Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-post:audrey.hu@wecistanche.com

Yu Lixin Chen Xueqiang Wu Qunfeng Dong Weiqin Guo Songhua Yu Jian Feng Wei Yang Lei Fu Yifeng Li Junjie Luo Cheng

1 Det 98:e sjukhuset för den kinesiska folkets befrielsearmé, Huzhou, Zhejiang 313000

2 Zhejiang University of Traditional Chinese Medicine, Hangzhou, Zhejiang 310053

3 Fuyang Traditional Chinese Medicine Orthopedic Hospital, Hangzhou City, Zhejiang Province, Hangzhou 311400, Zhejiang, Kina

Abstrakt

Mål: Att observera effekten avCistanchevattenextraktom läkning avosteoporotiskfrakturer hos råttor och att utforska dess mekanism. Metoder: SPF-grade SD honråttor delades slumpmässigt in i kontrollgrupp, modellgrupp och behandlingsgrupp och modellerades enligt relaterade metoder. 24 timmar efter frakturmodellering gavs kontrollgruppen och modellgruppen normal koksaltlösning, och behandlingsgruppen fick sondmatning medCistanchevattenextrakt en gång om dagen. Efter 2 veckors och 6 veckors intervention samlades blod från bukaortan för att detektera interleukiner. TP (IL-1 B) och transformerande tillväxtfaktor-B l (TGF-8 1) nivåer, samla frakturprover samtidigt, utför mikro-CT-skanning efter fixering, mät R0 I callus benvolymfraktion (BV/TV) och andra relaterade parametrar Efter avkalkning, uttorkning och inbäddning gjordes den till vaxblock för användning. Resultat: 6 veckor efter att osteoporosmodellen etablerades var bentätheten hos råttor i modellgruppen och behandlingsgruppen lägre än den för kontrollgruppen (P<0.05), but="" there="" is="" no="" significant="" difference="" between="" the="" treatment="" group="" and="" the="" model="" group.="" although="" the="" bone="" density="" of="" the="" treatment="" group="" is="" still="" lower="" than="" that="" of="" the="" control="" group="" after="" 2="" weeks="" and="" 6="" weeks="" of="" intervention,="" it="" is="" significantly="" higher="" than="" that="" of="" the="" model="" group=""><0.05). micro-ct="" scan="" shows="" the="" treatment="" group="" bv/tv,="" tb.="" sp,="" tb.="" n,="" tb.="" th,="" smi="" was="" better="" than="" the="" model="" group="" at="" 2="" and="" 6="" weeks="" after="" the="" intervention,="" and="" the="" bv/tv,="" tb.="" sp,="" smi="" parameters="" of="" the="" control="" group="" and="" the="" treatment="" group="" were="" not="" different="" from="" those="" of="" the="" treatment="" group.="" obviously,="" the="" micro-ct="" parameters="" of="" the="" model="" group="" at="" 2-time="" points="" were="" inferior="" to="" the="" control="" group.="" after="" 2="" weeks="" and="" 6="" weeks="" of="" intervention,="" comparing="" the="" serum="" ilt="" b="" and="" tgf-p="" 1="" levels="" of="" the="" 3="" groups,="" it="" was="" found="" that="" the="" il-1="" p="" levels="" of="" the="" treatment="" group="" were="" lower="" than="" those="" of="" the="" other="" two="" groups="" at="" 2="" weeks.="" at="" 6="" weeks,="" the="" il-1="" p="" levels="" of="" the="" treatment="" group="" were="" higher="" than="" those="" of="" the="" other="" two="" groups.="" the="" control="" group,="" but="" still="" significantly="" lower="" than="" the="" model="" group=""><0.05); in="" terms="" of="" tgf-b="" 1="" level,="" the="" treatment="" group="" was="" higher="" than="" the="" model="" group="" and="" the="" control="" group="" at="" 2="" and="" 6="" weeks,="" and="" there="" was="" no="" statistical="" difference="" between="" the="" control="" group="" and="" the="" control="" group.="" significance.="" conclusion:="" according="" to="" the="" analysis="" of="" bone="" mineral="" density,="" micro-ct="" scan="" parameters,="" and="" serum="" il-1="" b="" and="" tgf-b="" 1="" levels,="" it="" is="" found="" that="" the="" aqueous="" extract="" of="">Cistanchekan främja läkningen avosteoporotiskfrakturer, och dess mekanism kan vara relaterad till dess hämning avosteoporotiskfrakturer. Efter råttserumet IL-1 B och främja utsöndringen av TGF-8 1, vilket kan förbättra osteoporos och främja frakturläkning.

Nyckelord: osteoporotisk fraktur, Cistanche, frakturläkning, råtta

Osteoporos är en sjukdom där bentätheten minskar, den fina strukturen i benvävnaden förstörs och benets skörhet ökar. Patienter kan orsaka frakturer under lätt yttre kraft i det dagliga livet. Det är en vanlig klinisk sjukdom och en ofta förekommande sjukdom. Dessutom är denna typ av fraktur mestadels äldre patienter, ofta förknippade med andra sjukdomar, och de flesta frakturerna är sönderdelade, med dålig stabilitet, och ibland inträffar långsam eller osammanhängande frakturläkning, och det finns en hög invaliditets- och dödlighetsfrekvens. För närvarande är dess behandling huvudsakligen genom kirurgi, manuell restaurering och behandling mot osteoporos. Det saknas riktade behandlingsläkemedel för patienter medosteoporotiskfrakturer. Traditionell kinesisk medicin har en lång historia av att behandla osteoporos och har en positiv effekt. Många traditionella kinesiska mediciner har visat sig förbättra skelett. Fattigdom kan också främja frakturläkning. Rongrong används ofta som ett representativt läkemedel för näring av njure yang och har effekten att ge näring till lever och njure. Traditionell kinesisk medicin tror att njuren styr benet, och behandlingen av frakturer är också oskiljaktig från njuren och essensen. Modern farmakologi har funnit att köttaska också har en viss östrogen effekt. Denna studie avser att använda bentäthetsmätning, Micro-CT och seruminterleukin-13 (IL-10), observation av transformerande tillväxtfaktor-P KTGF-P 1) nivå och vattenextrakt av köttbråckspasta på läkning avosteoporotiskfrakturer hos råttor

Cistanche

1 Material och metoder

1.1 Försöksdjur och reagensutrustning: 52 SPF SD-honråttor som väger 210~250g föds upp i djurexperimentcentret vid Zhejiang University of Traditional Chinese Medicine. Complex jodine, Hangzhou Lonzo Medical Disinfectant Co., Ltd., batchnummer 20160720; Penicillin, North China Pharmaceutical Co., Ltd., batchnummer F3117217; IL-18 kit (batchnummer: 20160715), TGF-8 1 kit (batchnummer: 20160722); Dual-energy röntgen bentäthetsskanner, 0STE0C0RE2; Micro-CT, Skyscan1176O

1.2 Utvinning avCistanchevattenextrakt: blötlägg markencistanche(Zhejiang University of Traditional Chinese Medicine Pharmaceutical Factory) 10 gånger ultrarent vatten i 0,5 timmar, stekpanna avkok i 1,5 timmar, upprepa extraktionen 2 gånger, och den blandade medicinska flytande roterande ångkokaren till en koncentration av 1,5 g /ml och förvara i kylskåp vid 4 grader för senare användning.

1.3 Modelleringsförberedelser: Punkterna är följande.

1.3. 1 Osteoporosmodell: Råttorna föds upp adaptivt under 1 vecka före modellering och delades slumpmässigt in i kontrollgrupp, modellgrupp och behandlingsgrupp, med 16 råttor, 18 råttor respektive 18 råttor, och varje grupp baserades på tidpunkten för 2 veckor och 6 veckor. Var och en delades in i två grupper. Både behandlingsgruppen och modellgruppen bedövades med 1 procent pentobarbitalnatrium (0,4 ml/100 g), huden bedövades, desinficerades, draperades och huden skars. Råttans bilaterala äggstockar avlägsnades. Kontrollgruppen hade bara ett snitt. Låt bli

