Effekter av 2-aminoindan-2-fosfonsyrabehandling på ackumuleringen av salidrosid och fyra fenyletanoidglykosider i suspensionscellskulturen hos Cistanche Deserticola

för mer information:ali.ma@wecistanche.com

Gao Sheng Hu, et al

Abstrakt

2-Aminoindan-2-fosfonsyra (AIP), en specifik kompetitiv fenylalanin-ammoniaklyas (PAL)-hämmare applicerades på en suspensionscellkultur avCistanche deserticola. Effekterna av AIP-behandling på celltillväxt, PAL-aktivitet, innehåll och utbyte av total fenolförening, salidrosid och fyraFenyletanoidglykosider(PheGs) undersöks. Resultaten visade att {{0}}.5 och 2.0 lM AIP-behandlingar hade liknande effekter på de mätningar som undersökts i denna studie. AIP-behandling resulterade i betydande minskningar av PAL-aktivitet, innehåll av totalfenolföreningar och(fenyletanoidglykosider)PheGs innehåll. Linearregressionsanalys visade att PAL-aktivitet hade en hög korrelationskoefficient med det totala innehållet av fenolföreningar och de fyra(fenyletanoidglykosider)PheGs innehåll. Total PAL-aktivitetstidsarea under kurvan (AUC) hade en hög korrelationskoefficient med det totala utbytet av fenolföreningar och de gav av fem testade föreningar i obehandlade cellprover. I AIP-behandlade celler bibehöll total PAL-aktivitetstid AUC en hög korrelation med totalt utbyte av fenolföreningar och utbyten av tre testade föreningar, echinakosid, akteosid och tubulosid A, men inte salidrosid och cistanosid A. Skillnaden kan orsakas av de olika biosyntetiska ursprungen för var och en av de testade föreningarna. Dessa resultat visar PAL:s viktiga roll i biosyntesen av(fenyletanoidglykosider)PheGs i suspensionscellkulturen avCistanche deserticola.

Nyckelord

Cistanche deserticola, Suspensionscellkultur,Fenyletanoidglykosider, 2-aminoindan-2-fosfonsyra (AIP), PAL-aktivitet, biosyntes, salidrosid

Klicka för att Cistanche extrahera fördelar och Cistanche produkter

Introduktion

Cistanche deserticolaYC Ma, en traditionell kinesisk medicinalört, har använts i århundraden i Kina för sina närande effekter. Det är ett flerårigt ändamål och en parasitisk medicinsk ört som tillhör släktet Cistanche i familjen Orobanchaceae. Växten växer i ökenområden i västra Kina och är en parasit på rötterna av Haloxylosammodendrun.

De kemiska beståndsdelarnas isolering och strukturell belysningsstudier avCistanche deserticolabörjade på 1980-talet (Kobayashi et al. 1984a, b, 1985, 1986; Karasawa et al. 1986; Xiong et al. 1996). Demonstrationen avfenyletanoidglykosider(PheGs) som effektiva föreningar som skyddar neuronceller från skador (Sheng et al. 2002; Puet al. 2003; Geng et al. 2004; Tian och Pu. 2005) orsakade av kemikalier och åldrande, drev på ökningen av marknadens efterfrågan på kommersiellt tillgänglig hälsokost och droger. På grund av överskörd, korruption av livsmiljöer och komplex parasitism, naturresursernaCistanche deserticolaär på randen av utrotning och, 2003, listades i konventionen om internationell handel med utrotningshotade arter av vilda djur och växter (CITES).

För att lösa problemen relaterade till begränsade resurser genomfördes cell- och vävnadskulturer av denna medicinalväxt i Kina. Dessa studier undersökte effekterna av olika faktorer inklusive osmotisk stress (Liu och Cheng 2008), prekursormatning (Ouyang et al. 2005; Liu et al. 2007), ljus av varierande våglängd (Ouyang et al. 2003a), svampanvändare (Lu). och Mei 2003; Cheng et al. 2005, 2006), andabiotiska framkallare (Ouyang et al. 2003b) om celltillväxt och ackumulering av(fenyletanoidglykosider)PheGs. Dessa studier gav värdefull information för den storskaliga kulturenCistanche deserticola.Hur dessa föreningar biosyntetiseras i Cistancheceller är fortfarande oklart och lite genetisk information har rapporterats.

