktighetsbevarande medel, ett emulgeringsmedel, ett konserveringsmedel, en doft eller ett lugnande medel.

Doseringsformen av den konstituensinnehållande kompositionen väljs från en lotion, en kräm, en gel, ett serum eller en arkmasklösning.

 

Fördelaktiga effekter av uppfinningen

[0020]De fördelaktiga effekterna av uppfinningen är som följer.

[0021]Uppfinningen visar att verbascoside har kärnaktiviteter för att främja hudlipid- och hyaluronsyraproduktion.

Det kan också främja hudcellsproliferation, stärka intercellulära tight junctions och påskynda sårläkning, vilket bildar en sluten mekanism för att "främja cellproliferation → stabilisera intercellulära förbindelser → förbättra lipid- och hyaluronsyraproduktionen → accelerera reparation och läkning."

Jämfört med känd teknik beskrivs uppfinningen ha följande fördelar.

[0022]Verbascoside är en naturlig växtbaserad aktiv ingrediens med en hög säkerhetsnivå och tydligt definierad farmakologisk aktivitet, som undviker potentiella hudirritationsrisker förknippade med kemiskt syntetiserade ingredienser.

Redaktionell begränsning: Detta är källans säkerhetspåstående, inte en slutsats som enbart fastställts av botaniskt ursprung.

[0023]Beredningseffektiviteten och utbytet av verbascoside förbättras.

[0024]Verbascoside verkar på ett omfattande utbud av mål, samtidigt som det reglerar flera nyckelprocesser, inklusive cellproliferation, tight-junction proteinuttryck, lipidsyntes, hyaluronsyraproduktion och sårläkning.

Det förbättrar därigenom hudbarriärfunktionen på ett integrerat sätt, med effekter som beskrivs som överlägsna effekterna av ingredienser med ett enda mål.

[0025]Dess tillämpningar är breda, inklusive medicinsk reparation, tilläggsbehandling av hudsjukdomar, känslig hudvård och daglig återfuktning och reparation, vilket tillgodoser hudhälsobehoven hos olika populationer.

 

Kort beskrivning av ritningarna

[0026]För att tydligare förklara de tekniska lösningarna av utföringsformerna av uppfinningen eller känd teknik, presenteras kortfattat nedan de ritningar som krävs för att beskriva utföringsformerna eller känd teknik.

Ritningarna som beskrivs nedan representerar endast vissa utföringsformer av uppfinningen. En person med vanlig skicklighet inom området kan hämta andra teckningar från dem utan kreativ ansträngning.

[0027]Figur 1 är ett schematiskt flödesschema över framställningsmetoden enligt uppfinningen.

[0028]Figur 2 visar HaCaT-cellviabilitetsdata.

[0029]Figur 3 visar aktivitetsdata för fettsyrasyntas.

[0030]Figur 4 visar hyaluronsyrainnehållsdata.

[0031]Figur 5 visar HaCaT-cellviabilitetsdata för uppfinningen.

[0032]Figur 6 visar fettsyrasyntasaktivitetsdata för uppfinningen.

[0033]Figur 7 visar uttrycket av gener associerade med fettsyrasyntes.

[0034]Figur 8 visar uttrycket av proteiner associerade med fettsyrasyntes.

[0035]Figur 9 visar Western blot-resultat associerade med fettsyrasyntes.

[0036]Figur 10 visar hyaluronsyrainnehållsdata.

[0037]Figur 11 visar uttrycket av gener associerade med hyaluronsyrasyntes.

[0038]Figur 12 visar uttrycket av proteiner associerade med hyaluronsyrasyntes.

[0039]Figur 13 visar Western blot-resultat associerade med hyaluronsyra.

[0040]Figur 14 visar claudin-1-expressionsnivåer.

[0041]Figur 15 visar ockludinexpressionsnivåer.

[0042]Figur 16 visar sårförslutningshastigheter.

[0043]Figur 17 visar bilder från cellskrapanalysen.

[0044]Figur 18 visar en utvärdering av olika provers fuktgivande prestanda.

 

Detaljerad beskrivning av utföringsformerna

[0045]Utföringsformerna av ansökan beskrivs i detalj nedan med hänvisning till de bifogade ritningarna.

Exempel 1: Framställning av renad Verbascoside

[0046]Exempel 1.

[0047]Såsom visas i figur 1 tillhandahåller detta exempel en metod för framställning av verbascoside, förkortad som Ver, innefattande följande steg.

[0048]Välj de torkade köttiga stjälkarna avCistanche deserticolaellerCistanche tubulosa, båda tillhörande familjen Orobanchaceae.

Skiva materialet, blanchera det i kokande vatten i 10–25 minuter och ugnstorka det i 40 grader –60 grader, vilket ökar verbascoside-innehållet mer än fyra gånger.

 

 

Notera:* kontra tom kontrollgrupp, P<0.05P < 0.05P<0.05.

 

Efter pulverisering, extrahera materialet under återflöde med en 50 %–80 % vattenhaltig etanollösning två till fyra gånger under en till tre timmar varje gång.

Kombinera extrakten och koncentrera dem under reducerat tryck tills ingen etanollukt kvarstår, varigenom en koncentrerad lösning erhålls.