Borttagning av äggstockarna

1.3. 2 Frakturmodell: 6 veckor efter att osteoporosmodellen förbereds kommer frakturmodellen att förberedas. Efter att råttorna i varje grupp har bedövats, mäts benmineraltätheten i det mellersta lårbenet. , Snitt, gör en modell av tvärgående fraktur i mitten av lårbenet, fixera den med 1 mm Kirschner-tråd, sterilisera och suturera huden på snittet

1.4 Läkemedelsintervention: Röntgendetektion av lårbenet utfördes efter modellering, råttor som misslyckades med modellberedning eliminerades och 80,000 enheter penicillin injicerades intramuskulärt efter modellering för att förhindra infektion. 24 timmar efter operationen fick behandlingsgruppen vattenextraktet av köttbråckspasta (koncentration 1,5g/ml, lg/kg, en gång om dagen). Kontrollgruppen och modellgruppen fick samma volym normal koksaltlösning.

1.5 Provtagning: Råttprover togs 2 och 6 veckor efter interventionen. Efter 1 procent pentobarbitalnatriumbedövning samlades 5-10ml blod upp från bukaortan för att förbereda serum och förvarades i ett -20B-kylskåp. reserv. Därefter avlivades råttorna och proverna på lårbensfrakturerna samlades upp och placerades i 10 procent neutral formaldehyd under 72 timmar.

1.6 Testindikatorer: Punkterna är följande.

1.6. 1 Benmineraltäthet: Alla råttor efter osteoporosmodellen sövdes före frakturmodellen, och sedan mättes benmineraltätheten i det mellersta lårbenet. De tre grupperna av råttor fick prover efter 2 och 6 veckors intervention, och proverna fixerades i 72 timmar och sedan mättes bentätheten igen.

1.6. 2 Mikro-CT: Mikro-CT-skanning utförs efter att provet fixerats i 72 timmar, med 200 bilder ovanför och under frakturänden som området av intresse (R01), skanningsvinkel 360 grader, aktuell 555uA, spänning 42kV, filter Al 0,2 mm, upplösning 8,73um, efter avslutad tredimensionell bildrekonstruktion och analys av kallus. Detektionsparametrarna är som följer: benvolymfraktion BV/TV, bentrabekulär modellfaktor (Tb. Pf); strukturell modellindex (SMI), etc."

1.6.3 Bestämning av serum IL-1P och TGF-P1: Tina råttserumet från kylskåpet vid -20 grader och utför detektionen steg för steg i enlighet med IL-13 och TGF" 1 kit instruktioner.

1.7 Statistiska metoder: använd programvara för statistisk analys SPSS.19 för bearbetning. De experimentella data uttrycks i termer av medel ± standardavvikelse (G±s) och benmineraldensiteten för de tre grupperna av råttor. Mikro-CT-parametrar JL-1 P JGF- P 1-nivåer beräknas medelvärde genom envägsanalys av varians och parvisa jämförelser mellan grupper används. Inspektion, inspektionsnivån är P<0.>

2 resultat

2.1 Bentäthet för de tre grupperna: se tabell 1.

Tabell 1 Resultat av bentäthet i mitten av lårbenet i varje grupp av råttor (x±s, g/cm²)

Obs: Jämfört med modellgruppen, *P<0.05; compared="" with="" the="" control="" group.△=""><>

2.2 Micro-CT tvådimensionellt tvärsnitt: det sagittala tvådimensionella tvärsnittet väljer bilder av lårbenets längdaxel vid varje tidpunkt i varje grupp (se figur 1), och det horisontella tvådimensionella tvärsnittet sektion väljer den 100:e bilden under frakturlinjen för jämförelse (Figur 2) ), det kan ses av figuren att callusen hos varje grupp gradvis ökade med tiden, men den var plastisk i olika grad 6 veckor efter frakturen; samtidigt kan man se att kallus i kontrollgruppen var stor, och callus cortex var tjock och kröp över frakturlinjen efter 6 veckor, medan callus i modellgruppen Det var mindre ben i callus kl. 2 veckor, och callus cortex var lös efter 6 veckor. Även om volymen av kallus i behandlingsgruppen inte var stor efter 2 veckor, var benmassan i callus mer än i modellgruppen. Förhårdnaden var bättre formad efter 6 veckor. Och brottlinjen är inte uppenbar.

Kontrollgrupp Modellgrupp Behandlingsgrupp

Figur 1 Det sagittala tvärsnittet av det mellersta lårbenet i varje grupp

Figur 2 Horisontell sektion av mitten av lårbenet i varje grupp

2.3 Micro-CT tredimensionell rekonstruktion: den tredimensionella rekonstruktionen av kallus vid den frakturerade änden av lårbenet visas i figur 3. Det kan ses från figur 3 att kallus bildades längs periosteum i båda ändarna av frakturen linje 2 veckor efter frakturen i varje grupp var fraktursträngarna i varje grupp fortfarande klara, speciellt i modellgruppen och behandlingsgruppen, medan förhårdnader i kontrollgruppen var tjock och tjock, mestadels med plattor 6 veckor efter frakturen . Trabekelbenen var dominerande och frakturlinjen försvann, medan modellgruppen var lösa ben och frakturlinjen var luddig, men behandlingsgruppen hade mer callusben, vanligt och tjockt trabekulärt ben och frakturlinjen var inte tydlig.

Figur 3 Tredimensionell rekonstruktion av R0I-kallus vid den frakturerade änden

2.4 Mikro-CT-parametrar: Använd programvara för att analysera förhårdnader vid den frakturerade änden. Se tabell 2 för relaterade parametrar.

Tabell 2 Jämförelse av mikro-CT-parametrar för varje grupp (x±s)

Kontrollgrupp Modellgrupp Behandlingsgrupp

Obs: Jämfört med modellgruppen, *P<0. 05;="" compared="" with="" the="" control="" group.=""><0.>

2.5 Serum IL-1 P .TGF-P 1 nivå: se tabell 3.

Tabell 3 Jämförelse av IL-1 P JGF-0 1-nivåer i varje grupp G±s, n=8)

Obs: Jämfört med modellgruppen, *P<0.05; compared="" with="" the="" control="" group,=""><0.05 0="" 3="">

Under de senaste åren har de traditionella kinesiska läkemedlen Yinyangdian, Drynaria fortune och dess föreningar (Qings piller, Liuwei Dihuang piller, etc.) bevisats i klinisk praxis för att avsevärt förbättra osteoporos. Denna typ av kinesisk medicin och föreningar används mest för att ge näring till levern och njurarna. Detta är förenligt med principen att ge näring till njuren och förnya musklerna i mitten och sena stadier av frakturen. "Tio dagar. Den köttiga limbpastan publicerades först i "Shen Nong's Materia Medica". , Varm i naturen, har funktionerna att ge näring till njuren och stärka yang, fylla på essens och märg, ge näring till blod och fuktgivande torrhet, och behaga färg och förlänga livet.

I denna studie var benmineraltätheten för behandlingsgruppen högre än den för modellgruppen efter 2 och 6 veckors intervention (P<0.05). micro-ct="" scan="" bv/tv="" parameters="" showed="" the="" results="" and="" bone="" mineral="" density="" of="" the="" treatment="" group="" at="" two="" time="" points="" after="" the="" intervention="" the="" measurement="" results="" are="" consistent,="" and="" bv/tv="" is="" an="" important="" indicator="" for="" the="" evaluation="" of="">osteoporotiskfrakturläkning. Det återspeglar direkt beninnehållet i kallus. Detta visar att Rouganrong kan ha effekten att främja osteogenes. Analysen kan vara effektiv i köttbråckspasta. Ingredienserna har effekten att uppreglera BMP2, och BMP2 är en av medlemmarna i TGF-8-familjen. Och detta resultat bekräftas också av andra parametrar för Micro-CT-skanningen (Tb. Spjb. N, Tb. Th. SMI). Tb. Sp och SMI speglar de biomekaniska egenskaperna hos kallus, och värdena i behandlingsgruppen är betydligt bättre än modellgruppen, detta tyder också ytterligare på att Roudongrong har effekten att förbättra benförlust, främja osteogenes och påskynda frakturläkning.