Det har visats i isotopmärkta prekursor-utfodringsexperiment (Ellis 1983; Saimaru och Orihara 2010) att caffeoylgruppen av akteosid härrörde från L-fenylalanin, medan 3, 4-dihydroxylfenyletanol-tyrosin härleddes. En hypotetisk biosyntetisk väg av(fenyletanoidglykosider)PheGs inCistanche deserticolaföreslogs (kompletterande fig. 1) baserat på den nuvarande kunskapen om relaterade biosyntetiska vägar. PAL-enzymet katalyserade det första steget från fenylalanin till koffeoylgruppen. PAL visade sig indirekt vara ett viktigt enzym i biosyntesen av(fenyletanoidglykosider)PheGs av elicitor behandlingsforskning iCistanche deserticola(Lu och Mei 2003; Cheng et al. 2005, 2006; Ouyang et al. 2003b), där den totala(fenyletanoidglykosider)PheGs-ackumulering förbättrades tillsammans med ökad PAL-aktivitet. Elicitorbehandling kommer inte bara att förbättra uttrycksnivån av PAL utan kommer också att förbättra nivåerna av andra enzymer som är involverade i biosyntesvägen för sekundära metaboliter. På grund av svårigheterna med att inrätta omvandlingssystemet förCistanche deserticola, direkt bevis för PAL-överuttryck på(fenyletanoidglykosider)PheG-ackumulering har inte rapporterats. I andra anläggningar som producerar(fenyletanoidglykosider)PheGs, som Echinacea-släktets växter, har experimentet inte heller genomförts. Här rapporterar vi effekterna av den PAL-specifika hämmaren 2-aminoindan-2-fosfonsyrabehandling på celltillväxt, totala fenoliska föreningar, PAL-aktivitet och ackumulering av(fenyletanoidglykosider)PheGs i suspensionscellkultur avCistanche deserticola, i ett försök att utvärdera den funktionella rollen av PAL i biosyntesen av PheGs. Att studera biosyntesvägen för(fenyletanoidglykosider)PheGs på molekylär nivå har vi klonat och karakteriserat CdPAL1-genen från kallus avCistanche deserticola(Hu et al. 2010). Vi försöker etablera transformationssystemet för Echinaceaplants som medieras av Agrobacterium rhizogenes och introducera genen i Echinacea hårrot för att studera de direkta effekterna av överuttryck av denna gen på ackumuleringen av PheGs. Dessutom har vi också klonat flera gener involverade i den biosyntetiska vägen för PheGs frånCistanche deserticolakallus som använder cDNA-biblioteksscreening och RACE PCR, såsom tyrosinas, cinnamylalkoholdehydrogenas, tyrosindekarboxylas, cinnamat-3-hydroxylas, kumarat-4-hydroxylas; UDP-glukosyltransferas och Hydroxylcinnamyltransferas. Vi kommer att göra ytterligare experiment inklusive molekylär karakterisering, uttrycksanalys, överexpressionslinjer av Echinaceahairy rot för att belysa den biosyntetiska vägen för PheGson på molekylär nivå.

Material och metoder

Suspensionscellkultur av C. deserticola

En suspensionscellkultur avCistanche deserticolabibehölls i B5 (Gamborg et al. 1968) flytande media kompletterat med 30 g sackaros-l-1, 0,5 mg 6-BA-l-1 och 2,0 mgNAA l-1 vid 25 ± 1 grad med skakning (180 rpm). Ljusperioden var 16 (L)/8 (D) och suspensionscellkulturen sub-odlades var 28:e dag. Under subkulturen filtrerades suspensionscellkulturen först i en ren bänk med autoklaverad Mira-duk och sedan vägdes den färska cellpelleten och inokulerades i nytt medium vid en koncentration av 2 g FW-50 ml-1.

Tillväxtutredning

Celltillväxt mättes huvudsakligen genom cell färskvikt (FW) och torrvikt (DW). Cellkulturer togs på den 2:a, 4:e, 8:e, 12:e, 17:e, 22:a och 28:e dagen och filtrerades med vakuumfiltrering med Mira-tyg tills ingen mer vätska föll från tratten. Cellpelleten vägdes och registrerades som FW. Hälften av de uppsamlade färska cellerna lagrades vid -78 C för en aktivitetsanalys och den andra hälften torkades vid 60 C under 24 timmar tills en konstant vikt observerades. De torkade cellerna kyldes i adesickator till rumstemperatur och vägdes sedan. Denna vikt multiplicerades med två och registrerades som DW. De torkade cellproverna maldes till ett fint pulver (80 mesh sikt genom 100 procent), placerades i bruna rör, förseglades och lagrades vid -20 grad för framtida experiment.

