Hur Cistanche förhindrar leversjukdom

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Abstrakt

Att undersöka de preliminära karakteriseringarna, antioxidant och hepatoprotektiv aktivitet av polysackarider frånCistanche deserticola (CDP)erhölls tre polysackaridfraktioner, CDP-A, CDP-B och CDP-C, genom successiv membranfiltrering (mikrofiltrering, ultrafiltrering och nanofiltrering). Molekylvikter, monosackaridkompositioner, renheter och IR-spektra för de tre fraktionerna analyserades. Resultaten visade att CDP-C innehöll en högre andel galakturonsyra (GalUA) än CDP-B och CDP-A. Antioxidantaktiviteter analyserades också och resultaten avslöjade att CDP-C hade den högsta aktiviteten. Således studerades den hepatoprotektiva aktiviteten hos CDP-C vidare. In vitro-forskning, CDP-C främjade livskraften hos HepG2-celler. In vivo-forskning förbättrade CDP-C de förändringar som inducerades av alkohol, inklusive serologiska index (alanintransaminas, surt fosfatas, γ-glutamyltranspeptidas och triglycerid) och leverindikatorer (superoxiddismutas, malondialdehyd, glutation S-transferas och triglycerid) hos modelldjur. Den framträdande mikrovesikulära steatosen och mild nekros i leverhistopatologi hos modelldjur dämpades också av CDP-C-administrering. Dessa fynd indikerade att CDP-C hade hepatoprotektiv aktivitet mot kronisk leverskada inducerad av alkohol. Den underliggande mekanismen kan vara att CDP-C kan minska innehållet i MDA och TG och modulera aktiviteterna hos det relativa enzymet. Den här egenskapen kan associeras med GalUA i CDP-C.

Nyckelord: Cistanche deserticola; polysackarider; Preliminära karakteriseringar; Antioxidant; Hepatoprotektiv aktivitet.

cistanchebienfaitsökenicola

1. Inledning

Cistanche är en flerårig holoparasit och distribueras huvudsakligen i ökenregionen i nordvästra Kina [1, 2]. Stammen av Cistanche-arter (Orobanchaceae) registrerades först i Shen Nongs kinesiska Materia Medica. Cistanche har länge använts som en traditionell örtmedicin för behandling av njurbrist, impotens, senil förstoppning, ömhet och svaghet i midjan och knäna och blodbrist [3, 4]. Farmakologiska undersökningar visade att Cistanche har antiinflammatorisk aktivitet [5, 6], anti-osteoporosaktivitet [7, 8], lugnande effekt [9], antifatigueaktivitet [10], neuroprotektiv effekt [11]. Dessutom har polysackarider från Cistanche deserticola (CDP) antihyperglykemiska och hypolipidemiska effekter [12], immunologisk aktivitet [13] och proliferationseffekt på lymfocyter [14].

Alkohol, en världsomspännande konsumerad dryck och livsmedelstillsats inducerade nästan 2,5 miljoner dödsfall varje år i världen [15, 16]. Dessa dödsfall är främst relaterade till leversjukdom orsakad av alkoholmissbruk [17, 18]. Alkoholinducerad leversjukdom är en komplex flerstegs kronisk progression, som normalt utvecklas från alkoholisk steatos till alkoholhepatit och slutligen till alkoholcirros [19]. Således är det en fördelaktig hanteringsstrategi att identifiera aktiva naturliga produkter för dessa alkoholkonsumenter för att förhindra eller bromsa utvecklingen av alkoholhaltig leverskada i ett tidigt skede.

Cistanche deserticola Y. C. Ma och Cistanche tubulosa (Schrenk) Wight är två läkemedelsarter som registrerats i den kinesiska farmakopén [3]. Många artiklar har belyst de hepatoprotektiva aktiviteterna hos C. tubulosa [20-24] och C. deserticola [25, 26]. Men dessa hepatoprotektiva undersökningar syftade alltid till akut leverskada inducerad av koltetraklorid (CCl4) eller D-galaktosamin och lipopolysackarid, men inte oroad över den kroniska leverskadan relaterad till alkoholmissbruk. Dessutom var dessa rapporter huvudsakligen inriktade på mekanismen för fenyletanoidglykosider (FG) snarare än CDP: erna. Därför undersöktes i den aktuella studien de preliminära karakteriseringarna av CDP och deras antioxidantaktiviteter (in vitro). Dessutom fastställdes leverskademodellen för ICR-möss inducerad av vitt spritvin för att undersöka CDP: s hepatoprotektiva aktivitet mot kronisk leverskada inducerad av alkohol.

