Grön syntes och karakterisering av järnnanopartiklar syntetiserade från vattenhaltigt bladextrakt av Vitex Leucoxylon och dess biomedicinska tillämpningar

Abstrakt:Den kalla extraktionsmetoden användes för att erhålla det vattenhaltiga extraktet avVitex leukoxylonblad i förhållandet 1:10. Järnnanopartiklar (FeNP) syntetiserades med användning av vattenhaltigt bladextrakt avV. leucoxylonsom reduktionsmedel. Det fytomedicinska tillvägagångssättet användes för att göra FeNP genom att blanda 1 mL växtextrakt med 1 mM järnsulfat. Svepelektronmikroskopi (SEM), Fourier-transform infraröd spektroskopi (FTIR), ultraviolett-synlig spektroskopi (UV-Vis) och energidispersiv röntgenspektroskopi användes för att undersöka de syntetiserade FeNP:erna. Den reducerande reaktionen visades genom en förändring i färgen på lösningen, och bildandet av svart färg bekräftar att FeNPs har bildats. Den största absorptionstoppen (max) hittades vid 395 nm i UV-Vis spektralanalys. FTIR-spektra förV. leucoxylonvattenhaltigt bladextrakt visade förskjutningar i vissa toppar, nämligen 923,96 cm−1 och 1709,89 cm−1, med funktionella grupper karboxylsyror, omättade aldehyder och ketoner, som saknades i FTIR-spektra av FeNP och är ansvariga för FeNP-bildning. FeNP med diametrar mellan 45 och 100 nm observerades i SEM-bilder. Skapandet av FeNPs bekräftades av EDX, som visar en stark signal i den metalliska järnregionen vid 6–8 Kev. XRD avslöjade en kristallin natur och en medeldiameter på 136,43 nm.Antioxidant,antiinflammatorisk, cellgifter ochsårläkningin vitro-tester rapporterade signifikant aktivitet av FeNP. De kumulativa resultaten av denna studie indikerar att den gröna syntesen av FeNPsökar dess biologiska aktivitetoch kan fungera somett möjligt dermalt sårläkande medelochcellgifter mot cancer. Framtida studie behövs om identifiering av mekanismer som är involverade i syntesen av FeNPs avV. leucoxylonoch dess biomedicinska tillämpningar.

Nyckelord:Vitex leukoxylon; nanopartiklar av järn; SEM; sårläkning; cellgifter

CISTANCHE FÖRMÅNER FÖRANTIOXIDANT,ANTI-INFLAMMATORISKT, CYTOTOXISKA, OCHSÅRLÄKNING

1. Introduktion

Tillämpningen av nanoteknik inom vetenskap och teknik för att tillverka nya material på nanoskalanivå är ett snabbt växande område [1]. Nanoteknik handlar om tillverkning av material på atomär nivå för att få distinkta egenskaper, som kan manipuleras för föredragna tillämpningar. Detta område växer snabbt med sina tillämpningar inom vetenskap och teknik för att tillverka nya material på nanoskalanivå [2]. Olika industrisektorer har anammat nanoteknik de senaste åren på grund av dess tillämpningar inom områdena elektroniska lagringssystem [3], bioteknik [4], magnetisk separation och förkoncentration av målanalyter, riktad läkemedelsleverans [5] och vehiklar för gener och läkemedel leverans [3,5,6]. Följaktligen har dessa partiklar potential att göra en betydande inverkan på samhället som ett resultat av det breda utbudet av tillämpningar för vilka de kan användas. Nanopartiklar (NP) är massor av partiklar som har en storlek på mindre än hundra nanometer och anses vara viktiga strukturella massor inom nanoteknikområdet. NPs högre aktivitet är både deras definierande egenskap och den kvalitet som de är mest anmärkningsvärda för [7]. Organiska och oorganiska NP är de två primära klassificeringarna som kan tillämpas på nanopartiklar. Oorganiska nanopartiklar kan inkludera magnetiska NP:er, ädelmetall-NP:er (som guld och silver) och halvledar-NP:er (som titandioxid och zinkoxid). Organiska nanopartiklar kan inkludera kol-NP. Oorganiska nanopartiklar väcker stor uppmärksamhet eftersom de erbjuder överlägsna materialegenskaper tillsammans med funktionell mångsidighet. De har undersökts som möjliga verktyg för medicinsk bildbehandling såväl som för behandling av sjukdomar på grund av de storleksegenskaper de besitter [8]. De olika kemiska, fysikaliska och biologiska egenskaperna hos NP påverkas starkt av en mängd olika parametrar, inklusive nanopartikelstorlek och morfologi, såväl som ytbeläggning, som normalt bestäms under syntesen av nanopartiklar. Förlusten av avsedd biologisk aktivitet orsakas av en minskning av kolloidal stabilitet. pH, jonstyrka och en mängd proteiner som interagerar med AgNP under relevanta omständigheter har alla en inverkan på kolloidal stabilitet. Som ett resultat är korrekt val av syntesteknik avgörande för att erhålla de önskade partikelegenskaperna för specifika tillämpningar [9].