 

[0049]Passera den koncentrerade lösningen genom en AB-8 makroporös adsorptionshartskolonn.

Eluera sekventiellt med avjoniserat vatten och en 30%–50% vattenhaltig etanollösning för att avlägsna föroreningar, följt av en 60%–90% vattenhaltig etanollösning för att eluera målbeståndsdelarna.

Samla upp eluatet och koncentrera det under reducerat tryck.

Rena den med silikagelkolonnkromatografi med kloroform-metanol i ett volymförhållande från 5:1 till 2:1 som elueringsmedel.

Samla upp målfraktionerna, koncentrera dem under reducerat tryck och frystorka dem för att erhålla renad verbascoside med en renhet på minst 98 %.

[0050]Specifikt varierar förhållandet mellan material och lösningsmedel under återflödesextraktion från 1:10 till 1:20, och extraktionstemperaturen varierar från 60 grader till 80 grader.

[0051]Diameter-till-höjdförhållandet för den makroporösa adsorptionshartskolonnen AB-8 sträcker sig från 1:8 till 1:15, och elueringsflödeshastigheten varierar från 1 till 3 BV/h.

[0052]Frystorkningsförhållandena innefattar en temperatur som sträcker sig från -40 grader till -50 grader, ett vakuumtryck som sträcker sig från 10 till 30 Pa och en torktid som sträcker sig från 12 till 24 timmar.

 

Tabell 2. Sammanfattning av olika provers bioaktivitet

Index	Tom kontroll	Positiv kontroll	CTE	Ech	Ver
Cellviabilitet (%)	100 ± 8.347	/	122.052 ± 8.051*	117.868 ± 7.941*	128.894 ± 9.528*
FAS-aktivitet (U/mg prot)	2.712 ± 0.419	18.488 ± 4.56*	2.069 ± 0.27	9.799 ± 1.356*	10.4 ± 0.697*
HA-innehåll (ng/ml)	10.908 ± 0.968	19.925 ± 4.306*	21.644 ± 2.037*	13.517 ± 1.653*	18.486 ± 1.341*
Claudin-1 uttryck (pg/ml)	414.58 ± 25.05	/	505.556 ± 20.518*	478.937 ± 12.419*	554.057 ± 22.106*
Occludin uttryck (pg/ml)	3.287 ± 0.683	/	4.285 ± 0.575	4.666 ± 0.582*	7.258 ± 0.774*
24 timmars sårläkningshastighet (%)	30.581 ± 1.308	70.075 ± 1.781*	40.762 ± 9.68	37.102 ± 7.038	45.173 ± 5.508*
48 timmars sårläkningshastighet (%)	55.458 ± 6.674	87.545 ± 3.155*	76.47 ± 2.684*	67.883 ± 5.678*	76.704 ± 4.8*

Notera:* kontra tom kontrollgrupp, P<0.05P < 0.05P<0.05.

 

Exempel 2: Framställning av ett Cistanche-polysackaridextrakt

[0053]Exempel 2.

[0054]Extrahera Cistanche två gånger under upphettad återflöde med 20-faldiga och 15-faldiga mängder vatten i tre timmar respektive två timmar.

Filtrera, kombinera filtraten och koncentrera vid 80 grader –90 grader.

Tillsätt 215 ml 95 % etanol för att uppnå en slutlig etanolkoncentration på 80 % och låt stå över natten vid 4 grader.

Samla upp fällningen antingen genom filtrering, bibehållande av filterkakan eller genom centrifugering vid 4 000 rpm i 10 minuter.

Tvätta fällningen tre gånger med absolut etanol och torka den vid 50 grader för att erhålla ett Cistanche-polysackaridextrakt, betecknat POL.

 

Exempel 3: Framställning av ett fenyletanoidglykosidextrakt

[0055]Exempel 3.

[0056]Extrahera Cistanche två gånger under upphettad återflöde med 20-faldiga och 15-faldiga mängder vatten i tre timmar respektive två timmar.

Filtrera, kombinera filtraten och koncentrera vid 80 grader –90 grader.

Tillsätt 215 ml 95 % etanol för att uppnå en slutlig etanolkoncentration på 80 % och låt stå över natten vid 4 grader.

Samla upp filtratet genom filtrering eller supernatanten genom centrifugering vid 4 000 rpm under 10 minuter.

Koncentrera och torka det för att erhålla ett Cistanche-fenyletanoidglykosidextrakt, betecknat POLS.

Testning visade en echinakosidhalt på 21,8 % och en verbascosidhalt på 1,2 %.

 

Exempel 4: Framställning av extrakt RE1

[0057]Exempel 4.

[0058]BlötaCistanche deserticolai sex gånger sin mängd av 52% etanol vid rumstemperatur under 10 dagar.

Filtrera och behåll växtrester.

Efter torkning, extrahera återstoden en gång under återflöde med sex gånger dess mängd av 95 % etanol under två timmar.

Filtrera, kombinera filtraten, koncentrera vid 60 grader och torka för att erhålla ett extrakt av Cistanche-fenyletanoidglykosider och deras derivat, betecknat RE1.

Extraktet innehåller beståndsdelar inklusive echinakosid, verbaskosid, isoverbaskosid och 2′-acetylverbaskosid.