cistanche och tongkat ali herba extrakt

2. Material och metoder

2.1 Material

Stammarna av C. deserticola samlades in från Alashan League, Inre Mongoliet i Kina,och identifierad av professor Xiaodong Wang (Division of Biorefinery Engineering, Institute of Process Engineering, Chinese Academy of Sciences, Peking, P. R. China).

Dimetylsulfoxid (DMSO), 2, 2-azino-bis (3-etylbenstiazol-6-sulfonsyra) (ABTS), 3-(4, 5-dimetyltiazol-2-yl)-2, 5-difenyltetrazoliumbromid (MTT) och 1, 1-difenyl-2-picryl-hydrazyl (DPPH) köptes från Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA). Dulbeccos Modified Eagle Medium (DMEM) och fetal bovin serum (FBS) köptes från Invitrogen, Inc. Er Guo-tou white spirit köptes från Beijing Red Star Co., LTD. Bicyklol köptes från Beijing Union Pharmaceutical Factory. Vattenhaltiga lösningar framställdes med ultrarent vatten från ett Milli-Q-vattenreningssystem (Millipore, Bedford, MA, USA). Alla andra reagenser var av analytisk kvalitet.

2.2 Extraktion av CDP och fraktionerad filtrering

De råa CDP: erna utarbetades enligt den tidigare rapporterade metoden för vår grupp [27] med liten modifiering. Kortfattat, pulvret (40 mesh) av C. deserticola (50 kg) var ultraljud (40 kHz och 6 kW) extraheras med 1000 L vattenhaltig etanollösning (50%, v / v) vid 60 ◦C i 120 min. Polysackarider separerades från extraktet med makroporöst harts (HPD 300). Polysackaridlösningen koncentrerades under reducerat tryck, deproteiniserades med Sevags metod [28] och frystorkade produkten kallades rå CDP.

Därefter löstes 50 g av de råa CDP: erna i 2,5 L ultrarent vatten och separerades successivt med mikrofiltrering, ultrafiltrering och nanofiltrering (nominell molekylvikt cut-offs var 300 kDa, 10 kDa och 200 Da. Effektiv membranarea var 0,625 m2). Bibehållen lösning av mikrofiltrering lyofiliserades och kallades CDP-A. Permeerad lösning av mikrofiltrering filtrerades med ultrafiltrering, medan den kvarhållna lösningen lyofiliserades och fick namnet CDP-B. Permeerad lösning av ultrafiltrering filtrerades med nanofiltrering, den kvarhållna lösningen lyofiliserades och namngavs som CDP-C.

2.3 Preliminära karakteriseringar av CDP

Molekylstorlekarna för CDP utvärderades enligt den tidigare rapporterade metoden förvår grupp [29]. Monosackaridkompositioner analyserades med den metod som beskrivs av P. Zhang et al [30]. Renheten bestämdes enligt fenol-svavelsyrametoden [31]. Proteininnehållet bestämdes med hjälp av den metod som Bradford och Maja Kozarski nämnde [32, 33]. FT-IR-spektra av CDP fångades med en Fourier Transform-Infrared Spectrometer (FT / IR-660 Plus, JASCO) i intervallet 400 ~ 4000 cm-1.

2,4. Antioxidant aktiviteter

De rensande effekterna av CDP: erna på hydroxyl-, superoxidanjon-, DPPH- och ABTS-radikaler utvärderades enligt de metoder som beskrivs av Sun [34], Wang [35], Yap [36] respektive Fatiha [37].

cistanche erektil dysfunktionförnjure

2.5 Hepatoprotektiv aktivitet hos CDP-C in vitro

På grundval av resultaten av antioxidantanalysen valdes CDP-C för att studera hepatoprotektiv aktivitet. HepG2-celler (köpta från China Center for Type Culture Collection, Peking, Kina) odlades i DMEM innehållande värmeinaktiverad FBS (10%), streptomycin (0,1 μg / ml), penicillin (100 IE / ml) och icke-essentiell aminosyra. Cellerna inkuberades i en fuktig atmosfär av 5% CO2 vid 37 ° C, skördades vid exponentiell tillväxtfas, såddes i 96-brunnsplattor (4×104 celler per brunn, 100 μL) och inkuberades i 24 timmar. Celler i den negativa gruppen behandlades med alkohol (slutlig koncentration var 3,5%, v/v) medan den naiva gruppen behandlades med vatten. Celler i den positiva gruppen behandlades med alkohol och bicyklol (slutlig koncentration var 200 μg/ml). Cellerna i de fyra testgrupperna behandlades med alkohol och CDP-C (slutlig koncentration av CDP-C var 0,11, 0,3333, 1,00 och 3,00 mg/ml). Alla celler odlades i ytterligare 48 timmar.

Livskraften hos HepG2-celler bestämdes med MTT-analysmetoden som nämns av J. Tong et al [38] med liten modifiering. Kortfattat tillsattes MTT (5 mg / ml, 20 μL per brunn) i de cellfröade 96-brunnsplattorna och cellerna inkuberades i 4 timmar. Lösningarna togs bort och DMSO (150 μL/brunn) tillsattes. Absorbansen hos varje brunn mättes vid 492 nm med hjälp av en 96-brunns plattläsare (Thermo Scientific, America). Cellviabiliteten beräknades med hjälp av följande formel:

Cellviabilitet (%) = (Ett prov- Ablank) ×100/ (A naiv- Ablank)

Där ett prov var experimentgruppens absorbans; En naiv var absorbansen hos kontrollgruppen utan prov; Ett ämne var absorbansen av odlingsmedium utan prov och sådd cell.

2.6 Hepatoprotektiv aktivitet hos CDP-C in vivo

2.6.1 Djur

Vuxna kvinnliga ICR-möss (22-25 g, köpta från Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co. Ltd. Djurlicensnummer var 11400700128) användes. Djuren hölls i ett miljökontrollerat rum med foder och vatten ad libitum (relativ luftfuktighet var 40-60%, 22-26 ° C), luftventilationen var 12-18 gånger / h och ljusbestrålningstillståndet var en 12 h ljus / mörk cykel på 150-300 lux. Mössen acklimatiserades till djurrumsförhållandena i 7 dagar före experiment. Alla försök med djur under experimenten utfördes i strikt överensstämmelse med reglerna för användning av laboratoriedjur som antagits och utfärdats av Förenta staternas nationella hälsoinstitut.

2.6.2 Experimentell utformning

ICR-möss delades slumpmässigt in i sex grupper (naiv grupp, negativ kontrollgrupp, positiv kontrollgrupp och tre testgrupper) med 10 djur i varje grupp. Den naiva gruppen administrerades oralt med destillerat vatten. Den negativa kontrollgruppen administrerades oralt med alkohol (Er Guo-tou white spirit, 56%, 6 ml/kg). Den positiva kontrollgruppen administrerades oralt med cyklal (300 mg/kg) och 5 timmar senare med alkohol. Tre testgrupper administrerades oralt med CDP-C i en dos av 200, 600, 1800 mg/kg och 5 timmar senare med alkohol. Alla möss administrerades i 31 dagar i följd.

2.6.3 Bestämning av serologiska index

Cirka 4 timmar efter den sista alkoholbehandlingen samlades blod från ögonhålan och centrifugerades vid 3000 g i 15 min. Efter att serumet separerats bestämdes enzymaktiviteterna för alanintransaminas (ALT), surt fosfatas (ACP), γ-glutamyltranspeptidas (γ-GTP) och triglycerid (TG) med hjälp av diagnostiska kit.
2.6.4 Bestämning av leverindikatorer

Efter insamlingen av blod utfördes alla möss. Levern hos varje mus skars omedelbart ut, tvättades med fysiologisk saltlösning. En bit levervävnad separerades från vänster lob. Därefter maldes vävnaden och homogeniserades med vattenhaltig kaliumkloridlösning (1,15%, w/v) i en glashomogenisator (Potter Elvehjem Teflon) i 60 sekunder för att göra ett leverhomogenat (10% w/v). Enzymaktiviteterna för superoxiddismutas (SOD), malondialdehyd (MDA), glutation S-transferas (GST) samt triglycerid (TG) -innehåll mättes med hjälp av diagnostiska kit.