För närvarande finns det en mängd olika NP:er som kan syntetiseras med en mängd olika fysikaliska, kemiska, biologiska och hybridprocesser. Enligt resultaten från ett stort antal forskningsstudier inkluderar de fysikaliska och kemiska processerna för att producera nanopartiklar användningen av organiska lösningsmedel, farliga föreningar, betydande mängder energi och stabiliseringsmedel som inte är biologiskt nedbrytbara [10]. Därför, inom området för grön nanoteknik, blir syntesen av NP med naturligt tillgängliga material som växtextrakt, olika mikroorganismer, deras metaboliter och några naturliga humusämnen [11,12] som reducerande och täckande medel alltmer populärt. Syntesmetoder som är vänliga mot miljön har använts för att producera en mängd olika metalliska nanopartiklar, inklusive silver, guld, järn, koppar och zink. Utvecklingen av enkla och miljömässigt acceptabla metoder för syntes av NP är en av nanoteknikens nyckelområden. Biomaterial som mikroorganismer och växtextrakt kan användas i processen att framställa en mängd olika NPs [13,14]. Men eftersom vissa organismer är patogener är det farligt att hantera dem. För att frodas måste mikroorganismer hållas i kultur och utsättas för noggrant kontrollerade förhållanden, inklusive temperatur, pH och andra parametrar. Eftersom det eliminerar den mödosamma processen att upprätthålla den mikrobiella kulturen, kan syntesen av NP med hjälp av växtdelar ibland visa sig vara mer fördelaktigt än andra biologiska processer [15]. Som ett resultat har det fått mycket uppmärksamhet på grund av dess inneboende egenskaper, som inkluderar utnyttjande av naturresurser, snabbhet, miljövänlighet och godartadhet. Dessa lockande egenskaper är absolut nödvändiga för användning i medicinska tillämpningar. Nanopartiklarna som produceras av grön syntes har en storlek som är väldefinierad och under kontroll, de är fria från föroreningar och metoden är enkel att skala upp. Dessa är några av de ytterligare fördelarna med grön syntes [16]. Den biologiska aktiviteten hos de syntetiserade nanopartiklarna bestäms och finjusteras till stor del av de gröna materialen som används för stabilitet och reduktion av metalljoner. En av de ideala egenskaperna hos NP bör vara att den måste ha en enastående förmåga att skilja mellan potentiella mål (patogener) och däggdjursceller (värd) [17].

På grund av detta undersöktes det vattenhaltiga extraktet av V. leucoxylon-blad för dess potential att underlätta bildandet av järnnanopartiklar (FeNP) i den aktuella forskningen. Järn är ett av de grundämnen som finns i det största överflöd på jorden. Nyligen har det kommit att bli erkänt som en ny klass av viktiga NP: er på grund av det faktum att det har en mängd unika egenskaper, inklusive hög tvångsförmåga och superparamagnetism. Cataly sis, elektroniska enheter, informationslagring, sensorer, läkemedelsleveransteknik, biomedicin, magnetiska registreringsenheter och miljösanering är bara några av de många spännande applikationer som har använt sig av FeNPs [18]. Dessutom, enligt ett antal studier, kan FeNPs skapas från olika växtextrakt. Dessa växtextrakt inkluderar Eucalyptus globulus blad [19], granatäpple blad [20] och bananskal ask [21]. Växten V. leucoxylon, som användes i den aktuella studien, är en medlem av familjen Verbenaceae. Det är också känt som det fembladiga kyska trädet (Kannada: Sengeni, Holenekki, Hollalakki) och kan hittas i regionen längs flodstränderna i vintergröna och halvt vintergröna skogar och fuktiga lövskogar längs bäckar. Det kan nå en höjd på upp till 20 m och klassificeras som ett blygsamt till stort lövträd. Längs med Indiens västra Ghats-skogar finns den i stort antal. V. leucoxylon-bladextraktinfusion har rapporterats ha en mängd olika farmakologiska aktiviteter såsom antiinflammatoriska, antioxiderande, antipsykotiska, antidepressiva, antiparkinsoniska och antihyperlipidemiska aktiviteter [22]. Naturprodukter har genom historien och särskilt inom folkmedicinen använts för behandling av en mängd olika åkommor och sjukdomar. Denna praxis går tillbaka till antiken. Metoderna för naturlig produktkemi som har funnits länge har gjort det möjligt att hitta en stor variation av bioaktiva sekundära metaboliter som kommer från terrestra och marina källor. Ett betydande antal av dessa naturligt förekommande substanser övervägs nu för användning som potentiella läkemedel [23].