 

Exempel 5: Framställning av extrakt RE2

[0059]Exempel 5.

[0060]ExtraheraCistanche tubulosatvå gånger med 75 % etanol under en timme varje gång.

Filtrera och behåll återstoden.

Efter torkning, extrahera återstoden en gång under återflöde med sex gånger dess mängd av 95 % etanol under två timmar.

Filtrera, kombinera filtraten, koncentrera vid 60 grader och torka för att erhålla ett extrakt av Cistanche-fenyletanoidglykosider och deras derivat, betecknat RE2.

Extraktet innehåller beståndsdelar inklusive echinakosid, verbaskosid, isoverbaskosid och 2′-acetylverbaskosid.

 

Exempel 6: Framställning av ett totalt fenyletanoidglykosidextrakt

[0061]Exempel 6.

[0062]Skiva Cistanche och extrahera två gånger med en 75% etanollösning i 1,5 timmar varje gång.

Kombinera extrakten, koncentrera och torka för att erhålla ett Cistanche-fenyletanoidglykosidextrakt, betecknat CTE.

Testning visade en echinakosidhalt på 22,6 % och en verbascosidhalt på 4,5 %.

 

Exempel 7: Appliceringsmetod

[0063]Exempel 7.

[0064]Baserat på exempel 1 tillhandahåller detta exempel en appliceringsmetod genom vilken verbascoside utövar effekter över hela hudbarriärens reparationssekvens av epidermal cellförnyelse → förbättrade intercellulära förbindelser → lipid-matrispåfyllning → hyaluronsyrasyntes → sårläkning.

Den specifika appliceringsmetoden är som följer.

[0065]Tillsätt verbascoside till en topisk produktbas vid en förutbestämd massfraktion och rör om jämnt för att producera en färdig produkt.

Applicera den färdiga produkten på hudytan en eller två gånger dagligen.

Genom penetrering verkar verbascoside på epidermala HaCaT-celler för att främja cellproliferation och stärka tight junctions.

Samtidigt uppreglerar det gen- och proteinuttrycket av ACC , FASN och N-SMase, ökar fettsyrasyntasaktiviteten, uppreglerar HAS2, HAS3 och CD44 och ökar hyaluronsyrahalten.

Fortsätt använda i en till fyra veckor för att uppnå en total förbättring av hudbarriären.

[0066]Specifikt sträcker sig massfraktionen av verbascoside i den aktuella produkten från 0,01 % till 5,0 %.

[0067]Använd 0,1–0,5 g av den färdiga produkten per applicering och massera försiktigt i en till tre minuter efter applicering för att främja absorptionen.

[0068]Den aktuella produkten är ett medicinskt förband, en efterbehandlingsprodukt, en tilläggsbehandlingsprodukt för atopisk dermatit, en hudvårdsprodukt speciellt avsedd för känslig hud, eller en intensiv återfuktande och reparerande hudvårdsprodukt.

[0069]Hjälpämnen kan också tillsättas under appliceringen av verbascoside.

Vidare väljs hjälpämnet från ett fuktighetsbevarande medel, ett emulgeringsmedel, ett konserveringsmedel, en doft eller ett lugnande medel.

Doseringsformen av den konstituensinnehållande kompositionen väljs från en lotion, en kräm, en gel, ett serum eller en arkmasklösning.

 

Exempel 8: Experimentellt material och utrustning

[0070]Exempel 8.

[0071]Baserat på exempel 1 och 7 är de experimentella materialen som används i uppfinningen enligt följande.

[0072]De experimentella cellerna var immortaliserade humana epidermala HaCaT-celler köpta från Shanghai Yaji Biotechnology.

Cellerna odlades i DMEM med hög glukoshalt kompletterat med 10% fetalt bovint serum och 1% penicillin-streptomycin vid 37 grader i en atmosfär innehållande 5% koldioxid vid mättad luftfuktighet.

[0073]Experimentmaterialet var:

Echinacoside, förkortat Ech, från National Institutes for Food and Drug Control, Kina.

Fetalt bovint serum, FBS, från EXCELL.

Högglukos DMEM från Gibco.

0,25% trypsin-EDTA från Gibco.

Fosfatbuffrat saltlösningspulver från Beijing Zhongshan Golden Bridge Biotechnology.

CCK-8 Cellproliferation/Cytotoxicity Assay Kit från TransGen Biotech.

Humant occludin, OCLN, ELISA Kit från Wuhan CUSABIO.

Human Claudin-1, CLDN1, ELISA Kit från Wuhan CUSABIO.

Fatty Acid Synthase, FAS, Activity Assay Kit från Solarbio.

Human Hyaluronic Acid ELISA Kit från Wuhan CUSABIO.

Rekombinant humant EGF-protein, bärarfritt, från R&D Systems.

DEPC från Amresco.

M5 HiClear DL2000 DNA-markör från Mei5 Biotechnology.

TRIzol-reagens från Ambion.

5X Allt-i-ett RT MasterMix från abm.

EvaGreen Express 2X qPCR MasterMix–Low ROX från abm.

Easy II Protein Quantitative Kit, BCA, från TransGen Biotech.

RIPA lysbuffert från Boster.

Proteashämmare från Boster.

Get Anti-Rabbit IgG H&L, HRP, från Abcam.

