Etanoliskt bockhornsklöverextrakt: dess molekylära mekanismer mot hudens åldrande och de förbättrade funktionerna genom nanoinkapsling 2
Oct 10, 2022
Vänligen kontaktaoscar.xiao@wecistanche.comför mer information
2.5. Effekt av LNF och bockhornsklöverextrakt på cellviabilitet och kollagenproduktion i humana dermala fibroblastceller
För att undersöka cytotoxiciteten hos formulerad LNF, behandlades celler med blank-, LNF- och bockhornsklöverextrakt vid {{0}} ug/ml (dubbel utspädning) i 24 timmar. Cellviabiliteten mättes med användning av en MTT-analys. Som visas i figur 6a minskade cellviabiliteten i extraktbehandlade celler, medan ingen effekt observerades i blanka och LNF-behandlade celler. Data indikerade att LNF visade lägre toxicitet än extrakt. Vi undersökte vidare förmågan hos LNF på induktion av kollagenproduktion i humana dermala fibroblastceller. Celler behandlades med 7 ug/ml extrakt och 1{{20}}0 ug/mL LNF (7 ug/mL extraktekvivalens), tillsammans med blankpartiklar som kontroll, för 7 och 14 dagar. Som visas i figur 6b, för behandling med LNF, ökade mängden färgat kollagen med 30 procent och 50 procent vid 7 respektive 14 dagar, jämfört med extraktbehandling. Dessutom, i figur 2a, förbättrade den formulerade LNF anti-kollagenasaktiviteten, eftersom IC5o reducerades signifikant till 0,21±0,03 mg/ml jämfört med bockhornsklöverextrakt (0,57±0,02mg/ml). Dessa resultat visade att formuleringen av LNF kunde potentiera en induktion av kollagenproduktion i humana dermala fibroblastceller och förbättra anti-kollagenasaktiviteten hos bockhornsklöverextrakt. Det är möjligt att nanoformuleringen av bockhornsklöver extrakt avsevärt förbättrar dess styrka som en aktiv ingrediens i anti-aging produkter.
2.6. Roll av formulerad LNF på MMP1, MMP9, IL-6 och IL-8 hämning efter UV-exponering
Vi undersökte sedan några möjliga mekanismer för LNF på anti-aging-aktivitet. UV-exponering är en av de viktigaste regulatorerna av hudens åldrande, eftersom det har rapporterats inducera uttrycket av vissa medlemmar av familjen matrismetalloproteinas (MP), vilket orsakar kollagenkollaps, inklusive MMP1, MMP3 och MMP9 [34,35] . Vi observerade att UV-exponering var mycket giftig för samodlade hudceller (Figur 7a) och ökade produktionen av MMP1- och MMP9-cytokiner (Figur 7b). Dessutom kunde behandlingarna av bockhornsklöverextrakt och formulerad LNF avsevärt minska sekretionerna av MMP1 och MP9 jämfört med kontrollceller efter UV-bestrålning. Dessa resultat överensstämde med behandlingen av rutin och resveratrol som kontroll mot åldrande. Noterbart var minskningen av MMP1- och MMP9-uttryck i LNF-behandlade celler signifikant lägre än i extraktbehandlingen. Därför kan LNF minska utsöndringen av MPI och MMP9 vid UV-exponering och därefter förhindra fotoinducerat hudåldrande.
Dessutom kan exponeringen av UVR på mänsklig hud också mediera induktionen av inflammation och pro-inflammatorisk cytokinaktivering, såsom TNF- och interleukiner, inklusive IL-1,IL-2, IL{{4} }, och IL-8 [36]. Vi undersökte sedan funktionen av LNF på hämningen av UV-stimulerad inflammatorisk cytokinproduktion, inklusive IL-6 och IL-8. I figur 7c observerade vi att UV-bestrålning signifikant ökade produktionen av IL{{ 11}} och IL-8 cytokiner i samodlade hudceller. En signifikant minskning av IL-6- och IL-8-uttryck observerades med behandling av bockhornsklöverextrakt jämfört med kontrollen. Intressant nog uppvisade behandlingen av bockhornsklöverextrakt avsevärt högre IL-6- och IL-8-hämningar jämfört med rutin, där dessa hämmande aktiviteter liknade resveratrol-behandlade grupper. Noterbart var att uttrycken av IL-6 och IL-8 i LNF-behandlade celler var signifikant lägre jämfört med gruppen av bockhornsklöverextrakt efter UV-exponering. Tillsammans indikerade dessa resultat att LNF potentiellt skulle kunna hämma UV-medierad IL-6- och IL-8-produktion och därefter förhindra fotostimulerad hudinflammation och hudens åldrande.Som en konsekvens tyder dessa resultat på att etanolextraktet av bockhornsklöver och dess nanoformulering potentiellt skulle kunna användas som aktiva ingredienser för att förebygga åldrande.
3. Diskussion
Bockhornsklöverextrakt har visat sig ha antioxidant, antiradikal och antiinflammatorisk aktivitet i flera studier [29,37], även om dess anti-rynkegenskaper fortfarande inte har utnyttjats. Denna forskning var den första som identifierade en anti-aging-aktivitet av bockhornsklöverextrakt med in vitro kollagenashämmande analys. Tidigare studier har föreslagit användning av växtextrakt med anti-kollagenasaktivitet som en aktiv ingrediens i kosmetiska produkter såsom druvpressextrakt [38], grönt teextrakt [39] och svampextrakt [40]. Dessutom har effekten av bockhornsklöverextrakt på kollagenproduktionen i humana dermala fibroblastceller aldrig rapporterats. Tamara et al. (2006) har visat effekten av flavonoider på kollagensyntes i humana fibroblaster med hjälp av rutin, som en aktiv förening av bockhornsklöverextrakt, som hjälper till att öka kollagen [41]. Denna studie av bockhornsklöver visade sin lovande anti-aging förmåga och representerade rutin som en biologisk markör.
Rutin (3),4',5.7-tetrahydroxi-flavon-3-rutinosid) användes i denna studie eftersom det är en flavonolglykosid som har rapporterats i flera växter, inklusive Fagopyrum esculentum Moench, Ruta graveolens L, Sophora japonica L., Eucalyptus spp. [37l, och bockhornsklöver[17]Rutin har antioxidant, cytoprotektiva, anticancerogena, neuroprotektiva och hjärtskyddande aktiviteter, vilket föreslår dess applicator för att förebygga åldrande och åldranderelaterade sjukdomar. Våra resultat visade att det beredda extraktet visade en hög mängd rutininnehåll, vilket knappast hittades eller upptäcktes som en komponent i bockhornsklöverextrakt i andra studier. De flesta andra studier har rapporterat trigonellin som en viktig kemisk beståndsdel i bockhornsklöverextrakt [18,37,38,42-47].
Även bockhornsklöverextrakt har en potentiell aktivitet som ett medel mot åldrande. Dess färg och stabilitet är fortfarande en utmaning för denna applikation. Nanoinkapsling har rapporterats som en specifik teknologi som kan stabilisera, maskera lukten, förbättra vattenlösligheten, kontrollera frisättningen av biologiska föreningar [48,49] och förbättra det fysiska utseendet på naturliga produkter. Liponisom har använts i denna studie på grund av dess unika egenskaper, som är sammansatta av hydrofila och hydrofoba delar, som kan kapsla in ett brett spektrum av ämnen med olika löslighet [50]. Vi formulerade bockhornsklöverextrakt inkapslade liposomer (LNF), som är en hybridbärare som innehåller liposomer och niosomeregenskaper. Hybridkomponenterna i den utvecklade LNF bekräftades av smälttemperaturen med användning av DSC, vilket återspeglar både de termiska egenskaperna hos liposomer och niosomer.
cistanche kan anti-aging
Stratum corneum är ett yttre lager av hud som fungerar som en effektiv barriär mot skadliga ämnen genom att begränsa deras transport över huden. Användningen av nanobärare har dock visat sig förbättra transdermal leverans genom att förbättra penetrationen av läkemedel eller substanser genom denna barriär[51]. För att undersöka styrkan av LNF vid transdermal leverans har ex vivo porcin hudpenetrering använts eftersom dess anatomiska egenskaper mestadels liknar de hos mänsklig hud, vad gäller hudtjocklek, follikulär struktur och hårdensitet [52]. Våra resultat visar att permeabiliteten för LNF var större och djupare än bockhornsklöverextrakt och rutin, och frisättningsprofilen för LNF hade en långsammare frisättning än bockhornsklöverextrakt, vilket tyder på att den formulerade LNF var märkbart överlägsen de för extrakt vid hudpenetration. Dessutom förbättrade den formulerade LNF anti-kollagenasaktiviteten, eftersom IC-A reducerades signifikant till 0.205±0.03mg/ml jämfört med bockhornsklöver extrakt (0,567±0,02 mg/ml). Dessa resultat visade att formuleringen av LNF kunde potentiera en induktion av kollagenproduktion i humana dermala fibroblastceller och förbättra anti-kollagenasaktiviteten hos bockhornsklöverextrakt. Nanoformulering av bockhornsklöverextrakt hjälper potentiellt till att förbättra dess styrka genom att använda det som en aktiv ingrediens för att förebygga åldrande.
Exponering för UV-strålning är huvudfaktorn för yttre hudåldrande, känd som för tidigt åldrande eller fotoåldring [53.54]. Strålningen orsakar aktivering av cellytreceptorer hos hudkeratinocyter och fibroblaster, vilket leder till en induktion av dermala extracellulära matrixuttryck, särskilt matrixmetalloproteinasfamiljen (MP). Det har visats att kronisk exponering för låga doser av UVA orsakar en uppreglering av mRNA-nivåer av kollagenas-1 (MMP1), stromelysin-1 (MMP3) och gelatinas A (MMP2)[55]. Som en konsekvens uppstår nedbrytningen av hudens elastiska kollagenfibrer, såväl som en avstängning av ny kollagensyntes. Detta fenomen påverkar hudens integritet, elasticitet och strukturer, efter avregleringen av hudens skyddande funktioner, vilket förklarar rynkor och tecken på hudens åldrande [54,56]. Dessutom förmedlar exponeringen av UVR på mänsklig hud ett uttryck av TNF-alfa, som är en viktig regulator av inflammatorisk kaskad i huden. UV-bestrålning initierar också aktiveringen av både inflammation och pro-inflammatoriska cytokinutsöndringar, såsom interleukin-2 (IL-2) och interleukin-6 (1L-6) [36] . Som ett resultat har detta UVR-inducerade inflammatoriska svar en viktig roll för induktionen av bränd hud med tecken på rodnad, irritation och erytem [35.59].
För att förhindra orsaken till för tidigt åldrande skulle det därför vara idealiskt att hitta några nya aktiva medel med dessa förebyggande funktioner. Våra resultat visade att formuleringen av LNF kunde potentiera en induktion av kollagenproduktion i humana dermala fibroblastceller, kunde minska utsöndringen av MP1, MP9, IL-6 och IL-8 vid UV-exponering, och kunde förbättra anti-kollagenasaktiviteten hos bockhornsklöverextrakt. Därför kan ett etanoliskt bockhornsklöverextrakt och dess nanosammansättning vara av potentiell användning som en ny aktiv ingrediens i kosmetiska produkter och den nanoinkapslingen kan förbättra funktionen och aktiviteten hos bockhornsklöverextrakt som ett anti-aging medel. 4. Material och metoder
4.1. Växtmaterial och kemiska reagenser
Fenugreek seed powder was received from Herbal Acharn'sHome Co.,Ltd. (Bangkok, Thailand). Rutin trihydrate (>98 procent renhet), tricinbuffert, kollagenas från clostridium histolyticum och FALGPA (N-[3(2-furyl) akryl)-Leu-Gly-Pro-Ala), direkt röd 80, pikrinsyra och dimetylsulfoxid var köpt från Sigma-Aldrich (St.Louis, MO, USA) Acetonitril, etylacetat, absolut etanol, myrsyra, natriumdehydratfosfat, dinatriumvätefosfat, saltsyra och natriumhydroxid köptes från Carlo Erba (Emmendingen, Tyskland). Etanol av kommersiell kvalitet köptes från Italmar Co., Ltd. (Bangkok, Thailand). Kolesterol köptes från Cosmeplus Co., Ltd. (Bangkok, Thailand). Propylenglykol och solubiliseringsmedelsblandning köptes från S.Tong Chemicals Co,Ltd. (Nonthaburi, Thailand). Sorbitanoleat köptes från Croda Co., Ltd. (Bangkok, Thailand). Fosfolipid (Phospholipon 90G) köptes från Cargill Siam Ltd. (Bangkok, Thailand). Tokoferolacetat köptes från Namsiang Co, Ltd. (Bangkok, Thailand). Konserveringsmedlet köptes från Forecus Co., Ltd. (Bangkok, Thailand). Paraformaldehyd köptes från Himadia Laboratories (Mumbai, Indien) och 3-(4,5-dimetyltiazol-2-yl)-2,5-difenyltetrazoliumbromid köptes från Calbiochem (Burlington, MA, USA).
4.2.Extraktion
Bockhornsklöverfröpulver (500 g) macererades med 95 procent etanol (1:5) under 3 dagar. Extraktionen upprepades tre gånger (3 x 2500 ml). Hela extraktlösningen filtrerades med etanol som indunstades under 100 mbar vid 40 grader med användning av en rotationsindunstare (Heidolph, Schwabach, Tyskland). Det erhållna extraktet var den oljiga gulbruna pastan med 5 % utbyte (vikt/vikt) och den hölls vid 4 grader tills användning.
4.3. UHPLC-validering och identifiering av rutin i bockhornsklöverextrakt
Rutintrihydrat, som standardmarkör, användes för att analysera bockhornsklöverextrakt. UHPLC-metoden utvecklades och validerades i termer av linjäritet, noggrannhet, precision och känslighet[31,32] av ett Shimadzu LC-30 AD UHPLC-system som består av en diodarraydetektor SPD-M20A och en autosampler SIL-30AC. Metoden använde en SUPLECO Titan C18-kolumn (5 cm ×2,1 mm, 1,9 um, SUPLECO, Burlington, VT, USA) vid 30 grader och detekterade en våglängd på 26{{ 19}} nm. Den mobila fasen anpassades från Kenny et al. [45]. Kortfattat, 0.05 volymprocent myrsyralösning i ultrarent vatten(A) och 0,05 volymprocent myrsyra i acetonitril (B) framställdes med ett flöde på 0,25 ml/min i gradientläge: starttillståndet var 10 procent B i 1,0 min, ökade till 75 procent B i 3,5 min, minskade till 10 procent B i 0,75 min och hölls i 0,25 min.
4.4. Kollagenasanalys
En kollagenasanalys utfördes för att bestämma anti-kollagenasaktivitet [60]. Blandningslösningen, innehållande 25 μL 50 mM tricinbuffertlösning (pH7,5), 25 μL 2 enheter/ml kollagenas (clostridium histolyticum typ IA), och 25 μL av provet, bereddes och inkuberades vid rumstemperatur i 15 min. För att starta reaktionen sattes 10 uL av det syntetiska substratet och 2 mM N-[3-(2-Furyl) akryloyl-Leu-Gly-Pro-Ala(FALGPA) till blandningslösningen och inkuberades i 20 min. Förändringen i absorbans för varje supernatant mättes vid 340 nm (Synergy H1 mikroplattläsare) och ICso-värdena beräknades genom att plotta en linjär regressionskurva som visar provkoncentrationer på x-axeln och procentuell inhibering på y-axeln. Den procentuella hämningen beräknades med hjälp av följande ekvation:
4.5.Cellkultur
Humana dermala fibroblastceller köptes från American Type Culture Collection: ATCC (PCS-201-010) och immortaliserade humana keratinocyter (HaCaT) köptes från Cell Lines Service, Tyskland (kat. nr. 300493). Celler odlades i Dulbeccos modifierade Eagles media (DMEM) (Gibco, Storbritannien) kompletterat med 10 procent FBS (Gibco, Storbritannien), 1 procent penicillin (100 enheter/mL) och streptomycin (100 ug/ml) (Gibco, St. Louis) , MO, USA). Celler inkuberades vid 37 grader under en 5 procentig koldioxidmiljö.
4.6. Kollageninnehåll och Picrosirius röd färgning
Humana dermala fibroblastceller såddes vid 2,5 × 1 04 celler/brunn i plattor med 48 brunnar och inkuberades i 24 timmar. Cellerna behandlades sedan med olika koncentrationer av liponio-som utan extrakt (anges som blank), liponiosominkapslande bockhornsklöverextrakt (LNF) och bockhornsklöverextrakt i 7 och 14 dagar, med 005 procent DMSO används som vehikelkontroll. Media byttes varannan dag. Cellerna tvättades sedan med PBS och fixerades med 100 ul av 4 procent PFA under 10 min. Celler tvättades med PBS (två gånger) och färgades med 100 ul av 0,1 % direkt röd 80-lösningar under 10 min. Efter färgning tillsattes 0,01 NHCl i 70% etanol för att tvätta överskottet av färgämnet. Färgat kollagen löstes med 10 ul 0,5 N NaOH och absorbansen mättes vid 540 nm med användning av en mikroplattläsare (Synergy H1 mikroplattläsare). Procentandelen kollageninnehåll beräknades med hjälp av följande ekvation:
4.7. Cellviabilitetsanalys
Humana dermala fibroblastceller såddes med 2x104 celler/brunn i 96-brunnars plattor och inkuberades i 24 timmar. Efter inkubation tillsattes olika koncentrationer (0-100 ug/ml) av liposomerna utan extrakt (blank), LNF och bockhornsklöverextrakt och odlades i 24 timmar. Sedan tillsattes 100 μL MTT (1 mg/ml) i varje brunn och inkuberades i 4 timmar. DMSO tillsattes för att lösa formazanprodukten. Absorbansen mättes vid 570 nm med användning av en mikroplattläsare (Synergy Hl mikroplattläsare). Procentandelen av cellviabilitet beräknades med hjälp av följande ekvation:
4.8.Liponiosomformulering
Föremulgering efter homogenisering användes för liposomformulering. En blandning av fosfolipid och emulgeringsmedel användes för att bilda ett sfäriskt lipiddubbelskikt och kolesterol användes för att förbättra partiklarnas styvhet [15]. Kortfattat dispergerades sojabönlecitin, kolesterol och emulgeringsmedel i propylenglykol och värmdes till 70-80 grader (oljefas), som visas i tabell 2. Bockhornsklöverextrakt löstes i propylenglykol/vatten (vattenfas) och upphettades i samma vattenbad. Vattenlösningen av extraktet tillsattes kontinuerligt till lipidkomponenter och homogeniserades vid 8000-100 rpm i 5-10 min med användning av höghastighetsomrörning (Heidolph Silent Crusher M, Kenilworth, N, USA). Blandningen kyldes till 50 grader och tokoferolacetat tillsattes och homogeniserades i ytterligare 10 min för att erhålla LNF. Morfologin för LNF observerades genom transmissionselektronmikroskopi (TEM, JEOL, Peabody, MA, USA), med den hydrodynamiska storleken, polydispersitetsindex Pdl och zetapotential undersökta med hjälp av dynamisk ljusspridning (DLS, Nanosizer ZS, Malvern Instruments, Worcestershire, STORBRITANNIEN). Bekräftelsen av liposomsmältningsbeteende undersöktes med hjälp av differentiell skanningskalorimetri (DSC, Mettler Toledo DSC1). Viskositeten för provet mättes med en digital Brookfield-viskosimeter (modell HBDV-IIIU CP). Kortfattat användes 0,5 g prover och viskositeten undersöktes med en CP-40-spindel, med den kontrollerade hastigheten vid 0,5 rpm under 20 minuter vid omgivningstemperatur.
För att utvärdera stabiliteten hos LNF hölls partiklarna vid 4 grader, 25 grader och 40 grader i 3 månader, och förändringarna i partikelstorlek och morfologi undersöktes.
Liposom- och noisominkapslingsextrakt av bockhornsklöver (LF och NF) formulerades med en liknande metod som LNF. LF framställdes utan tillsats av sorbitanoleat till oljefasen, medan niosom (NF) framställdes utan tillsats av fosfolipidkomponenten. Deras fysikalisk-kemiska karakteriseringar rapporterades i den kompletterande tabell S1.
4.9. Procentandelar av inkapslingseffektivitet och bioaktiv laddning
Inkapslingseffektivitet (procent EE) och bioaktiv belastning (procent BL) av LNF beräknades genom att bestämma mängden inkapslat läkemedel med användning av en ultrafiltreringsteknik. Mängden rutin användes som standardmarkör. Efter att 20 mg/ml LNF lösts i avjoniserat vatten, centrifugerades det vid 80, 000 rpm under 4 timmar. Supernatanten samlades upp och sedan utvärderades det oinkapslade rutinet med en ultrahögpresterande vätskekromatografiteknik (UHPLC)[61]. Procenten EE och procent BL beräknades med följande ekvationer:
4.10.Franz diffusionscell
En in vitro permeabel studie av 7mg/ml bockhornsklöverextrakt och LNF undersöktes i ett Franz diffusionscellsystem [62]. Det syntetiska membranet (Biomax 500 kDa ultrafiltreringsskiva, Merck, MA, USA) placerades mellan en donator och en receptoravdelning. Fosfatbuffertsaltlösning (PBS) med ett pH av 5,5 omrördes vid 50 rpm (37 grader) och användes som ett receptormedium. Bockhornsklöverextrakt och LNF applicerades på membranet i donatorcellslocket. Prover genomträngdes genom membranet och samlades in från receptorfacket vid 0,2,4,6,8,12 och 24 timmar. Den kumulativa permeerade rutinen utvärderades och beräknades med UHPLC-tekniken.
4.11. Permeabilisering av porcin hud
Genomträngningen av LNF genom grishud visualiserades med bildmassmikroskop (IMS, SHIMADZU, modell: iMScopoe TRIO, Kyoto, Japan). Svinskinnet skars i 1,5 x 1,5 cm2. Rutin, bockhornsklöverextrakt och LNF applicerades på den skurna svinhuden och lagrades vid 4 grader i 24 timmar. Proverna skars med hjälp av en kryostat, placerades på en indiumtennoxidbelagd glasskiva och sprutades med en 9-aminoakridinmatrissubstans (9-AA). Proverna lagrades i-20 grad innan analys. En överlagring av de optiska bilderna av rutin analyserades vid 609,15 m/z.
4.12. Karakterisering av differentiella skanningskalorimetrar (DSC).
Differential scanning kalorimetri (DSC) analys utfördes för att bestämma smältpunkten för LNF med hjälp av en differential scanning kalorimeter (DSC, Mettler Toledo DSC1) [63]. Efter noggrann vägning placerades proverna i aluminiumpannor och förseglades med ett lock. I skanningsprocessen applicerades en uppvärmningshastighet på 10 grader i temperaturområdet från 25 till 350 grader under en kvävgas renad med 40 ml/min. 4.13.Konstruktion av mänskliga samodlade hudceller
Humana dermala fibroblastceller såddes med 8,5 × 104 celler/brunn i 12-brunnars kulturinlägg (Corning, Corning, NY, USA) och odlades i 24 timmar. Det andra och tredje lagret av dermal fibroblast tillsattes upprepade gånger till det första lagret under på varandra följande dagar. Efter 24 timmars tillsats av det tredje skiktet såddes HaCaT sedan vid 8,5 × 10 graders celler/brunn på de bildade fibroblastskikten och odlades i ytterligare 24 timmar före experimentet.
4.14.Undersökning av cellviabilitet och MMP-utsöndring efter UV-exponering i samodlade hudceller
Humana samodlade hudceller förbehandlades med 7 ug/mL extrakt och 100 ug/mL LNF (7 ug/mL extraktekvivalens), tillsammans med 100 ug/ml blank och 10 ug/ml resveratrol som en positiv kontroll , i 24 timmar. Samodlade hudceller tvättades sedan två gånger med PBS och utsattes för 5J/cm2 UVA och 30mJ/cm2 UVB-bestrålning (Solar Simulators, NY, USA). Efter UV-bestrålning inkuberades samodlade hudceller ytterligare med testade prover i 24 timmar. Supernatanten samlades sedan in för MMP1- och MP9-kvantifieringar. Nivåerna av UV-inducerade MMP1- och MMP9-utsöndringar i humana samodlade hudceller mättes med enzymkopplade immunosorbentanalyskit (MMP1: ab215083 och MMP9: ab100610, abcam, Cambridge, Storbritannien) enligt tillverkningsprotokoll.
Viabiliteten av humana samodlade hudceller efter UV-exponering utvärderades med användning av ett CellTiter-Glo luminescerande cellviabilitetsanalyskit (Promega, Madison, WI, USA). Efter 24 timmars UV-exponering tvättades samodlade hudceller två gånger med PBS och 100 μL Glo Lysis Buffer (Promega, Madison, WI, USA) tillsattes i varje brunn. Efter inkubation under 10 minuter tillsattes 50 ul CellTiter-Glo-reagens och inkuberades vid rumstemperatur under 10 minuter. Den luminiscerande signalen mättes sedan med användning av en mikroplatta luminometer (SpectraMax L, Molecular Devices).
4.15.Statistisk analys
Resultaten representerades som medel ± standardavvikelse (SD). Signifikanta skillnader analyserades med ett studenttest eller envägs- eller tvåvägsvariansanalys (ANOVA) följt av Tukeys post hoc-test (GraphPad Prism 9), med p-värden<0.05 considered="" statistically="">
5. Slutsatser
Tillsammans gav denna forskning två alternativa förslag. För det första observerades rutin inte bara i termer av skydd mot ultraviolett strålning och antioxidativ substans utan användes också som en standardmarkör för kromatogramfingeravtryck och en nyckelreferens för anti-aging-aktivitet från extrakt av bockhornsklöverfröpulver. För det andra demonstrerades molekylära mekanismer bakom etanolextrakt mot åldrande. Extraktet visade nya biologiska egenskaper, såsom anti-kollagenasaktivitet, inducerande kollagenproduktion och hämmande av kollagennedbrytning, vilket hänvisar till ett potentiellt alternativt naturligt anti-aging medel för anti-aging produkter. Inkapslingstekniker kan användas för att skydda de bioaktiva föreningarna och kemiska och fysikaliska nedbrytningsprocesser, och förlänga deras biologiska aktivitet fram till användning. Denna teknik minskar också toxiciteten hos örtextrakt. I denna studie är formulerade liposomer mycket stabila och har en förlängd frisättning. Nano-formulering kan också förbättra styrkan hos bockhornsklöverextrakt på anti-aging egenskaper. På basis av denna studie föreslår vi att LNF potentiellt skulle kunna användas som en lovande aktiv ingrediens för att förebygga hudens åldrande.
Den här artikeln är extraherad från Pharmaceuticals 2022, 15, 254. https://doi.org/10.3390/ph15020254 https://www.mdpi.com/journal/pharmaceuticals