Det finns ett stort antal naturligt förekommande kemikalier och näringsämnen som ännu inte har upptäckts och som är användbara för mänskligheten. Som en konsekvens av detta finns det en omedelbar efterfrågan på forskning och utveckling av innovativa terapeutiska alternativ som kan användas framgångsrikt i terapeutiska interventioner samtidigt som det skapar ett minimum av negativa effekter.

Den för närvarande föreslagna gröna syntesprocessen för FeNPs är distinkt och kostnadseffektiv. I den aktuella studien gjordes ett försök att skapa nanopartiklar vid rumstemperatur utan användning av några kemikalier eller fysikaliska tekniker. Vitex leucoxylon-växten valdes i ett försök att syntetisera järnnanopartiklar, och omfattande systematiska in vitro-modeller utfördes för att bedöma styrkan hos järnnanopartiklar. Endast ett begränsat antal forskningsstudier om begreppet nanopartiklar och deras biomedicinska tillämpningar har publicerats på denna växt. Som en konsekvens beslutade vi att det skulle vara fördelaktigt att genomföra denna forskning med följande mål i åtanke: screening för fytokemikalier och mätning av antalet sekundära metaboliter i V. leucoxylon; grön syntes och karakterisering av FeNP från V. leucoxylon; jämförande studie av antioxidanter och antiinflammatoriska effekter av V. leucoxylon och dess FeNPs in vitro; in vitro cytotoxisk aktivitet av vattenhaltigt bladextrakt av V. leucoxylon och dess FeNP mot hudcancer, lungcancer och oral cancer; in vitro sårläkningsaktivitet av vattenhaltigt bladextrakt av V. leucoxylon och dess syntetiska FeNPs genom skrapanalys.

2. Material och metoder

2.1. Samling av växtmaterial

I mars månad 2022 plockades färska blad av V. leucoxylon från Anshi-skogsområdet i västra Ghats i Uttar Kannada-distriktet i delstaten Karnataka i Indien. Bladen identifierades och autentiserades av Dr. Kotresha K., taxonom, Institutionen för botanik, Karnataka Science College, Dharwad; Karnataka, genom att hänvisa till kupongexemplaret som deponerats på Institutionen för botanik, Karnataka Science College, Dharwad, Karnataka. Efter att ha samlats upp tvättades det färska växtbladsmaterialet under rinnande kranvatten, soltorkades och maldes sedan till ett grovt pulver med hjälp av en mekanisk kvarn. Pulvret förvarades i behållare som förseglades vid rumstemperatur så att det kunde användas senare i processen med rålösningsmedelsextraktion.

2.2. Beredning av växtextrakt

Med användning av en Soxhlet-anordning extraherades 25 g pulveriserade blad under 48 timmar med 250 ml destillerat vatten. Det vattenhaltiga extraktet koncentrerades ytterligare med användning av en rotationsindunstare och torkades sedan i exsickatorer innan det förvarades i en sluten flaska vid 4 ◦C fram till användning. För syntesen av FeNP användes det vattenhaltiga extraktet som ett reducerande och stabiliserande medel.

2.3. Lösningsmedel och reagens

Alla använda kemikalier och lösningsmedel var av analytisk kvalitet och köptes från Hi-media (Hubli, Indien).

2.4. Fytokemisk analys

Genom att följa proceduren som beskrivs av Deepti et al. (2012) testades det råa vattenhaltiga bladextraktet V. leucoxylon kvalitativt för närvaron av olika fytokemiska beståndsdelar såsom flavonoider, alkaloider, fenoler, glykosider, steroler, ligniner, saponiner, antrakinoner, tanniner och reducerande sockerarter [24].

