Identifiering av väteperoxidresponsiva EST:er involverade i fenyletanoidglykosidbiosyntes i Cistanche Salsa-cellkultur

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-post:audrey.hu@wecistanche.com

J. CHEN et al

Abstrakt
Väteperoxid är en effektiv abiotisk framkallare som kan inducera sekundär metabolitbiosyntes i växter. Vi visar att i cellsuspensionen kultur av en salt-tolerant medicinalväxtCistanchesalsa, produktion av bioaktiva komponenterfenyletanoidglykosider(PeGs) ökade efter H2O2-behandling. För att identifiera gener relaterade till PeGs(fenyletanoidglykosider)biosyntes påverkad av H2O2, konstruerade vi ett subtraktivt subtraktivt hybridiseringsbibliotek av H2O2-responsiva gener med hjälp av enCistanchesalsacellinje och identifierade 105 uttryckta sekvenstaggar (EST) och 85 gener. EST-bibliotekets funktionella anteckningar och genontologianalyser visade gener relaterade till olika stressresponser, biosyntes av sekundära metaboliter och transkriptionell reglering. Bland dem identifierade vi två gener relaterade till PeGs(fenyletanoidglykosider)biosyntesväg (4-coumarate coenzym A-ligas och cinnamate 4-hydroxylas), och två transkriptionsfaktorer av WRKY-typ. Uttrycken av utvalda gener efter H2O2-behandlingen analyserades med RT-qPCR. Tidig ökad transkription av PeG(fenyletanoidglykosider)biosyntesväggener efter behandlingen avslöjade att H2O2 inducerade PeGs(fenyletanoidglykosider)biosyntes via uppreglering av dess nyckelgener.
Ytterligare sökord: cinnamat-4-hydroxylas, 4-coumarate coenzym A-ligas, suppression subtraktiv hybridisering.Cistanchesalsa. fenyletanoidglykosider.

Introduktion

Cistanchesalsaär en flerårig växtparasit på roten av Haloxylos ammodendrun, och den växer i ökenområdet i västra Kina. I århundraden,Cistanchearter har använts som traditionell örtmedicin (Wang et al. 2012). Bioaktiva komponenter ärfenyletanoidglykosider(PeG) som har en anmärkningsvärd effekt på eliminering av reaktiva syrearter (ROS), strålskydd, immunförstärkning och anti-aging (Nan et al. 2013). PeGs(fenyletanoidglykosider)biosyntes iCistancheinitieras från fenylalanin (Fig. 1 Suppl.) och syntetiserad koffeinsyra glykosyleras ytterligare för att bilda olika PeGs(fenyletanoidglykosider)(Wang et al. 2012). Tre huvudsakliga PeGs(fenyletanoidglykosider), echinakosid, akteosid och 2'-acetylakteosid, anses vara de mest aktiva komponenterna iCistanche(Kobayashi et al. 1984). För att förbättra deras innehåll iCistanchecellodling har olika framkallare testats inklusive kitosan, putrescin, Ag plus och osmotisk stress (Ouyang et al. 2005a,b, Cheng et al. 2005, 2006, Liu et al. 2007, Liu och Cheng 2008). Däremot gener involverade i PeGs(fenyletanoidglykosider)biosyntes iCistanche, främst gener för fenylalaninmetabolism, har sällan identifierats. Endast en gen som kodar för fenylalanin ammoniak-lyas (PAL) identifierades nyligen i Cistanche deserticola (Hu et al. 2011). Andra gener som kodar för, till exempel, cinnamat-4-hydroxylas (C4H), som skulle kunna katalysera omvandlingen av cinnamat till kumarsyra, och 4-kumaratkoenzym A-ligas (4CL), en essentiell gen för lignin och flavanoider biosynteser, har inte hittats iCistanche.
Vi använde cellkulturen avCistanchesalsaatt studera PeGs(fenyletanoidglykosider)biosyntes och relaterade genuttryck. Vi undersökte också effekten av en effektiv framkallande H2O2 på PeGs(fenyletanoidglykosider)biosyntes. Dessutom för att hitta tidiga responsiva gener involverade i PeGs(fenyletanoidglykosider)biosyntes, genomförde vi suppression subtraktiv hybridisering (SSH) för att konstruera ett cDNA-bibliotek av H2O2-responsiva gener.