När det gäller serum IL-1B- och JGF-P 1-nivåer, efter 2 veckor och 6 veckors intervention, fann man att IL-1P-nivån i behandlingsgruppen var lägre än de andra två grupper vid 2 veckor och vid 6 veckor. Även om IL-1 B-nivån i behandlingsgruppen var högre än kontrollgruppen, fortfarande signifikant lägre än modellgruppen (『<0.05); while="" the="" tgf-p="" 1="" level="" of="" the="" treatment="" group="" was="" higher="" than="" the="" model="" group="" and="" the="" control="" group="" at="" 2="" and="" 6="" weeks,="" and="" there="" was="" no="" statistically="" significant="" difference="" from="" the="" control="" group="" the="" level="" of="" il-1="" p="" directly="" affects="" the="" differentiation="" and="" activity="" of="" osteoclasts.="" an="" increase="" in="" its="" level="" will="" promote="" bone="" resorption="" and="" inhibit="" the="" proliferation="" and="" differentiation="" of="" osteoblasts.="" jhtgf-p="" 1="" is="" closely="" related="" to="" the="" proliferation,="" differentiation,="" and="" migration="" of="" osteoclasts.="" it="" has="" the="" effect="" of="" promoting="" cartilage="" and="" bone="" callus="" formation="" ⑵="" and="" accelerating="" the="" shaping="" of="" bone="" callus.="" this="" suggests="" that="">Cistancheburkförbättra benförlusten, främjar osteogenes och påskyndar frakturläkning. Det kan minska nivån på IL-13 inosteoporotiskfrakturråttor och hämma fraktur. Bencellsaktivitet uppnås; dessutom kan det också hänga samman med attCistanchekan öka nivån av TGF-B 1 i frakturerade råttor, främja osteogen differentiering och kallusmognad och formning.

Sammanfattningsvis, baserat på analysen av bentäthet, mikro-CT-skanningsparametrar och serum IL-1 P, TGF"1-nivåer, fann man att det vattenhaltiga extraktet avCistancheburkförbättra benförlustenochfrämja läkning av osteoporotiska frakturer. Mekanismen kan vara relaterad till detta. Det kan hämma utsöndringen av serum ILT 8 och främja utsöndringen av TGF-B1 hos råttor efterosteoporotiskfrakturer, vilket förbättrar osteoporos och främjar frakturläkning.

4 referenser

[1] Ma Yuanzheng, Wang Yipeng, Liu Qiang, et al. Riktlinjer för diagnos och behandling av osteoporos hos äldre i Kina (2018) [J], Chinese Journal of Osteoporosis, 2018, 24(12): 1541-1567.

[2]Zhu Gang, Sun Haibin, Xu Gang, et al. Den terapeutiska effekten och mekanismen av alkoholextraktet av köttbråck på ovariektomierade råttor med osteoporos [J]. Journal of Jilin University (Medicine Edition), 2018, 44(1): 68-72.

[3] Karvande A, Khedgikar V, Kushwaha P, et al. Kärnvedsextrakt från Dalbergia sissoo främjar frakturläkning och dess tillämpning på ovariektomi-inducerade osteoporotiska råttor [J]. Journal of Pharmacy and Pharmacology, 2017, 69(10): 1381-1397.

[4]Kevin 0'Neill, Christopher MS, Nicholas AM, et al. Mikrodatortomografi bedömning av progressionen av frakturläkning hos möss [j]. Bone, 2012, (6): 1357-1367.

[5] Yao Xinmiao, Shi Xiaolin, Wang Jian, et al. Expertkonsensus om graderad diagnos och behandling av primär osteoporos med traditionell kinesisk medicin i Zhejiang-provinsen (2017) [J], Zhejiang Journal of Traditional Chinese Medicine, 2018, 53(4): 237- 241.

[6] Ma Meng, Zhang Zhiguo, Ma Xiaohui. Forskningsframsteg inom förebyggande och behandling av osteoporos med enstaka och sammansatta kinesiska läkemedel[J]. China Medical Guide, 2018, 20(8) =477-481.

[7] Zhang Yuequan, Zheng Danhong, Xu Jianfeng, et al. Effekten av puré från ökenkött på BMP-2-proteinuttryck i snabbt åldrande osteoporotiska möss[J]. Ningxia Medical Journal, 2014, 36(12): 1114-1116