2.5. Syntes av järnnanopartiklar

Först sattes 1 ml av V. leucoxylon vattenhaltigt bladextrakt till 10 ml 0,05 mM FeS04 vattenlösning och blandningen skakades. Vid rumstemperatur och i mörk miljö utfördes hela reaktionsblandningsprocessen. Oxidations/reduktionsreaktionen var tydligt synlig efter att den färglösa reaktionsblandningen hade inkuberats och reagerat under den tid som krävs [25]. För att avlägsna eventuella spår av vattenhaltigt extrakt från de nysyntetiserade FeNPs, som fick torka i pulver efter centrifugering vid 10,000 rpm i tio och 10 minuter under den önskade reaktionsperioden, centrifugerades den vattenhaltiga blandningen innehållande FeNPs. en andra gång och återdispergerades i dubbeldestillerat vatten och torkades [26].

2.6. Karakterisering av FeNPs

Flera metoder, såsom ultraviolett-synlig spektroskopi (UV-Vis), Fourier-transform infraröd spektroskopi (FTIR), svepelektronmikroskopi och energidispersiv röntgenspektroskopi, röntgendiffraktion (XRD), partikelstorleksanalysator och zeta potential, användes för att karakterisera FeNP.

2.6.1. UV–Synlig-spektroskopi-baserad analys

Först utvärderades 1 ml alikvot av kolloidal FeNPs-lösning i kvartskyvetter med UV-synlig spektroskopi (U-3310, Hitachi, Tokyo, Japan), med destillerat vatten som referens och 0.05 mM FeSO4 som blank för att validera reduktionen av järn(III)jonerna i den kolloidala lösningen [27].

2.6.2. FTIR-baserad analys

Funktionsgrupperna (grupperna) som var bundna på järnytan och var involverade i syntesen av FeNP identifierades med hjälp av FTIR-spektroskopi (S700, Nicolet, MA, USA), [28]. Efter 72 timmars inkubation isolerades FeNP genom upprepad centrifugering (3–4 gånger) av reaktionsblandningarna vid 10, 000 rpm under 15 minuter. Supernatanten ersattes med avjoniserat vatten och pelleten lagrades som pulver. Efter att ha torkats sattes FeNP genom en FTIR-analys med användning av kaliumbromidpelleteringsprocessen i ett förhållande av 1:100.

2.6.3. Scanning-elektron-mikroskopi-baserad analys

Svepelektronmikroskopi (JSM-IT 500, Jeol, Boston, MA, USA), användes för att undersöka nanopartiklarna och fastställa deras ytform. Substrat preparerades på ett rent 5 mm x 5 mm Si-substrat kluvet från en 100 mm diameter wafer. Substratet fick reagera under 2 timmar till 6 timmar och provet preparerades genom att centrifugera en kolloidal lösning vid 10, 000 rpm under 5 minuter. Pelleten torkades efter att ha återcentrifugerats många gånger, varefter den återdispergerades i avjoniserat vatten och proceduren upprepades. Slutligen erhölls den torra pelleten, som ytterligare utsattes för den strukturella karakteriseringen genom SEM-analys enligt proceduren som beskrivs av National Institute of Standards and Technology, NIST-2007 [29].

2.6.4. Energidispersiv röntgen

Efter torkning på ett kolbelagt koppargaller analyserades de reducerade FeNP med EDX (JSM-IT 500, Jeol, Boston, MA, USA), vilket också gjorde det möjligt att bestämma den elementära sammansättningen.

2.6.5. Zeta potential

Observationer av NP:er Zetapotentialen är ett användbart verktyg för att få ytterligare insikter om stabiliteten hos de kolloidala NP:er. Amplituden för zetapotentialen ger en hint om kolloidens möjliga stabilitet. Enligt Meléndrez et al. (2010) anses partiklar vara stabila om deras zetapotentialvärden antingen är mer positiva än plus 30 mV eller mer negativa än 30 mV [30]. Detta faktum bör beaktas. Laser-zeta-mätaren användes för att erhålla avläsningar av ytans zeta-potentialer (Malvern zeta seizer 2000, Malvern, Storbritannien). De flytande proverna av nanopartiklarna, totalt 5 milliliter, späddes med 50 milliliter dubbeldestillerat vatten och 2 mm per kvadratmeter natriumklorid användes som suspenderande elektrolytlösning. Därefter modifierades pH tills det nådde den önskade nivån. Proverna omrördes under totalt 30 min. Efter skakning av behållaren noterades pH vid jämvikt och zetapotentialen för metallpartiklarna bestämdes. I syfte att bestämma ytpotentialen för FeNP:erna användes zetapotential. I varje fall var det angivna värdet medelvärdet av resultaten från tre individuella mätningar. När värdena för zetapotentialen varierade från högre än plus 30 mV till lägre än 30 mV, bestämdes kriterierna för stabiliteten hos NPs [31].