Fig. 1. Relativt genuttryck bestämt med RT-qPCR efter H2O2-behandling. CsWRKY1 - WRKY transkriptionsfaktor (Contig07), CsC4H1 - cinnamat 4-hydroxylas (Contig09), Cs4CL1 - 4-kumarat: ligas (Contig03), CsHSP1 - värmechockprotein 70 kDa (Contig 01) och CsSOD1 - superoxiddismutas (Contig16). Celler behandlades med 80 ug dm-3 H2O2 i ett flytande medium under 2 timmar och uttryck jämfördes med en kontroll behandlad med vatten. Medel plus - SD av tre biologiska upprepningar; * - P < 0,05,="" **="" -="" p=""><>

Material och metoder

CS2001-cellinjen etablerades från kronblad avCistanchesalsa(CA Mey.) Beck samlade in i Neimenggu-provinsen och subkulturerades. Odlingsmetoden liknade ett tidigare publicerat protokoll (Liu et al. 2007). I allmänhet användes ett fast Murashige och Skoog (1962; MS) medium för subkultur och ett flytande medium för PeGs(fenyletanoidglykosider)biosyntes (det var det modifierade MS-mediet kompletterat med 30 g dm-3 glukos och 2.0 mg dm-3 indol-3-ättiksyra). För H2O2-behandling inokulerades 5,0 ± 0,2 g celler under en snabb tillväxtperiod, vanligtvis 20 till 30 dagar efter att de subodlats i det fasta mediet, i ett 50 cm3 flytande medium i en 250 cm3 Erlenmeyer-kolv och odlas i mörker med eller utan olika H2O2-koncentrationer. PeGs(fenyletanoidglykosider)innehållet efter 10 d induktion av H2O2 analyserades enligt en tidigare publicerad metod (Liu et al. 2007) baserad på omvänd fas högpresterande vätskekromatografi med metanolgradienteluering.

Cellerna 2 timmar efter H2O2-behandlingen samlades upp från mediet med filterpapper med användning av en Büchner-tratt, och sedan frystes de i flytande kväve och maldes till pulver. Varannan g cellpulver lyserades med en blandning av 1 cm3 2-merkaptoetanol, 1 cm3 av 200 g dm{{10}} sarcosyl, och 8 cm3 av en GTC-buffert (5 M guanidiniumisotiocyanat, 62,5 mM Tris-HCl, pH 8,0, 6,25 mM EDTA, pH 8,0, 5 mM tiourea och 10 mM ditiotreitol). Cellerna inkuberades sedan på is i 15 minuter, sedan tillsattes 1/3 volym av 8,5 M CH3COOK, pH 6,0, och cellerna inkuberades på is i 15 minuter och centrifugerades sedan vid 15 000 g i 15 minuter . Supernatanten sattes till en lika stor volym isopropanol för att fälla ut totalt RNA. Det totala RNA:t renades ytterligare med ett RNeasy-minikit (Qiagen, Hilden, USA) enligt tillverkarens instruktioner. Messenger-RNA isolerades från totalt RNA med användning av ett Oligotex mRNA midi-kit (Qiagen).

fenyletanoidglykosideriCistancheSalsa

Ett SSH-bibliotek genererades från kontroll och 30 procent H2O2-framkallade cellprover 2 timmar efter framkallningen med användning av ett PCR-selekterat cDNA-subtraktionskit (Clontech, Mountain View, USA). För bibliotekskonstruktion renades produkterna separat med användning av ett gelreningskit (Qiagen) och klonades in i en pGEM-vektor med användning av ett TA-kloningskit (Tiangen, Peking, Kina). Plasmider från oberoende kloner isolerades och sekvenserades med användning av T7-primer. Alla uttryckta sekvenstaggar (EST)-sekvenser från biblioteket (med vektorsekvenserna borttagna) användes för contig-sammansättning med CAP3 (http://doua.prabi.fr/software/cap3). EST:erna grupperades i contigs och singletons; de användes för homologisökning med hjälp av BLASTx-programmet vid NCBI (http://blast.ncbi. nlm.nih.gov). Sekvenser annoterades sedan, analyserades och klassificerades enligt genontologi (GO) termer med användning av Blast2GO (http://www. blast2go.com).
Kvantitativ polymeraskedjereaktion i realtid (RT-qPCR) utfördes enligt Bustin et al. (2009). cDNA-proverna syntetiserades med användning av ett PrimeScript RT-reagenskit (Takara, Dalian, Kina) från 0,5 ug totalt RNA. RT-qPCR utfördes med användning av SYBR Premix Ex Taq II och ROX plus-kit (Takara) på ett ABI 7300 realtids-PCR-system (Applied Biosystems, Foster City, USA) med tre tekniska replikat. Primers designades med hjälp av online-programmet Primer3 enligt instruktionerna från Takara; primers som används i denna studie är listade i Tabell 1 Suppl. Genuttrycken normaliserades till 18S RNA, vars uttryck var stabilt i alla proverna.

Resultaten analyserades med användning av R version 3.1.1, betydelsen av skillnader verifierades av Studentens t-test.

Resultat

Väteperoxid-inducerade biosyntesen av alla tre huvudsakliga PeGs(fenyletanoidglykosider)iCistanchesalsasuspensionsceller (tabell 1) men utan uppenbar effekt på celltillväxt (Fig. S2). Innehållet av echinakosid ökade redan efter 10 ug dm-3 H2O2-behandlingen (P < 0.05),="" en="" högre="" ökning="" registrerades="" efter="" de="" 20="" ug="" dm="" -3="" h2o2-behandling="" (p="">< 0,01),="" och="" den="" högsta="" ökningen="" var="" efter="" 40,="" 80="" och="" 160="" ug="" dm-3="" h2o2-behandlingar.="" liknande="" resultat="" visas="" för="" akteosid,="" men="" dess="" innehåll="" toppade="" efter="" 80="" ug="" dm-3="" h2o2-behandlingen.="" biosyntesen="" av="" 2'-acetylakteosid="" var="" mindre="" känslig="" för="" h2o2-behandling;="" en="" signifikant="" ökning="" av="" dess="" innehåll="" (p="">< 0,05)="" var="" vid="" h2o2-koncentrationer="" över="" 40="" ug="" dm-3.="" efter="" 80="" ug="" dm-3="" h2o2-behandlingen,="" mängden="" av="" alla="" tre="" huvudsakliga="">(fenyletanoidglykosider)ökade betydligt (P < 0.01)="" jämfört="" med="" kontrollen.="" därför="" användes="" denna="" koncentration="" i="" ytterligare="">
För att skapa ett bibliotek berikat för tidigt responsiva gener som uppregleras av H2O2 använde vi cDNA frånCistanchesalsasuspensionsceller behandlade med 80 ug dm-3 H2O2 under 2 timmar. Enkelpasssekvensering av 129 rekombinanta kloner i SSH-biblioteket gav 105 rena EST:er efter uteslutning av vektorsekvens. Dessa klara EST användes för montering av CAP3, och 18 contigs och 67 singletons genererades (tabell 2). Således isolerades 85 gener i detta bibliotek. Medellängden för de rena 105 EST:erna var 527 bp, vilket är tillräckligt för en sekvenslikhetsbaserad funktionell klassificering.