2.6.5 Histopatologiska studier

Den återstående delen av levern fixerades i Bouins fixeringsmedel i 24 timmar, efter uttorkning med vattenhaltig etanollösning (50-100%, v / v) rensades levervävnaden i xylen och inbäddades i paraffin. Leversektioner (5 mm) färgades med alunhematoxylin och eosin (H-E). Bilder av leversektioner och histopatologiska förändringar fångades av ett ljusmikroskop (Nikon-DS-L1-5M).

2.7 Statistisk analys

Data uttrycktes som medel ± standardfel för medelvärdet (S.E.M) från tre (kemisk sammansättningsanalys och antioxidantanalys), fem (cellviabilitet) eller tio (in vivo-forskning) oberoende experiment. Statistiska signifikanser av skillnader mellan grupper analyserades genom envägsanalys av varians (ANOVA) följt av ett Student-Newman-Keuls multipelintervalltest med HJÄLP av SPSS 19.0-programvara. I alla analyser, p<0.05,><0.01, or=""><0.001 indicated="" statistical="">

3. Resultat och diskussion

3.1 Karakteriseringar av CDP

Som visas i fig. 1A innehåller CDP-A två grupper, molekylvikterna är 4000 kDa och 3946 kDa. Molekylvikterna för CDP-B och CDP-C är 2400 kDa och 1300 kDa, Monosackaridkompositionerna visas i fig. 1B. CDP-A, CDP-B och CDP-C innehåller sex essentiella monosackarider med olika proportioner, inklusive mannos (Man), rhamnos (Rha), galakturonsyra (GalUA), glukos (Glc), galaktos (Gal) och arabinos (Ara). Förutom ovan nämnda sex monosackarider förekommer xylos (Xyl) också i CDP-C. Dessutom innehåller CDP-C en större andel GalUA än de andra två fraktionerna.

Renheten och proteininnehållet i CDP visas i tabell 1. Tabell 1 visar att CDP-A har den högsta renheten, vilket är 75,57%, medan renheten hos CDP-B och CDP-C är 74,72% respektive 68,92%. Proteininnehållet i CDP-A, CDP-B och CDP-C är 1,27%, 1,24% respektive 1,05%.

Tabell 1.Renhet och proteininnehåll i CDP. Data är medel ± S.E.M av tre replikat.

FT-IR-spektra av kolhydrater används för att bestämma deras strukturella egenskaper och används vanligtvis för kvalitativ analys av organiska funktionella grupper, särskilt för O-H, C-O och C = O [39]. FT-IR-spektra för CDP visas i fig. 1C. Varje spektrum visar en stark och bred sträckningstopp runt 3293 cm−1 för O-H sträckvibration samt en svag absorptionstopp vid 2939 cm−1 för C-H sträckvibrationer. Absorptionsbandet vid 1650 cm−1 orsakas av C = O asymmetrisk sträckvibration. Det breda absorptionsbandet vid 1418cm−1 tillskriver deformering av vibrationer av C-H-bindningen. Varje enskild polysackarid har ett specifikt band i 1000-1200 cm-1regionen, som domineras av ringvibrationer överlappade med sträckvibrationer av (C-OH) sidogrupper och (C-O-C) glykosidbandvibrationer. Absorptionen vid 1036 cm−1 indikerar en pyranosform av socker. En absorbans vid nästan 829 cm−1 föreslår kopplingen av α-glykosider i CDP: s molekylära struktur. Som visas i fig. 1 C är absorptionsbandet för CDP-C vid 1650 cm−1 starkare än CDP-A och CDP-B, vilket innebär att innehållet av C = O i CDP-C är mer än i CDP-A och CDP-B. Detta resultat överensstämmer med resultaten från fig. 1 A, vilket avslöjar att andelen GalUA i CDP-C är större än i CDP-A och CDP-B.