Get Anti-Mouse IgG H&L, HRP, från Abcam.

Förfärgad proteinmarkör från Solarbio.

-Mercaptoethanol från Amresco.

PVDF-överföringsmembran, 0,45 μm, från Millipore.

Glycin från Sangon Biotech.

Glycerol från Sangon Biotech.

SuperSignal West Pico PLUS från Thermo Fisher.

Beta-Actin Loading Control Antibody, Mouse Monoclonal, från Sino Biological.

ACC1-antikropp från Affinity.

FASN Antikropp från Affinity.

SMPD2-antikropp från Affinity.

Hyaluronan Synthase 2 Antibody, HAS2, från Affinity.

HAS3-antikropp från Affinity.

CD44-antikropp från Affinity.

[0074]Den experimentella utrustningen bestod av:

SmartCell HF-90 koldioxidcellkulturinkubator, Shanghai Lishen Scientific Equipment Co., Ltd. [上海力康仪器有限公司].

HF1200LC biologiskt säkerhetsskåp från samma tillverkare.

DK-80 låghastighetscentrifug för bänk, Shanghai Feige Instrument Co., Ltd.

Heraeus Multifuge X1R höghastighets kylcentrifug, Thermo Fisher Scientific.

xMark mikroplatta spektrofotometer, Bio-Rad.

GL-88B vortexmixer, Haimen Qilin-Bell Instrument Manufacturing Co., Ltd.

Modell 2500 gelbildsystem, Shanghai Tianneng.

MyCycler Thermal Cycler PCR-instrument, Bio-Rad.

7500 Fast Real-Time PCR-instrument, ABI.

Chemiscope 3000 kemiluminescensbildsystem, Shanghai Qinxiang Scientific Instrument Co., Ltd.

Mini-PROTEAN Tetra-system proteinöverföringsapparat, Bio-Rad.

DYCZ-24DN elektroforesapparat, Beijing Liuyi.

Översättarens anmärkning: Tillverkare och instrumentbeskrivningar ovan följer den medföljande källan; katalogdetaljer verifierades inte oberoende.

 

 

 

Exempel 9: Experimentella metoder

[0075]Exempel 9.

[0076]Baserat på exempel 1–8 var de experimentella metoderna som användes i uppfinningen enligt följande.

CCK-8 Analys för cellproliferation

[0077]Förbered en encellssuspension av HaCaT-celler i komplett odlingsmedium med en densitet av 5×1045 x 10^45×104 celler/ml.

Seed cellerna i en 96-brunnars platta med 100 μL per brunn.

Efter att ha låtit cellerna fästa i 24 timmar vid 37 grader under 5 % koldioxid, kassera odlingsmediet och administrera de olika testsubstanserna. Inkludera en tom kontrollgrupp med n=5n=5n=5.

Efter 48 timmars behandling, kassera mediet och tillsätt 100 μL nyberedd 10 % CCK-8-lösning till varje brunn.

Fortsätt inkubationen i cellkulturinkubatorn i en timme, mät sedan den optiska densiteten vid 450 nm med hjälp av en mikroplattläsare.

Analys av fettsyrasyntasaktivitet

[0078]Förbered en encellssuspension av HaCaT-celler i komplett odlingsmedium vid en densitet av 5×1045 x 10^45×104 celler/ml och ympa cellerna i odlingskolvar.

Efter att ha låtit cellerna fästa i 24 timmar vid 37 grader under 5 % koldioxid, kassera odlingsmediet och administrera de olika testsubstanserna.

Inkludera en blank kontrollgrupp och en positiv kontrollgrupp behandlade med rekombinant human epidermal tillväxtfaktor, rhEGF, vid 20 ng/ml, med n=3n=3n=3.

Efter 48 timmars behandling, samla in cellerna och mät fettsyrasyntasaktivitet enligt analyssatsens instruktioner.

Analys av hyaluronsyrainnehåll

[0079]Förbered en encellssuspension av HaCaT-celler i komplett odlingsmedium vid en densitet av 5×1045 x 10^45×104 celler/ml och ympa cellerna i odlingskolvar.

Efter att ha låtit cellerna fästa i 24 timmar vid 37 grader under 5 % koldioxid, kassera odlingsmediet och administrera de olika testsubstanserna.

Inkludera en tom kontrollgrupp och en positiv kontrollgrupp behandlad med rhEGF vid 20 ng/ml, med n=3n=3n=3.

Efter 48 timmars behandling, samla in cellkultursupernatanterna och mät hyaluronsyrahalten enligt analyssatsens instruktioner.

Kvantitativ omvänd transkriptions-PCR

[0080]Förbered en encellssuspension av HaCaT-celler i komplett odlingsmedium vid en densitet av 5×1045 x 10^45×104 celler/ml och ympa cellerna i plattor med sex brunnar.

Efter att ha låtit cellerna fästa i 24 timmar vid 37 grader under 5 % koldioxid, kassera odlingsmediet och administrera de olika testsubstanserna.

Inkludera en tom kontrollgrupp och en positiv kontrollgrupp behandlad med rhEGF vid 20 ng/ml, med n=3n=3n=3.