fenyletanoidglykosideriCistancheSalsa

Alla 85 gener som erhållits i biblioteket hämtades med BLASTx mot GenBanks icke-redundanta proteindatabas för sekvenslikhet (E-värde mindre än eller lika med 0.001). Tjugoen gener visade inga träffar i databasen, de kan vara specifika förCistanchesalsa. Resultaten med BLASThits importerades till Blast2GO-mjukvaran för ytterligare GO- och KEGG-vägberikningsanalyser. Av de 64 generna med BLAST-träffar var 50 kommenterade enligt beskrivningen av homologa gener från andra arter. De annoterade generna namngavs enligt beskrivningen av BLAST-träffar. GO-analysen (Fig. 3 Suppl.) visar att bland dessa 50 gener fanns 14 gener involverade i svar på stimuli, och över 30 gener relaterade till metaboliska processer (tabellerna 1 och 2). Bland dessa gener isolerades två PeG-biosyntesväggenhomologer som förväntat: 4-coumarate coenzym A-ligas (benämnt Cs4CL1: Contig03) och cinnamate 4-hydroxylas (benämnt CsC4H1: Contig14). Vidare utfördes RT-qPCR för att bekräfta inducerade uttryck av gener från biblioteket efter H2O2-behandlingen.

För att bekräfta att essentiella gener identifierade från SSH-biblioteket svarade på H2O2-behandlingen, uttrycken av två PeGs(fenyletanoidglykosider)biosyntesväg-relaterade gener (Cs4CL1, CsC4H1), två ROS-inducerade gener (CsSOD1: Contig 16, CsHSP1: CISTH099) och en WRKY-familjen transkriptionsfaktorliknande gen (CsWRKY1: Contig 07) mättes med RT-qPCR med H2O2 (Fig. 1). Uttrycken CsC4H1, Cs4CL1, CsSOD1 och CsWRKY1 uppreglerades mer än 15-faldig, 3-faldig, 45-faldig respektive 4-faldig 2 timmar efter H2O2 behandling. Uttrycket av CsHSP1 förändrades endast 1,8 gånger efter H2O2-behandlingen.
Tidsförloppet för uttrycken av CsWRKY1, CsC4H1 och Cs4CL1 efter H2O2-behandlingen analyserades ytterligare med RT-qPCR (Fig. 2). CsC4H1- och Cs4CL1-uttrycken ökade kraftigt (mer än 80-faldigt respektive 50-faldigt) efter 16-h-behandlingen och nedreglerades sedan efter 32 timmar. Uttrycket av CsWRKY1 uppreglerades mer än 20- gånger vid 4 timmar och minskade sedan från 8 timmar efteråt (Fig. 2).

Fig. 2. Det relativa uttrycket av CsWRKY1 (A), CsC4H1 (B) och Cs4CL1 (C) vid olika tidpunkter efter behandling med 80 ug dm-3 H2O2. Uttrycken normaliserades till en kontroll; (behandlas med vatten). Medel plus - SD av tre biologiska upprepningar; * - P < 0,05,="" **="" -="" p=""><>

Diskussion

Väteperoxid är en välkänd växtframkallare som visar olika effekter på växter. Liksom ROS kan det inducera ROS-avskiljningssystemet som består av superoxiddismutas, katalas, peroxidaser, etc., och det fungerar som nedströmssignalen för salt, osmotisk och uttorkning

betonar (Wi et al. 2006, Kar 2011, Furlan et al. 2013, Sathiyaraj et al. 2014). Det föreslogs att H2O2-generering i växter åtföljs av inducerad sekundär-metabolitbiosyntes iCistanchesalsacell kultur. Som väntat visar våra resultat att PeGs(fenyletanoidglykosider)biosyntes iCistanche salsacellkultur inducerades efter H2O2-behandlingen (tabell 1). Innehållet i tre huvudsakliga PeGs(fenyletanoidglykosider)ökade efter H2O2-behandlingen, vilket indikerar dess centrala roll i PeGs biosyntes. Gener berikade i SSH-biblioteket föreslog vidare dess effekt på PeGs(fenyletanoidglykosider)biosyntesinduktion iCistanche salsa.

Många kända H2O2-responsiva gener, såsom askorbatperoxidas (CISTH069, Karyotou och Donaldson 2005), h-kinonoxidoreduktas (CISTH125, Bello, et al. 2001), CsSOD1, CsHSP1 (Baruah et al. 2014), 2014 och sjukdomsresistensresponsgener (Contig10, Nanda, et al. 2010), berikades i SSH-biblioteket (Tabell 3, Tabell 2 Suppl.). Några av dessa typiska ROS-responsiva gener med ett inducerat uttryck efter H2O2-behandlingen bekräftades ytterligare av RT-qPCR (fig. 1 och 2) vilket indikerar att ett kvalificerat SSH-bibliotek konstruerades här. Två PeG-biosyntesväggener, CsC4H1 och Cs4CL1, hittades också i detta bibliotek och dessa två genuttryck inducerades av H2O2-behandlingen på ett tidsberoende sätt (Fig. 2). Det tyder på att H2O2-behandlingen inducerade PeGs(fenyletanoidglykosider)biosyntes på genetisk nivå via reglering av PAL-väggener. Men PAL och andra nedströms PeGs biosyntesgener (Wang et al. 2012) identifierades inte i SSH-biblioteket; det kan bero på att biblioteket inte har sekvenserats tillräckligt. Ett samband mellan CsC4H1 och Cs4CL1-inducerade uttryck och en ökad PeGs-biosyntes efter H2O2-behandlingen bör klargöras genom ytterligare analys.

Förutom PAL-väggenerna inducerade av H2O2-behandlingen, hittades två transkriptionsfaktorer i familjen WRKY (CsWRKY1, CsWRKY2) i SSH-biblioteket (tabell 3 och tabell 2 Suppl.), och ett CsWRKY1-inducerat uttryck bekräftades av RT-qPCR . Dess uttryck svarade på H2O2-behandlingen tidigare än uttrycket av två PAL-gener, Cs4CL1 och CsC4H1 (Fig. 2). Från tidigare studier har samuttryck av vissa WRKY-transkriptionsfaktorer och PAL-väggener observerats i ris (Gupta et al. 2012). Vidare är PAL-genuttryck uppreglerat i en OsWRKY03-överuttrycksmutant (Liu et al. 2005). De ovan nämnda två WRKY-familjens transkriptionsfaktorer kan också vara involverade i PeGs(fenyletanoidglykosider)biosyntes iCistanchesalsa. Intressant nog hittades dehydreringsrelaterade EST:er (CISTH067, CISTH064) i SSH-biblioteket, vilket kan tyda på att H2O2-behandlingen var relaterad till dehydreringskänsliga generexpression iCistanchesalsasom observerats i andra växter (Schmidt et al. 2013, Zhou et al. 2013). En gibberellin (GA) signaleringsrelaterad gen, gibberellinreceptor gid1b-liknande (CISTH092), identifierades i SSH-biblioteket, vilket innebär kopplingen av GA-signalering och H2O2-behandling iCistanchesalsa, vilket också rapporterades i korn (Bahin et al. 2011). Det behövs dock fler studier för att bekräfta om dessa gener är relaterade till PeGs(fenyletanoidglykosider)biosyntes. Förutom generna som nämns ovan, presenterar SSH-biblioteket som konstruerats här också gener med eller utan BLAST-träffar. Det förbättrar vår förståelse av H2O2-effekten på C. salsa och tillhandahåller först informationen om dess gener involverade i PeGs biosyntes.

Sammanfattningsvis bedömde vi effekten av H2O2 på PeGs(fenyletanoidglykosider)induktion iCistanchesalsacell kultur. SSH-biblioteket konstruerades efter H2O2-behandlingen och uttrycket av utvalda gener bekräftades med RT-qPCR. Två PeG-biosyntesvägrelaterade gener och andra H2O2--responsiva gener identifierades. Dessa fynd kommer att utöka vår förståelse av H2O2-inducerade PeGs(fenyletanoidglykosider)biosyntes iCistanchesalsatill molekylär nivå, vilket ger informationen för genmanipulation avCistanchesalsacellkulturer för att förbättra PeGs(fenyletanoidglykosider)produktion.

Från: "Identifiering av väteperoxidkänsliga EST:er involverade i fenyletanoidglykosidbiosyntes i Cistanche salsa-cellkultur" avJ. CHEN et al.

--- BIOLOGIA PLANTARUM 59 (4): 695-700, 2015 J. CHEN et al. DOI: 10.1007/s10535-015-0541-år

Referenser

Bahin, E., Bailly, C., Sotta, B., Kranner, I., Corbineau, F., Leymarie, J.: Överhörning mellan reaktiva syrearter och hormonella signalvägar reglerar korns dvala i korn. - Växtcellsmiljö. 34: 980-993, 2011.
Baruah, K., Norouzitallab, P., Linayati, L., Sorgeloos, P., Bossie, r P.: Reaktiva syreämnen som genereras av ett värmechockprotein (Hsp)-inducerande produkt bidrar till Hsp70-produktion och Hsp{{1} }medierad skyddande immunitet i Artemia franciscana mot patogena vibrios. - Dev. Comp. Immunol. 46: 470-479, 2014.
Bello, RI, Gomez-Diaz, C., Navarro, F., Alcain, FJ, Villalba, JM: Uttryck av NAD(P)H: kinonoxidoreduktas 1 i HeLa-celler  roll för väteperoxid och tillväxtfas. - J. biol. Chem. 276: 44379-44384, 2001.
Bustin, SA, Vandesompele, J., Pfaffl, MW: Standardisering av qPCR och RT-qPCR. - Genet. Eng. Biotechnol. Nyheter 29: 40-43, 2009.
Cheng, XY, Wei, T., Guo, B., N, I W., Liu, CZ:Cistanchedeserticola cellsuspensionskulturer:fenyletanoidglykosiderbiosyntes och antioxidantaktivitet. - Process Biochem. 40: 3119-3124, 2005.
Cheng, XY, Zhou, HY, Cui, X., Ni, W., Liu, CZ Förbättring avfenyletanoidglykosiderbiosyntes iCistanchedeserticola-cellsuspensionskulturer genom kitosan-elicitor. - J. Biotechnol. 121: 253-260, 2006.
Furlan, A., Llanes, A., Luna, V., Castro, S.: Abskisinsyra förmedlar väteperoxidproduktion i jordnötter inducerad av vattenstress. - Biol. Växt. 57: 555-558, 2013.
Gupta, SK, Ra,i AK, Kanwar, SS, Chand, D., Singh, NK, Sharma, TR: Den enda funktionella blastresistensgenen Pi54 aktiverar en komplex försvarsmekanism i ris. - J. exp. Bot. 63: 757-772, 2012.
Hu, GS, Jia, JM, Hur, YJ, Chung, YS, Lee, JH, Yun, DJ, Chung, WS, Yi, GH, Kim, TH, Kim, DH: Molekylär karakterisering av fenylalanin-ammoniak-lyas-genen frånCistanchedeserticola. - Mol. Biol. Rep. 38: 3741-3750, 2011.
Kar, RK: Växtsvar på vattenstress: roll för reaktiva syrearter. - Plant Signal Behavior 6: 1741-1745, 2011.
Karyotou, K., Donaldson, RP: Askorbatperoxidas, en renare av väteperoxid i glyoxysomala membran. - Arc h. Biochem. Biophys. 434: 248-257, 2005.
Kobayashi, H., Karasawa, H., Miyase, T., Fukushima, S.: Studier om beståndsdelarna icistancheär herba. 4. Isolering och strukturer av 2 nya fenylpropanoidglykosider, cistanoside-C och cistanoside-D. - Chem. Pharm. Tjur. 32: 3880-3885, 1984.

Liu, CZ, Cheng, XY: Förbättring avfenyletanoidglykosiderbiosyntes i cellkulturer avCistanchedeserticola av osmotisk stress. - Plant Cell Rep. 27: 357-362, 2008.
Liu, JY, Guo, ZG, Zeng, ZL: Förbättrad ackumulering avfenyletanoidglykosidergenom prekursormatning till suspensionskultur avCistanchesalsa. - Biokemi. Eng. J. 33: 88-93, 2007.
Liu, XQ, Bai, XQ, Qian, Q., Wang, XJ, Chen, MS, Chu, CC: OsWRKY03, en transkriptionsaktivator av ris som fungerar i försvarssignalvägen uppströms om OsNPR1. - Cell Res. 15: 593-603, 2005.
Murashige, T., Skoog, F.: Ett reviderat medium för snabb tillväxt och bioanalyser med tobaksvävnadskulturer. - Fysiol. Växt. 15: 473-497, 1962.
Nan, ZD, Zeng, KW, Shi, SP, Zhao, MB, Jiang, Y., Tu, PF:Fenyletanoidglykosidermed antiinflammatoriska aktiviteter från stjälkarna avCistanchedeserticola odlad i Tarimöknen. - Fitoterapia 89: 167-174, 2013.
Nanda, AK, Andrio, E., Marino, D., Pauly, N., Dunand, C.: Reaktiva syrearter under tidiga interaktioner mellan växt och mikroorganismer. - J. Integr. Plant Biol. 52: 195-204, 2010.
Ouyang, J., Wang, XD, Zhao, B., Wang, YC: Förbättrad produktion avfenyletanoid glykosidergenom prekursormatning till cellkulturen avCistanchedeserticola. - Process Biochem. 40: 3480-3484, 2005a.
Ouyang, J., Wang, XD, Zhao, B., Wang, YC: Förbättrad produktion avfenyletanoidglykosiderförbiCistanchedeserticola-celler odlade i en bioreaktor med inre luftlift med siktsteg. - Enzym Microbiol. Tech. 36: 982-988, 2005b.
Salcedo-Morales, G., Jimenez-Aparicio, AR, Cruz-Sosa, F., Trejo-Tapia, G.: Anatomisk och histokemisk karakterisering av haustorium in vitro från rötter av Castilleja tenuiflora. - Biol. Växt. 58: 164-168, 2014.
Sathiyaraj, G., Srinivasan, S., Kim, YJ, Lee, OR, Parvin, S., Balusamy, SR, Khorolragchaa, A., Yang, DC: Acklimatisering av väteperoxid ökar salttoleransen genom att aktivera försvarsrelaterade proteiner i Panax ginseng CA Meyer. - Mol. Biol. Rep. 41: 3761-3771, 2014.
Schmidt, R., Mieulet, D., Hubberten, HM, Obata, T., Hoefgen, R., Fernie, AR, Fisahn, J., Segundo, BS, Guiderdoni, E., Schippers, JHM, Mueller-Roeber, B.: SALTRESPONSIVE ERF1 reglerar reaktiv syreart-beroende signalering under det initiala svaret på saltstress
i ris. - Plant Cell 25: 2115-2131, 2013.
Wang, T., Zhang, XY, Xie, WY:Cistanchedeserticola YC Ma, "Desert Ginseng": en recension. - Amer. J. chin. Med. 40: 1123-1141, 2012.
Wi, SG, Chung, BY, Kim, JH, Lee, KS, Kim, JS Avsättningsmönster av väteperoxid i bladhöljena av ris under saltstress. - Biol. Växt. 50: 469-472, 2006.
Zhou, XF, Jin, YH, Yoo, CY, Lin, XL, Kim, WY, Yun, DJ, Bressan, RA, Hasegawa, PM, Jin, JB: CYCLIN H1 reglerar torkstressreaktioner och blått ljus-inducerad stomatal öppning av hämmar ackumulering av reaktiva syrearter i Arabidopsis. - Plant Physiol. 162: 1030-1041, 2013.