2.6.6. Partikelstorleksanalysator

För att bestämma provets partikelstorlek utfördes PSA-testning på det efter att det hade frystorkats och sedan dispergerats med hjälp av en ultraljudsapparat (SZ-100, Horiba, Kyoto, Japan).

2.6.7. Röntgendiffraktionsanalys (XRD) Analys

De syntetiserade järnnanopartiklarna från vattenhaltigt bladextrakt av V. leucoxylon utsattes för XRD-analys (Smart Lab SE, Rigaku, Tokyo, Japan) för att bestämma nanopartiklarnas natur och medelstorlek.

2.7. Bestämning av antioxidantaktivitet genom att använda in vitro-metoder

2.7.1. Järnjon-reducerande antioxidanteffektanalys (FRAP)

Enligt Oyaizu (1986), med en mindre modifiering, bedömdes ferrijoners reducerande kraft [32]. Under 30 min vid 50 ◦C sattes 2,5 ml 20 mM fosfatbuffert och 2,5 ml 1 procent kaliumferricyanid till 2,5 ml V. leucoxylon-bladextrakt och dess syntetiserade FeNP blandas med Kombinationen. Efter inkubationsperioden kompletterades blandningen med 2,5 ml 10% vikt/volym triklorättiksyra och 0,5 ml 0,1% vikt/vikt järnklorid innan den inkuberades i ytterligare 10 minuter. Slutligen användes en UV-V-spektrofotometer för att detektera absorbansen vid 700 nm. Som standard användes askorbinsyra. Varje prov testades tre gånger.

2.7.2. Analys av väteperoxidrening

Baserat på förmågan hos vattenhaltigt bladextrakt av V. leucoxylon och dess syntetiska FeNP:er att avlägsna väteperoxid, utvärderades antioxidantaktiviteten hos dessa föreningar. Först sattes {{0}},6 mL fosfatbuffert (pH—7,4) innehållande 4 mM H2O2 till 0,5 mL standardaskorbinsyra i en känd koncentration, såväl som rör som innehöll växtextrakt i olika koncentrationer från 100 µL till 500 µL (pH—7,4). Med hjälp av en fosfatbuffert och väteperoxidfri blanklösning bedömde vi lösningens absorbans vid 230 nm efter 10 min. Fosfatbuffert användes för att skapa kontrollen istället för provet eller standarden [33]. Varje prov testades tre gånger. Formelmetoden användes för att beräkna hämningsprocenten.

2.7.3. DPPH friradikal-rening

Analys V. leucoxylon bladextrakt och syntetiserade FeNPs testades för deras förmåga att rensa fria radikaler med hjälp av DPPH-radikal som reagens [34]. Prover kombinerades med DPPH-radikallösning (60 M) i etanol (100 µL) vid olika koncentrationer (vikt/volym). En UV-Vis-spektrofotometer användes för att mäta absorbansen av blandningen vid 517 nm efter 30 minuters inkubation i mörker vid rumstemperatur. Askorbinsyra användes som standard för experimentet. Följande ekvation användes för att bestämma varje provs DPPH-rensande aktivitet:

där Ac representerar absorbansen för kontrollreaktionen, vilken utförs genom att blanda 100 L etanol med 100 L av DPPH-lösningen, och At representerar absorbansen av testprovet. Experiment utfördes i tripletter. IC50-värdet beräknades för varje prov. En högre nivå av fri radikalaktivitet indikerades genom att reaktionsblandningen hade en lägre absorbans.