Efter 48 timmars behandling, kassera supernatanten och tillsätt 1 mL TRIzol till varje brunn för att lossa och lysera cellerna, och se till att reagenset täcker cellskiktet.

Omrör odlingskärlet upprepade gånger tills cellerna släpps och överför materialet till ett 1,5 ml mikrocentrifugrör.

Extrahera totalt RNA och använd qRT-PCR för att bestämma uttrycket av ACC, FASN, N-SMase, HAS2, HAS3 och CD44.

Western Blotting

[0081]Förbered en encellssuspension av HaCaT-celler i komplett odlingsmedium vid en densitet av 5×1045 x 10^45×104 celler/ml och ympa cellerna i odlingskolvar.

Efter att ha låtit cellerna fästa i 24 timmar vid 37 grader under 5 % koldioxid, kassera odlingsmediet och administrera de olika testsubstanserna.

Inkludera en tom kontrollgrupp och en positiv kontrollgrupp behandlad med rhEGF vid 20 ng/ml, med n=3n=3n=3.

Efter 48 timmars behandling, samla in cellerna.

Extrahera totalt protein och använd Western blotting för att bestämma uttrycket av ACC, FASN, N-SMase, HAS2, HAS3 och CD44.

Bedömning av Tight-Junction Protein Expression

[0082]Förbered en encellssuspension av HaCaT-celler i komplett odlingsmedium vid en densitet av 5×1045 x 10^45×104 celler/ml och ympa cellerna i odlingskolvar.

Efter att ha låtit cellerna fästa i 24 timmar vid 37 grader under 5 % koldioxid, kassera odlingsmediet och administrera de olika testsubstanserna.

Inkludera en tom kontrollgrupp med n=3n ​​= 3n=3.

Efter 48 timmars behandling, samla in cellysat och mät occludin och claudin-1 med ELISA enligt kitinstruktionerna.

Cell Scratch Assay

[0083]Förbered en encellssuspension av HaCaT-celler i komplett odlingsmedium med en densitet av 5×1055 x 10^55×105 celler/ml.

Seed 500 μL per brunn i en 24-brunnars platta.

Efter cellfästning, administrera behandlingarna, dela upp cellerna i en blank kontrollgrupp, en positiv kontrollgrupp behandlad med fetalt bovint serum och testsubstansgrupper.

Behandla i 48 timmar.

Efter behandlingen, skapa försiktigt en rak repa med en pipettspets.

Ersätt mediet med serumfritt medium i alla grupper utom den positiva kontrollgruppen.

Fotografera de repade områdena vid 0, 24 och 48 timmar.

Använd ImageJ för att beräkna reparean och bedöma cellmigreringskapacitet.

 

Exempel 10: Fuktretentionsutvärdering

[0084]Exempel 10.

[0085]En in vitro gravimetrisk metod användes för att utvärdera fuktgivande prestanda hos serum innehållande Ver, Ech eller glycerin.

Väg upp specificerade mängder av förbehandlat prov 1, innehållande 2 % Ver; Prov 2, innehållande 2% Ech; och den positiva kontrollen, innehållande 5 % glycerin.

Förvara proverna i en kammare med konstant temperatur och konstant luftfuktighet vid 25 grader och 50 % relativ luftfuktighet.

Väg proverna vid olika tidpunkter och rita kurvor för kvarhållande av fukt.

[0086]Fukthållningsgraden beräknas som:

Fuktretentionsgrad (%)=M2−M0M1−M0×100%\\text{Fuktretentionsgrad (\\%)}=\\frac{M_2-M_0}{M_1-M_0}\\times100\\%Fukthållningsgrad (%)=M1​−M0​M2​−M0​​×100 %

[0087]Där:

[0088]M0M_0M0​ är massan av den tomma plattan, i gram.

[0089]M1M_1M1​ är glasplattans massa efter provtillsats, i gram.

[0090]M2M_2M2​ är massan efter lagring i en exsickator i flera timmar, i gram.

Översättarens anmärkning: Paragraf [0085] beskriver lagring i en kammare med kontrollerad temperatur och kontrollerad fuktighet, medan [0090] hänvisar till en exsickator. Båda beskrivningarna är behållna från källan.

 

Experimentella resultat

[0091]De experimentella resultaten av detta exempel är följande.

Effekter på HaCaT-cellproliferation

[0092]Som visas i figur 2 hade olika Cistanche-extrakt olika effekter på HaCaT-cellviabiliteten.

Ver och POL ökade cellviabiliteten signifikant, med P<0.05P < 0.05P<0.05, and Ver produced the highest viability.

Effekter på fettsyrasyntasaktivitet

[0093]Som visas i figur 3 är intercellulära lipider i stratum corneum kärnan i "bruk"-komponenten i hudens "tegel-och-bruk"-struktur.

Ceramider, kolesterol och fria fettsyror bildar en tät lamellär dubbelskiktsstruktur i specifika proportioner.

Att upprätthålla normal lipidsyntes kan förstärka denna struktur, förhindra vattenförlust, motstå yttre skador, upprätthålla balansen i hudmikrobiomet och främja självreparation.

Det kan därigenom ta itu med torrhet, känslighet och minskad hudförsvarskapacitet vid källan.

[0094]Fettsyrasyntas beskrivs som ett kärnhastighetsbegränsande enzym och en central försörjningsmotor som reglerar hudens lipidsyntes.

Dess huvudsakliga funktion är att katalysera syntesen av palmitinsyra, C16:0, från acetyl-CoA och malonyl-CoA. Palmitinsyra beskrivs som den huvudsakliga endogena långkedjiga mättade fettsyran i huden.

Palmitinsyra har två funktioner.

För det första, som en grundläggande strukturell byggsten, används den direkt i syntesen av stratum-corneum-barriärlipider, inklusive ceramider och fria fettsyror, vilket ger den materiella basen för bildning av lamellärt dubbelskikt.

För det andra, som en viktig prekursor och signalmolekyl, kan den vidarebearbetas av nedströms elongaser, såsom ELOVL1, till mycket långkedjiga fettsyror. Dessa distinkta fettsyror krävs för barriärintegritet.

Följaktligen bestämmer fettsyrasyntasaktiviteten direkt tillgången på råvaror som är tillgängliga för hudens egen produktion av barriärlipider.

Uppreglering av dess funktion är ett första och kritiskt steg för att främja epidermal lipidsyntes och därigenom reparera och stärka den fysiska hudbarriären, vilket i slutändan stöder fuktretention och försvar.

[0095]Data visade att den positiva kontrollen rhEGF och Ver signifikant ökade fettsyrasyntasaktiviteten, med P<0.05P < 0.05P<0.05.

POL, POLS, RE1 och RE2 ökade inte fettsyrasyntasaktiviteten.

Although RE2 increased fatty acid synthase activity, the difference was not statistically significant, with P>0.05P > 0.05P>0.05.

Översättarens anmärkning: Källan inkluderar först RE2 bland material som inte ökade aktiviteten och rapporterar sedan en icke-signifikant ökning för RE2. Denna inkonsekvens bibehålls.

 

Effekter på innehållet av hyaluronsyra

[0096]Som visas i figur 4 är hyaluronsyra en naturligt förekommande polysackarid i huden med en stark vattenbindande förmåga, beskriven i källan som huvudsakligen närvarande i dermis och stratum corneum.

Ökat hyaluronsyrainnehåll kan behålla fukt på djupare nivåer, bibehålla en hälsosam hudstruktur, ge antioxidanter och antiinflammatoriska effekter, främja sårläkning och reparation och förbättra stratum-corneum-funktionen.

Dessa effekter beskrivs som att de producerar återfuktning, fyllighet och motståndskraft inifrån.

[0097]Data visade att den positiva kontrollen rhEGF, Ver och RE2 signifikant ökade hyaluronsyrahalten, med P<0.05P < 0.05P<0.05.

POL, POLS och RE1 ökade inte hyaluronsyrahalten.

 

Jämförelse av extraktklasser och renad verbascoside

[0098]Cistanche innehåller huvudsakligen fenyletanoidglykosider och polysackarider.

Aktiviteterna av polysackaridextraktet, POL; fenyletanoidglykosidextrakt, POLS, RE1 och RE2; och verbascoside, Ver, jämfördes därför.

Resultaten i figurerna 2–4 ​​indikerar att Cistanche-fenyletanoidglykosidextrakt framställda med olika metoder och den enskilda föreningen uppvisade olika aktiviteter för att främja HaCaT-cellproliferation, ökad fettsyrasyntasaktivitet och öka hyaluronsyrahalten.

Endast Ver uppvisade aktivitet i alla tre områdena, som sammanfattas i tabell 1.

[0099]–[0101] Dessa styckenummer och innehållet i Tabell 1 fanns inte i den medföljande källan. Ingen översättning eller rekonstruktion är möjlig för det saknade materialet.

Tabell 1. Sammanfattning av bioaktivitet av olika prover

Index	Tom kontroll	Positiv kontroll	POL	POLS	RE1	RE2	Ver
Cellviabilitet (%)	100 ± 7.008	/	119.008 ± 7.379*	105.312 ± 6.494	85.851 ± 8.381	95.234 ± 10.065	128.894 ± 9.528*
FAS-aktivitet (U/mg prot)	2.712 ± 0.419	18.488 ± 4.56*	3.786 ± 1.715	2.399 ± 0.717	2.145 ± 0.889	9.34 ± 10.756	10.63 ± 2.228*
HA-innehåll (ng/ml)	10.908 ± 0.968	19.925 ± 4.306*	6.881 ± 2.411	6.321 ± 1.021	6.53 ± 1.342	16 ± 2.531*	17.86 ± 3.27*

 

Ytterligare jämförelse av CTE, Echinacoside och Verbascoside

[0102]Såsom visas i figur 5 inkluderar de huvudsakliga fenyletanoidglykosiderna i Cistanche echinakosid och verbaskosid.

Effekterna av Cistanche total fenyletanoid glykosid extrakt, CTE, innehållande 22,6% echinacoside och 4,5% verbascoside; echinacoside, Ech; och verbascoside, Ver, på HaCaT-cellproliferation jämfördes därför ytterligare.

[0103]Data visade att CTE, Ech och Ver alla främjade HaCaT-cellproliferation.

CTE och Ver gav de starkaste effekterna, vilket tyder på skyddande effekter på hudceller.

Ytterligare effekter på fettsyrasyntasaktivitet

[0104]Såsom visas i figur 6 var effekterna på fettsyrasyntasaktivitet som följer.

[0105]Data visade att den positiva kontrollen rhEGF, Ech och Ver signifikant ökade fettsyrasyntasaktiviteten, med P<0.05P < 0.05P<0.05.

CTE ökade inte fettsyrasyntasaktiviteten.

 

Uttryck av gener och proteiner associerade med fettsyrasyntes

[0106]Figurerna 7–9 visar effekterna på uttrycket av gener och proteiner associerade med fettsyrasyntes.

[0107]ACC och FASN beskrivs som det hastighetsbegränsande enzymet och kärnmotorn för lipidanabolism.

Tillsammans katalyserar de bildningen av långkedjiga fettsyror, inklusive palmitinsyra, och tillhandahåller viktiga råmaterial för syntesen av viktiga barriärlipider som ceramider.

N-SMase är en nyckelinitiator för lipidnedbrytning och stresssignalering med en dubbel roll.

Det aktiveras under skada och hydrolyserar sfingomyelin för att generera signalceramider, utlöser inflammation och apoptos och undertrycker normal lipidsyntes.

I normala celler har den emellertid en reglerande roll i lipidmetabolismen.

[0108]Som visas i figurerna 7–9 indikerade qPCR- och Western blot-resultat att Ver, liksom rhEGF, signifikant uppreglerade genen och proteinuttrycket av ACC , FASN och N-SMase, med P<0.05P < 0.05P<0.05, and the effects were comparable.

Resultaten indikerar att Ver uppreglerar ACC och FASN för att reglera cellulär lipidsyntes för membrankonstruktion, energilagring eller utsöndring.

Samtidigt kan uppreglering av N-SMase aktivera sfingolipidmetabolisk cykling.

De producerade ceramiderna är inte bara stresssignaler. Under normala fysiologiska förhållanden är de också viktiga prekursorer för syntesen av andra komplexa sfingolipider, såsom glykosfingolipider, eller för dynamisk membranombyggnad.

Således förbättrar koordinerad uppreglering av dessa tre gener och proteiner den totala cellulära anabola aktiviteten och membranombyggnadskapaciteten.

 

Ytterligare effekter på innehållet av hyaluronsyra

[0109]Som visas i figur 10 indikerade data att rhEGF, CTE, Ech och Ver alla signifikant ökade hyaluronsyrahalten, med P<0.05P < 0.05P<0.05.

Effektordningen var CTE, följt av Ver, följt av Ech.

 

Uttryck av gener och proteiner associerade med hyaluronsyrasyntes

[0110]Som visas i figurerna 11–13 bildar HAS2, HAS3 och CD44 en "syntes–avkänning–respons" återkopplingsslinga i hyaluronsyrametabolism i HaCaT-celler.

HAS2 och HAS3 är kärnenzymerna för katalytisk syntes.

HAS2 producerar främst hyaluronsyra med hög molekylvikt och är associerad med att upprätthålla hudens homeostas och antiinflammatoriska effekter.

HAS3 tenderar att producera hyaluronsyra med lägre molekylvikt och deltar mer direkt i processer inklusive cellmigration och proliferation.

CD44 är den huvudsakliga cellytreceptorn för hyaluronsyra.

Det förmedlar inte bara intracellulär och extracellulär signalöverföring som involverar hyaluronsyra utan reglerar också dynamiskt hyaluronsyra genom endocytos och återvinning och reglerar i sin tur HAS2 och HAS3 uttryck och aktivitet.

[0111]Som visas i figurerna 11–13 indikerade qPCR- och Western blot-resultat att Ver, liksom rhEGF, signifikant uppreglerade genen och proteinuttrycket av HAS2, HAS3 och CD44, med P<0.05P < 0.05P<0.05.

De reglerande effekterna av Ver på HAS2-, HAS3- och CD44-genuttryck var större än för rhEGF.

Resultaten indikerar att Ver reglerar HAS2, HAS3 och CD44 för att kontrollera hela hyaluronsyraprocessen "syntes–montering–signalöverföring", vilket bidrar till epidermal hydrering, reparation och barriärfunktion.

Effekter på Tight-Junction Protein Expression

[0112]Att upprätthålla hudens lipid- och hyaluronsyraproduktion beskrivs som att ge grundläggande, synergistiskt stöd för och stabilisering av tight-junction-proteiner mellan HaCaT-celler.

Tillräckliga lipider tillåter keratinocyter att bilda kompletta, organiserade intercellulära lipiddubbelskikt.

Dessa strukturer beskrivs inte bara som det fysiska ramverket av barriären utan också som en stabil, hydrofob strukturell miljö för sammansättning och förankring av tight-junction protein.

At the same time, the favorable hydration state maintained by hyaluronic acid helps ensure normal keratinocyte metabolism and signaling.

Genom vägar som involverar receptorer som CD44 reglerar hyaluronsyra också indirekt uttryck och distribution av tight-junction proteiner.

Tillsammans ger lipider och hyaluronsyra de fysiska och biokemiska grunderna som behövs för tight-junction bildning och underhåll ur respektive perspektiv av strukturell stabilitet och mikromiljömässig homeostas.

De stärker därigenom fysiska intercellulära förbindelser och övergripande barriärintegritet.

[0113]Ovanstående resultat indikerade att Ver uppvisade den starkaste aktiviteten för att främja hudlipid- och hyaluronsyraproduktion.

Ytterligare undersökningar av dess effekter på intercellulära tight junctions visade att CTE, Ech och Ver alla signifikant främjade uttrycket av tight-junction-proteinet claudin-1, med P<0.05P < 0.05P<0.05, as shown in Figure 14.

Såsom visas i figur 15 främjade endast Ech och Ver signifikant occludinexpression.

Effekten av Ver var betydligt större än Ech, med P<0.05P < 0.05P<0.05.

Detta överensstämde med den starkaste aktiviteten som tillskrivs Ver för att främja hudlipid- och hyaluronsyraproduktion.

 

Effekter på sårläkning

[0114]Som visas i figurerna 16–17 deltar HAS3 direkt i processer inklusive cellmigrering och proliferation.

CD44 överför information från hyaluronsyra till celler och reglerar i slutändan cellmigration, proliferation och hydrering, och spelar en central roll i sårläkning, hudfuktning och barriärhomeostas.

De föregående experimenten visade att verbascoside signifikant främjade HAS3- och CD44-uttryck.

Dess förmåga att främja sårläkning undersöktes därför ytterligare.

[0115]Som visas i figurerna 16–17 indikerade resultaten att CTE, Ech och Ver alla främjade sårläkning.

Endast Ver visade dock en signifikant främjande effekt efter 24 timmar.

Den uppvisade den starkaste sårläkningsfrämjande aktiviteten, i överensstämmelse med dess betydande främjande av HAS3-gen- och proteinuttryck.

Redaktionell kvalifikation: Den experimentella metoden som tillhandahålls för detta resultat är en cellskrapsanalys. "Sårläkning" är den terminologi som används i källan och ska inte tolkas här som ett påvisat kliniskt resultat.

 

Fukthållande prestanda hos formuleringarna

[0116]Som visas i figur 18 utvärderades provets fuktbevarande förmåga från trenderna i fuktbevarande kurvorna för att utvärdera fuktgivande prestanda för huden.

Data visade att fuktretentionskurvan för prov 1 var över de för prov 2 och den positiva kontrollen.

Under förhållanden med 25 grader och 50 % relativ fuktighet hade prov 1 bättre fuktgivande prestanda än prov 2 och 5 % glycerinkontroll, vilket indikerar den starkaste fuktgivande prestandan.

Prov 1 innehöll Ver och prov 2 innehöll Ech.

Enligt källan indikerar dessa resultat att Ver, när den ingår i produkter, har bättre homogenitet och fuktgivande aktivitet än Ech, som sammanfattas i tabell 2.

[0117]Tabell 2. Sammanfattning av aktiviteterna för olika prover.

Tabellinnehållet ingick inte i den medföljande källan.

[0118]Obs: [Betydningssymbolen återgavs inte i den medföljande texten.] Jämfört med den tomma kontrollgruppen, P<0.05P < 0.05P<0.05.

 

Övergripande tolkning som presenteras i avslöjandet

[0119]Ovanstående resultat indikerar att verbascoside uppvisar enastående fuktgivande aktivitet genom att exakt aktivera en komplett, sluten slinga hudbarriärreparationsmekanism.

Det verkar först på basalskiktet för att signifikant accelerera epidermal cellförnyelse och ordnad differentiering, vilket ger tillräckligt med cellulära byggstenar för barriärkonstruktion.

Det främjar sedan förstärkningen av täta förbindelser och desmosomala strukturer mellan keratinocyter, förstärker fysisk förankring mellan celler och ökar barriärdensiteten och mekanisk styrka.

Samtidigt aktiverar det effektivt viktiga enzymer i lipidmetabolismen och fyller på den intercellulära lipidmatrisen, fyller "mortel"-utrymmena mellan "tegelstenarna" för att förhindra vattenförlust.

Slutligen, genom att uppreglera uttrycket av hyaluronsyrasyntas, ökar det samtidigt hyaluronsyrahalten i dermis och epidermis, och fångar upp och håller kvar avsevärda mängder vatten.

Detta bildar en komplett funktionsslinga som omfattar förnyelse vid källan, strukturell förstärkning, matrispåfyllning och vattenlagring.

Det kan därigenom uppnå en sluten sekvens av "främja cellproliferation → stärka fysiska intercellulära förbindelser → främja lipid- och hyaluronsyraproduktion → främja sårläkning."

Källan drar slutsatsen att det ger bättre appliceringseffekter än echinakosid från Cistanche och det vanliga fuktbevarande medlet glycerin och kan användas som ett hudskyddande medel i funktionell hudvård och topikala produkter.

[0120]De föregående beskrivningarna är endast specifika utföringsformer av uppfinningen.

Skyddsomfånget för uppfinningen är inte begränsat till dessa utföringsformer.

Eventuella ändringar eller ersättningar som en fackman inom området lätt kan tänka sig inom det tekniska omfånget som beskrivs i uppfinningen ska falla inom skyddsomfånget för uppfinningen.

Följaktligen ska skyddsomfånget för uppfinningen bestämmas av patentkraven.