Extraktion och innehållsbestämning av totalfenoliska föreningar

Trettio milligram torkat cellpulver av varje prov extraherades med användning av 400 1 80-procentig metanol vid 37 C under 1 timme med en skakhastighet av 200 rpm följt av centrifugering. Supernatanten överfördes till ett nytt rör och skräpet extraherades två gånger till med användning av samma procedur. Supernatanten kombinerades, filtrerades och användes för bestämning av totalt innehåll av fenolföreningar och HPLC-analys (Hu 2007).

Innehållet av totala fenolföreningar analyserades med användning av en modifierad Folin-Ciocalteu-metod (Singletonet al. 1999). Folin-Ciocalteu-reagenset späddes med 1 volym destillerat vatten. Det erhållna extraktet späddes ut gånger och 10 1 av extraktet användes i varje innehållsanalys. Tio mikroliter av varje utspätt extrakt sattes till en 200 1 nyberedd 2-procentig natriumkarbonatlösning. Blandningen blandades kraftigt och följdes av kortcentrifugering. Blandningen inkuberades vid RT under 5 minuter och blandades därefter med 10 1 utspätt Folin-reagens. Den slutliga blandningen blandades kraftigt och inkuberades vid RT under 30 minuter. OD750 mättes i UV/Vis-spektrofotometer och registrerades för beräkning av totala fenoliska föreningar. Den seriella klorogensyralösningen användes som standardförening och en standardkurva mellan mängden klorogensyra och OD750 bereddes för att beräkna det representativa innehållet av totalfenolföreningar som klorogensyra. Med hjälp av innehållet av den totala fenolföreningen och tillväxtdata för prover, beräknade vi utbytet av den totala fenolföreningen i varje prov och uttryckte hur många milligram av den totala fenolföreningen som produceras i en kull (mg L-1).

AIP-behandling

AIP-stamlösning framställdes med användning av destillerat vatten för att nå en slutkoncentration av 4 mM. En lämplig volym stamlösning sattes till 50 ml av mediet för att erhålla slutkoncentrationer av 0,5 och 2,0 1M. Medier autoklaverades och inokulerades med nyligen uppsamlade celler. Tredubbla kolvar inokulerades med celler som samlats in från samma flaska och användes i alla grupper för att minimera det systematiska felet.

HPLC-analys

Extrakt erhållna i "Extraktion och innehållsbestämning av totala fenolföreningar" filtrerades genom ett 0,5 lm filter före HPLC-analys. HPLC-analys utfördes med en Hitachi HPLC (L-2130-pump, L-2420UV/Vis-detektor och L-2200 autosampler) med en C18-kolumn (150 9 4.6 mm, 5 lm, vatten), mobil fas (MeOH/H2O gradienteluering), och en detektionsvåglängd på 330 och 220 nm för detektion av(fenyletanoidglykosider)PheGs och salidroside, respektive. Tio mikroliter av varje standardblandning och provextrakt injicerades i kolonnen. Innehållsbestämningar av echinakosid, akteosid, cistanosid A, tubulosid A och salidrosid utfördes med hjälp av standardkurvan för varje referensförening. Salidrosid och echinakosid köptes från National Institute for Control of Pharmaceutical andBiological Products (Peking, Kina) och Dr. Nobuhisa Ezaki från Yomeishu Seizo Company tillhandahöll de andra referensföreningarna. Renheten hos alla standardföreningar är högre än 95 procent. Strukturell information för de fem testade föreningarna listas i tabell 1.

PAL-aktivitetsanalys

Råprotein extraherades från prover lagrade vid {{0}} grad. Ett 0,1 g prov maldes till ett fint pulver med flytande kväve och 600 ll proteinextraktionsbuffert sattes till röret innehållande cellpulvret följt av kraftig vortexning för 5 min vid 4grad. Blandningen centrifugerades vid 13,000 rpm vid 4 grader under 10 min. Supernatanten definierades som ett råproteinextrakt. Tio mikroliter av råproteinextraktet sattes till en Tris-HCl (pH 8,5) buffert innehållande 10 ll 5 mM fenylalanin på is. Blandningen inkuberades vid 55°Cgradunder 20 min och släcktes genom tillsats av 50 1 2 M HCl. OD270-förändringar registrerades för att beräkna produktionen av kanelsyra baserat på standardkurvan för transkanelsyra. Den totala PAL-aktivitetstidsarean under kurvan (AUC) beräknades baserat på celltillväxtdata och PAL-aktivitetsanalysdata.

Statistisk analys

All statistisk analys utfördes med hjälp av Microsoft Excel-programvara inklusive standardfel och linjär regressionsanalys

resultat och diskussion

Effekter av AIP-behandling på celltillväxtCistanche deserticolasuspensionscellkultur

Såsom visas i fig. 1 hade AIP-behandlingen vid båda koncentrationerna inga inhiberande effekter på celltillväxt, vilket indikeras av FW och DW.

Effekter av AIP-behandling på PAL-aktivitet

Såsom visas i fig. 2 resulterade behandling av AIP vid båda koncentrationerna inte i en minskning av PAL-aktiviteten på den andra dagen, men PAL-aktiviteten minskade signifikant på dagarna 4 till och med den 28:e. På dessa dagar var PAL-aktiviteten för de 0.5 lMAIP-behandlade cellerna 80,3, 73,2, 82,7, 68,5, 62,3 och 42,4 procent av de obehandlade cellerna och under 2 lM AIP.

Effekter av AIP-behandling på total ackumulering av fenolföreningar

Figur 3a visade att AIP-behandling vid båda koncentrationerna markant påverkade biosyntesen av totala fenolföreningar. I likhet med PAL-aktiviteten minskade inte den totala halten av fenolföreningar på den andra dagen utan började minska på den fjärde dagen. De hämmande effekterna av AIP vid 0,5 och 2 lM på totalt innehåll av fenolföreningar var mycket lika. Innehållshämningshastigheten varierade från 91,1 till 50,1 procent och från 89,9 till 41,5 procent av de obehandlade cellerna i 0.5 respektive 2 lM AIP-behandlade celler. Baserat på innehållsbestämningen av totala fenolföreningar och celltillväxtdata, beräknades utbytena av totala fenolföreningar såsom visas i fig. 3b. Signifikanta förändringar i utbyte av fenolföreningar vid olika tillväxtstadier var uppenbara i 0,5 och 2,0 1M AIP-behandlade celler jämfört med obehandlade celler. Såsom visas i Fig. 2 och 3 hade hämningen av PAL-aktivitet och minskningen av totala fenolföreningar och utbyten liknande trender.

En linjär regressionsanalys mellan PAL-aktivitet och totala fenolföreningar utfördes och resultaten antydde att i de AIP-behandlade cellerna var PAL-aktiviteten nära relaterad till det totala innehållet av fenolföreningar (fig. 4a). Utbytet av totala fenolföreningar i provet vid varje tidssteg är resultatet av ackumulering; därför utfördes en linjär regressionsanalys mellan total PAL-aktivitetstid AUC och totalt utbyte av fenolföreningar. Figur 2 visar att PAL-aktiviteten var olika vid varje tidpunkt; sålunda, för att beräkna den totala PAL-aktivitet-tiden AUC, antar vi här att PAL-aktiviteten mellan två tidpunkter ändras linjärt. Som visas i fig. 4b korrelerade AUC väl med utbytet av totalfenolföreningar och uppvisade korrelationskoefficienter (R2) på 0.9788, {{10}}.8157 och 0 .6981 för de obehandlade,0.5 lM AIP- respektive 2.0 lM AIP-behandlade celler. Baserat på dessa resultat drog vi slutsatsen att hämning av PAL-aktivitet orsakad av AIP-behandling resulterade i en minskning av den totala biosyntesen och ackumuleringen av fenolföreningar iCistanche deserticolasuspensionscellkultur.

Effekter av AIP-behandling på ackumulering av salidrosid och fyra(fenyletanoidglykosider)PheGs

Att studera de detaljerade effekterna av AIP på biosyntesen och ackumuleringen av(fenyletanoidglykosider)PheGs, extrakt av olika prover applicerades på HPLC och det representativa kromatogrammet för varje prov visas i Fig. 5. Standardformeln för testade föreningar och deras retentionstider anges i Tabell 2. Som Fig. 5a visade är salidroside och de andra fyraPheGs baslinjer separerade under vårt analytiska tillstånd. Vi kan se från fig. 5b–d, att salidrosideinnehållet inte förändrades signifikant och, i fig. 5f, g, att arean av toppar detekterade vid 33 0 nm signifikant och kontinuerligt minskade i 0,5 och 2 lM AIP-behandlade cellextrakt jämfört med obehandlade celler (fig. 5e).

Innehålls- och utbytesförändringarna för varje testad förening visas i fig. 6 och tabell 3. Enligt våra resultat är echinakosid och cistanosid A de två huvudföreningarna och deras innehåll är cirka tio gånger högre än de andra tre föreningarna. Det fanns dock betydande skillnader i innehållet av varje förening som svar på AIP-behandlingen. När det gäller echinakosid började halten i obehandlade celler att öka kontinuerligt från den 8:e dagen till den 28:e dagen (fig. 5a), vilket var helt annorlunda än mönstret för cistanosid A, som nådde sitt högsta innehåll den 8:e dagen och minskade något kontinuerligt tills 28:e dagen. I AIP-behandlade celler minskade innehållet av de två föreningarna signifikant i samma mönster. Innehållet av akteosid och tubulosid A var mycket lägre än echinakosid, medan förändringstrenden liknade echinakosid. Det finns också en dramatisk minskning av utbytet av varje testad förening för de 0.5 och 2 lM AIP-behandlade cellerna jämfört med de obehandlade cellerna. Enligt fig. 6 och tabell 3 sjönk utbytet av echinakosid, cistanosid, acteosid, tubulosid A och salidrosid till cirka 10, 10, 34, 36 respektive 25 procent av obehandlade celler den 28:e dagen i AIP-behandlade celler vid båda koncentrationer.

Linjär regressionsanalys mellan PAL-aktivitet och(fenyletanoidglykosider)PheGs ackumulering

För att bestämma hur PAL-aktiviteten och innehållet av varje testad förening korrelerades i varje grupp, utfördes en linjegressionsanalys (fig. 7). Innehållet av salalidrosid i alla grupper hade den lägsta korrelationskoefficienten (R2), från 0.1651 i den obehandlade cellen till 0.4753 i de 2.0 lM AIP-behandlade cellerna . Förutom salidrosid hade de andra testade föreningarna mycket högre korrelationskoefficienter och deras R2 är listad i Fig. 7. Våra resultat visade att PAL-aktivitet är starkt korrelerad med innehållet av echinakosid, acteosid, cistanosid A och tubulosid A i alla grupper.

Vi utförde också en linjär regressionsanalys mellan total PAL-aktivitet-tid AUC och varje testad föreningsutbyte i de insamlade proverna (Fig. 8). Regressionsanalysen indikerade att utbytet av varje förening korrelerade med AUC på olika sätt. I de obehandlade cellerna har alla fem föreningar höga korrelationskoefficienter med total PAL-aktivitetstid AUC. I de AIP-behandlade cellerna behöll dock endast echinakosid, acteosid och tubulosid A höga korrelationskoefficienter och de andra två föreningarna, cistanosid A och salidrosid hade mycket låga korrelationskoefficienter med total PAL-aktivitetstid AUC. Dessa resultat antydde att PAL-aktiviteten hade mycket olika effekter på ackumuleringen av dessa föreningar. Enligt tabell 1 har föreningarna echinakosid, acteosid och tubulosid A en koffeoylgrupp och en 3, 4-dihydroxylfenyletanolgrupp; cistanosid A har en feruloylgrupp och en 3-metoxi, 4-hydroxylfenyletanolgrupp; andsalidrosid har en hydroxylfenyletanolgrupp. Anledningen till att dessa föreningar har olika korrelationskoefficienter med total PAL-aktivitetstid AUC i AIP-behandlade celler kan vara relaterad till deras olika biosyntetiska ursprung.