2.7.4. Fosfomolybden (PM) analys

Total antioxidantaktivitet bestämdes med användning av Prieto et al., 1999, standardteknik. Varje provrör innehållande 3 mL destillerat vatten och 1 mL molybdatreagenslösning fick ett vattenhaltigt bladextrakt av V. leucoxylon och dess FeNPs i varierande koncentrationer från 100 µL till 500 µL. Dessa rör inkuberades i 90 minuter vid 95 ◦C. Reaktionsblandningens absorbans mättes vid 695 nm efter att dessa rör justerats till rumstemperatur i 20–30 minuter efter inkubation. Referensstandarden var askorbinsyra [35].

2.8. Utvärdering av in vitro antiinflammatorisk aktivitet

Den antiinflammatoriska effekten av V. leucoxylons vattenbaserade bladextrakt och dess genererade FeNPs utvärderades med hjälp av proteindenatureringsmetoden som beskrivs av Elias et al., 1988, med små modifieringar [36]. Som standardläkemedel användes diklofenaknatrium. En reaktionsblandning innefattande 2 mL av känd koncentration av tillverkade FeNPs (100 g/ml) med standarddiklofenaknatrium (100 g/mL) och 2,8 mL fosfatbuffrad saltlösning (pH 6,4) blandades med 2 mL färskt hönsägg albumin (1 mM) och inkuberades vid 27 ± 1 ◦C under 15 min. Denaturering inducerades genom att sätta reaktionsblandningen i ett vattenbad vid 70°C under 10 min. Efter kylning mättes absorbansen vid 660 nm med användning av dubbeldestillerat vatten som ett blankprov. Varje test utfördes tre gånger. Följande formel användes för att beräkna procentuell hämning av proteindenaturering:

där, Vid=absorbans av testprov; Ac=absorbans av kontroll.

2.9. Bestämning av cytotoxisk och anticanceraktivitet hos järnnanopartiklar med hjälp av MTT-analys

Effekten av V. leucoxylon och dess syntetiserade FeNP på livsdugligheten hos icke-cancerösa fibroblastceller L292 och dess anticanceraktivitet på hudcancer (A375), lungcancer (A549) och oral cancer (KB-3-1) utvärderades med användning av standard MTT-analysen, enligt Carmichael et al., (1987) [37]. Alla cellinjer erhölls från National Center for Cell Science (NCCS), Pune, Indien. Procentuell inhibering av celltillväxt (IC50)-värden härleddes med användning av dos-responskurvor för varje cellinje, och följande formel användes för att beräkna procentuell tillväxtinhibering. Omvandlingen av MTT till en lila formazanprodukt av friska cellers mitokondriella dehydrogenas är grunden för detta experiment [38].

2.10. In vitro sårläkningsstudie genom att använda Scratch Assay Test

Spridnings- och migreringsförmågan hos L292-cellinjeceller orsakade av prover med kända koncentrationer av växtextrakt och järnnanopartiklar undersöktes i den aktuella undersökningen [39]. Djurcellodlingsplattor med DMEM-media kompletterat med 10 procent FBS och 2 procent Pen-Strep-antibiotikum (Darmstadt, Tyskland) användes för att starta cellodlingsprocessen. En steril plastpipettspets användes för att skrapa monolagersammanflödet av celler efter att de hade vuxit till ungefär 50,000 celler per ml. PBS-lösning användes för att avlägsna eventuellt oönskat cellskräp. Som en negativ kontroll användes obehandlade celler, medan standardaskorbinsyra användes som en positiv kontroll för polymerprover med känd koncentration. Under de följande 24 timmarna hölls cellerna vid 37 ◦C med 5 procent CO2. För undersökning av relativ cellmigration och sårtillslutning inkuberades de repade cellskikten och avbildades med intervaller från 0 timmar till 6 timmar till 12 timmar och 24 timmar. MagVision Softwares mätning (X64, 2016, Magnus, New Delhi, Indien) kalibrering vid 4× upplösning användes för att kvantifiera gapavståndet. För att bestämma sårförslutningen och migrationshastigheten användes formeln nedan:

med avseende på följande: A0h=sårområde uppmätt omedelbart efter repning; ATh=sårarea uppmätt efter timmar; Rm=migrationshastighet (µm/h); Wf=initial sårbredd (µm); och T=migreringstid (timme).

2.11. Statistisk analys

Data presenteras som medelstandardavvikelse och standardfel, och varje experiment utfördes tre gånger. SPSS-programvara version 20 användes för att utföra en enkelriktad variansanalys (ANOVA) på skillnaderna i medelpoäng som fanns mellan grupperna.

Fråga för mer:

E-post:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel: plus 86 15292862950

AFFÄR:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop