Cistanche-polysackarider hämmar prostatacancercellproliferation och framkallar apoptos via ROS-generering och antioxidantgenundertryckning

Abstrakt:
Mål:Att undersöka effekterna och bakomliggande mekanismerna förCistanche polysackariderom spridning och apoptos avprostatacancerceller.

Metoder:
Humana prostatacancer DU145-celler behandlades med låga, medelhöga och höga koncentrationer avCistanche polysackarider(20, 40 respektive 80 mg/ml). Cellproliferation utvärderades med användning avMTT-analys, och apoptos bedömdes avflödescytometri. Intracellulärreaktiva syrearter (ROS)nivåerna mättes via flödescytometri, medanglutation (GSH)nivåer bestämdes med hjälp avELISA. MRNA- och proteinuttrycksnivåerna förglutamat-cysteinligas katalytisk subenhet (GCLC), glutamat-cystein ligas modifierande subenhet (GCLM), ochtioredoxinreduktas 1 (TXNRD1)analyserades avRT-PCRochWestern blot, respektive.

Resultat:
Den halvmaximala inhiberande koncentrationen (IC50) avCistanche polysackariderpå DU145-celler var 40,35 mg/ml, sålunda valdes 40 mg/ml som medeldos för efterföljande experiment. De låga, medelhöga och höga doserna definierades som 50 %, 100 % respektive 200 % av IC50.

Alla behandlingsgrupper visade signifikant ökade apoptosfrekvenser jämfört med kontrollgruppen. Dehögdos Cistanche-gruppenuppvisade den största hämningen av cellproliferation och den högsta apoptoshastigheten, följt av medel- och lågdosgrupperna (P< 0,01). ROS-nivåerna var signifikant förhöjda och GSH-nivåerna var signifikant reducerade i allaCistanche-behandlade grupperkontra kontroll. Särskilt denhögdosgrupphade markant högre ROS och lägre GSH-nivåer än medel- och lågdosgrupperna (P< 0,05); medeldosgruppen visade liknande skillnader jämfört med lågdosgruppen (P< 0,05).

Uttrycksnivåer avGCLC, GCLM, ochTXNRD1(både mRNA och protein) var signifikant nedreglerade i alla Cistanche-behandlade grupper jämfört med kontroll (P< 0,05). Dehögdosgruppvisade det mest signifikanta undertryckandet av dessa antioxidantrelaterade gener och proteiner, följt av medel- och lågdosgrupperna (P< 0,05).

Slutsats:
Cistanche polysackariderhämma uttrycket av antioxidantfaktorerGCLC, GCLM, ochTXNRD1, och därmed minskaGSH-syntes, främjandeROS-ackumuleringoch slutligen framkallandeapoptos i prostatacancerceller. Dessa fynd tyder på detCistanchekan fungera som ennaturligt terapeutiskt medelför prostatacancer viaoxidativ stress-medierade mekanismer.

Cistanche tubulosa-

Cistancheextrakt med höga polysackarider

Köp nu

Supporttjänst från Wecistanche-The Kontakta oss för att få ett grossistpris
E-post:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/Tel:+86 15292862950

Bakgrund och metoder

Prostatacancerstår för ungefär7,1 % av alla maligniteter hos män, med maximal incidens efter 60 års ålder. När Kinas befolkning fortsätter att åldras, förväntas incidensen av denna sjukdom öka ytterligare [1]. Studier tyder på att den höga förekomsten av prostatacancer hos äldre män kan vara relaterad tilldegenerativa förändringar i prostata, genetisk predisposition, kostvanor, ochlivsstilsfaktorer [2].

Kirurgisk resektionförblir en stöttepelare i behandling av prostatacancer, som syftar till att ta bort det mesta av tumörmassan. Det är dock förknippat med betydande komplikationer, som t.exurininkontinens, sexuell dysfunktionoch mest kritiskt,tumörrecidiv och metastaser, som är viktiga orsaker till dålig prognos [3].

På senare år harTraditionell kinesisk medicin (TCM)har fått allt större uppmärksamhet för sin roll i cancerterapi. TCM kan hjälpaöka immuniteten, motverka kemoterapi/strålbehandlingsbiverkningar, ochförbättra avgiftning. Vissa medicinska örter uppvisar ocksådirekta antitumöregenskaper, inklusive hämning av tumörtillväxt ochinduktion av apoptos i cancerceller [4].

Bland dessa,Cistanche (Cistanche deserticola)är en traditionell tonic ört känd för sinimmunmodulerande, antioxidativt, ochantitumöreffekter. Dess huvudsakliga bioaktiva komponenter ärpolysackariderochfenyletanoidglykosider. Denna studie undersöker effekterna och den bakomliggande mekanismen förCistanche polysackariderpåproliferation och apoptos av prostatacancer DU145-celler.

Buy Cistanche With 25 Echinacoside and 9 Acteoside

1. Material och metoder

1.1 Huvudmaterial och reagenser

DU145 mänskliga prostatacancercellererhölls från Tongpai Biotech (Shanghai, Kina).

Cistanche polysackarider(Satsnummer: 0287181) köptes från Weikeqi Bio Co., Ltd. (Sichuan, Kina).

Fetalt bovint serum, penicillin/streptomycin, ochDMEMtillhandahölls av Zeta Life (USA).

MTT-analys, Annexin V/PI apoptoskit, RIPA lysbuffert, BCA protein kvantifiering kiterhölls från Elabscience (Shanghai, Kina).

Detektionssats för reaktiva syrearter (ROS).ochGSH ELISA kitköptes från BioLab (Shanghai, Kina).

Trizol-reagens, kit för omvänd transkription, ochPCR-kithämtades från NeuroSym (Hangzhou, Kina).

Antikroppar motGCLC, GCLM, TXNRD1, -aktinoch motsvarande sekundära antikroppar köptes från UnivBio (Shanghai, Kina).

cistanche deserticola

1.2 Cellodlings- och proliferationsanalys

DU145-celler odlades iDMEM kompletterat med 10 % FBS och 1 % penicillin/streptomycini en CO₂-inkubator. För denMTT-analysDU145-celler i logaritmisk fas såddes i 96-brunnars plattor och behandlades medCistanche polysackaridlösningarvid koncentrationer av10, 20, 40 och 80 mg/ml. Kontrollgruppen fick endast DMEM-medium.

Efter 24 timmars behandling,20 µL 5 mg/ml MTTsattes till varje brunn och inkuberades i 4 timmar. Supernatanten avlägsnades och150 µL DMSOlades till. Efter skakning i 10 minuter mättes absorbansen vid490 nmmed hjälp av en mikroplattläsare. DeIC50beräknades, och20, 40 och 80 mg/mlvaldes ut somlåga, medelstora och höga doserför efterföljande experiment. Decellproliferationsinhiberingshastighetberäknades som:
Hämningshastighet (%)=(OD_control - OD_treated) / OD_control × 100

cistanche coffee

1.3 Apoptosanalys

Log-fas DU145-celler behandlades med olika koncentrationer avCistanche polysackariderenligt grupperingar. Efter fixering och färgning,Annexin V-FITCochPIanvändes för att märka apoptotiska celler.Flödescytometriutfördes för att detektera fluorescenssignaler och procentandelen apoptotiska celler registrerades.

1.4 Detektion av intracellulära ROS- och GSH-nivåer

ROS-nivåer mättes med hjälp av enROS fluorescensproboch flödescytometri. GSH-nivåer kvantifierades med användning avELISA. En standardkurva framställdes med användning av kända koncentrationer av GSH-standarder, och absorbansen mättes för att beräkna GSH-koncentrationer i prover.

1,5 RT-PCR för mRNA-uttryck av GCLC, GCLM, TXNRD1

Totalt RNA extraherades med användning avTrizoloch cDNA syntetiserades. PCR utfördes med användning av specifika primrar:

GCLC:

Forward: 5'-GTCGGTGTCAAAATACGGAGTTCCA-3'

Omvänd: 5'-CGTGACGAGGACTGCGTGCATGGAT-3'

GCLM:

Forward: 5'-CCGATGACGCCATAAACGTCCGTAGC-3'

Omvänd: 5'-GGCTAAGCGTACGTAGTACGCAACGTA-3'

TXNRD1:

Forward: 5'-TGACAGTCCTACCGTACGTAGAATGCC-3'

Omvänd: 5'-ATAATGCGTAGGGATGCGCTAGCAATGG-3'

-aktin (intern kontroll):

Forward: 5'-TTAGGCGCGATGCAGTCAGATAAGC-3'

Omvänd: 5'-ATCGACGTACGTACGGACGCGATAG-3'

Förstärkningsförhållanden: 95 grader i 60 sekunder, följt av 30 cykler med 95 grader i 30 sekunder, 60 grader i 30 sekunder och 72 grader i 60 sekunder. PCR-produkter analyserades avgelelektroforesoch relativt genuttryck normaliserades till-aktin.

1.6 Western blotting för proteinuttryck

Totalt protein extraherades med användning avRIPA buffertoch proteinkoncentrationen bestämdes avBCA-analys. Proteiner separerades medSDS-SIDA, överförs tillPVDF-membran, blockerades och inkuberades över natten vid 4 grader med primära antikroppar motGCLC, GCLM, TXNRD1, och-aktin. Efter inkubation medHRP-konjugerade sekundära antikroppar, visualiserades band med användning avkemiluminescensoch kvantifieras avImageJ programvara.