Som visas i Fig. 5, efter AIP-behandling, minskade de flesta av topparna kontinuerligt och signifikant och fem identifierades i denna studie. Bland dessa testade föreningar hade endast salidrosid ingen koffeoylgrupp. Före denna studie trodde man att innehållet av viktiga intermediärer före integrering av koffeoylgrupper, såsom assalidrosid, skulle öka på grund av PAL-aktivitetsinhibering, men vi hittade inte signifikant ökade toppar i de AIP-behandlade cellerna. Detta resultat kan uppstå pga(fenyletanoidglykosider)PheG är sekundära metaboliter i C. deseriticola och produktionen av dessa(fenyletanoidglykosider)PheGs regleras av cellernas miljöstress. I våra experiment behandlas de AIP-behandlade cellerna inte med elicitor eller andra påfrestningar, så produktionen av PheGs och deras intermediärer biosyntetiseras inte aktivt i AIP-behandlade celler. Det har också rapporterats att (Chapple et al. 1986) växttyrosindekarboxylas (TYRDC)-aktivitet kan inhiberas starkt av La-aminooxi-b-fenylpropionat, en annan PAL-specifik kompetitiv inhibitor. TYRDC är ett nyckelenzym i produktionen av salidrosid från tyrosin. Enligt våra resultat påverkades dock innehållet av salidrosid inte nämnvärt av AIP-behandling, vilket antydde att TYRDC-aktiviteten inte påverkades starkt. En specifik aktivitetsanalys med användning av ett TYRDC-renat protein eller rekombinant protein krävs för att bestämma effekterna av AIP på dess aktivitet.

Slutsatser

Våra resultat visade att AIP-behandling vid {{0}}.5 och 2.0 lM inte hade några markanta effekter på celltillväxt men resulterade i signifikant hämning av PAL-aktivitet, biosyntes och ackumulering av total fenolförening och testades(fenyletanoidglykosider)PheGsin suspension cellkultur avCistanche deserticola. Linearregressionsanalys indikerade att PAL-aktivitet hade höga korrelationskoefficienter med totalt innehåll av fenolföreningar och(fenyletanoidglykosider)PheGs-innehåll, utom salidrosid i alla cellgrupper. Utbyten av totala fenoliska föreningar och de fem testade föreningarna hade höga korrelationskoefficienter med total PAL-aktivitetstid AUC i obehandlade celler. När det gäller AIP-behandlade celler behöll endast echinakosid, acteosid och tubulosid A höga korrelationskoefficienter med total PAL-aktivitetstid AUC. Olika biosyntetiska ursprung kan vara ansvariga för denna skillnad. Sammanfattningsvis antydde våra resultat att PAL-enzymet spelade en viktig roll för att kontrollera biosyntesen och ackumuleringen av(fenyletanoidglykosider)PheGs i suspensionscellkulturen avCistanche deserticola.

Erkännanden

Detta arbete stöddes av forskningsfonden Dong-A University. Vi skulle vilja tacka professor Jerry Zon som arbetar vid Institutet för organisk kemi, biokemi och bioteknik, Wrocławs tekniska universitet i Polen för att ha tillhandahållit oss AIP. Vi vill också visa vår uppskattning till Dr. Nobuhisa Ezaki vid Yomeishu Seizo Company i Japan för att ha gett oss standardföreningar cistanosid A, acteosid och tubulosid A för våra experiment.

Från: "Effekter av 2-aminoindan-2-fosfonsyrabehandling på ackumulering av salidrosid och fyra fenyletanoidglykosider i suspensionscellkultur av Cistanche deserticola" avGao Sheng Hu, et al

---Plant Cell Rep (2011) 30:665–674 DOI 10.1007/s00299-010-0997-3

Referenser

Chapple CCS, Walker MA, Ellis BE (1986) Växttyrosindekarboxylas kan inhiberas starkt av La-aminooxi-b-fenylpropionat. Planta 167:101–105

Cheng XY, Guo B, Zhou HY et al (2005) Upprepad framkallning ökarfenyletanoidglykosiderackumulering i suspensionscellkulturer avCistanche deserticola. J Biochem Eng 24:203–207
Cheng XY, Zhou HY, Cui X, et al (2006) Förbättring avfenyletanoidglykosiderbiosyntes iCistanche deserticolasuspensionscellkulturer med kitosan-elicitor. J Biotechnol 121(2):253-260
Ellis BE (1983) Produktion av hydroxifenyletanolglykosider i suspensionskulturer av Syringa vulgaris. Phytochemistry 22(9):1941–1943
Gamborg OL, Miller RA, Ojima K (1968) Näringsbehov för suspensionskulturer av sojabönsrotceller. Exp Cell Res 50:151–158
Geng XC, Song LW, Pu XP et al (2004) Neuroprotective Effects ofFenyletanoid glykosiderfrånCistanchersalsa mot 1-metyl-4-fenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridin (MPTP)-inducerad dopaminerg toxicitet i C57-möss. Biol Pharm Bull 27(6):797-801
Hu GS (2007) Studier om suspensionscellkultur och molekylärbiologi avCistanche deserticola. Magisteruppsats, Shenyang Pharmaceutical University Hu GS, Jia JM, Hur YJ, et al (2010) Molecular characterization of phenylalanine ammonia-lyase fromCistanche deserticola.Mol Bio Rep. doi:10.1007/s11033-010-0489-0
Karasawa H, Kobayashi H, Takizawa N et al (1986) Studies on the constituents of Cistanchis Herba. VIII. Yakugaku Zasshi 106(8):721–724
Kobayashi H, Karasawa H, Miyase T et al (1984a) Studier om beståndsdelarna i Cistanchis Herba. IV. Chem Pharm Bull 32(10):3880-3885
Kobayashi H, Karasawa H, Miyase T et al (1984b) Studier om beståndsdelarna i Cistanchis Herba. III. Chem Pharm Bull 32(8):3009-3014
Kobayashi H, Karasawa H, Miyase T et al (1985) Studies on the constituents of Cistanchis Herba. V. Chem Pharm Bull 33(4):1452-1457
Kobayashi H, Karasawa H, Takizawa N et al (1986) Studies on the constituents of Cistanchis Herba. VII. Yakugaku Zasshi 106(7):562–566
Liu CZ, Cheng XY (2008) Förbättring avfenyletanoidglykosiderbiosyntes i cellkulturer avCistanche deserticolaav osmotisk stress. Plant Cell Rep 27:357-362
Liu JY, Guo ZG, Zeng ZL (2007) Förbättrad ackumulering avfenyletanoid glykosids genom prekursormatning till suspensionskultur av Cistanche-salsa. Biochem Eng J 33:88–93
Lu CT, Mei XG (2003) Förbättring avfenyletanoidglykosiderproduktion av en svampelicitor i suspensionscellkultur avCistanche deserticola.Biotechnol Lett 25:1437–1439
Ouyang J, Wang XD, Zhao B, et al (2003a) Ljusintensitet och spektral kvalitet som påverkar callustillväxten hosCistanche deserticolaoch biosyntes avfenyletanoidglykosider. Plant Sci 165:657–661
Ouyang J, Wang XD, Zhao B, et al (2003b) Effekter av sällsynta jordartsmetaller på tillväxten avCistanche deserticolaceller och produktionen avfenyletanoidglykosider. J Biotechnol 102:129-134
Ouyang J, Wang XD, Zhao B, et al (2005) Förbättrad produktion avfenyletanoidglykosidergenom prekursormatning till cellkulturen avCistanche deserticola. Process Biochem 40:3480-3484
Pu XP, Song ZH, Li YY et al (2003) Acteosid från Cistanche salsa hämmar apoptos med 1, 2-metylfenylpyridiniumjon i cerebellära granulneuroner. Planta Med 69:652–666
Saimaru H, Orihara Y (2010) Biosyntes av akteosid i odlade celler av Olea europaea. J Nat Med 64:139–145
Sheng GQ, Pu XP, Lei L, et al (2002) Tubulosid B från Cistanche salsa räddar PC12-neuroncellerna från metylfenylpyridiniumjoninducerad apoptos och oxidativ stress. Planta Med 68:966–970
Singleton VL, Orthofer R, Lamuela-Raventos RM (1999) Analys av totala fenoler och andra oxidationssubstrat och antioxidanter med hjälp av Folin-Ciocalteu reagens. Method Enzymol 299:152-178
Tian XF, Pu XP (2005)Fenyletanoid glykosids från Cistanches salsa hämmar apoptos inducerad av 1-metyl-4-fenylpyridiniumjon i neuroner. J Ethnopharmacol 97:59–63
Xiong Q, Kadota S, Tani T, et al (1996) Antioxidativa effekter av fenyletanoider frånCistanche deserticola. Biol Pharm Bull 19(12):1580–1585