3.2 Antioxidantaktiviteter hos CDP

3.2.1 Analys av hydroxylradikaler

Bland de reaktiva syrearterna är hydroxylradikalen den mest reaktiva och inducerar allvarliga skador på de intilliggande biomolekylerna [40]. För hydroxylradikal finns det två typer av antioxidationsmekanismer: en rensar hydroxylradikalen som redan genererats och en annan undertrycker genereringen av hydroxylradikal. För den senare genereras hydroxylradikal genom reaktionen av Fe (II) -komplexet med väteperoxid. Antioxidantaktiviteterna hos CDP kan ligera till metalljonerna, som inte reagerar med H2O2 och producerar hydroxylradikal utan kelat med CDP och bildar metallkomplexet. Metallkomplexet kan inte ytterligare reagera med H2O2 för att ge hydroxylradikal [41-43]. Därför visar CDP: erna hydroxylradikalrensningseffekterna.

Fig. 2 A visar RENSNINGSKAPACITETEN HOS CDP på hydroxylradikal på ett koncentrationsberoende sätt. Rensningshastigheten för CDP-A, CDP-B och CDP-C är 29,56%, 33,44% respektive 38,22%. CDP-C uppvisar högre hydroxylradikal rensningsaktivitet. Med tanke på att CDP-C innehåller en högre andel GalUA än CDP-A och CDP-B, kan antioxidanter av CDP relatera inte bara till metalljonernas ligeringsegenskap utan också till innehållet i GalUA, Ara och Gal [44-46].

3.2.2 Analys av superoxid anjonradikala

Superoxidanjonradikalen är en giftig art som genereras av många biologiska och fotokemiska reaktioner och därigenom inducerar vävnadsskador [47]. Även om superoxidanjon är en relativt svag oxidant, spelar den en viktig roll vid bildandet av andra starkare reaktiva oxidativa arter, såsom singletsyre och hydroxylradikal [48]. Fig. 2 B visar förhållandet mellan koncentrationerna och rensningskapaciteten hos CDP på superoxidanjonradikaler. När koncentrationen ökar uppvisar CDP-C högre rensningskapacitet än CDP-B och CDP-A.

3.2.3 Radikal analys av DPPH

DPPH, en av de stabila kvävecentrerade föreningarna som har en protonfri radikal med en karakteristisk absorption vid 517nm, minskar signifikant vid exponering för protonradikala asätare, därför används den ofta för att uppskatta antioxidanternas fria radikaler. Det är väl accepterat att DPPH-fria radikaler som rensas av antioxidanter beror på deras vätedonerande förmågor. Antioxidanter överför antingen elektroner eller väteatomer till DPPH-radikalen och bildade DPPH-H, som är en icke-radikal bildning [49].

Totala DPPH-rensningseffekter av alla prover testades och resultaten visas i fig. 2 C. Rensningsförmåga hos CDP på DPPH-radikal visar ett koncentrationsberoende sätt. När koncentrationen ökar från 1,0 till 5,0 mg/ml ökar rensningsförmågan hos CDP-C från 52,5 % till 58,7 %, högre än CDP-B (från 34,2 % till 56,8 %) och CDP-A (från 12,5 % till 52,8 %). DPPH-rensningseffekten av CDP-C kan associeras med karbonylgrupperna i GalUA.

3.2.4 Radikal ABTS-analys

ABTS radikalanalys används ofta för att mäta den totala antioxidantkraften hos en potent antioxidant i testproverna [50]. ABTS rensningseffekter av alla prover visas i fig. Rensningsförmågan hos CDP på ABTS-radikaler uppvisar ett dosberoende sätt. IC50 för CDP-A, CDP-B och CDP-C är cirka 4,0 mg / ml, 2,5 mg / ml respektive 1,2 mg / ml. Resultaten indikerar att CDP: er har ABTS-rensningsaktivitet.

Sammanfattningsvis var antioxidantaktiviteten hos CDP-C högre än CDP-A och CDP-B. Den rapporterade att vissa farmakologiska aktiviteter av polysackarider var relaterade till dess GalUA[51]. I detta experiment var andelen GalUA i CDP-C större än i CDP-A och CDP-B, CDP-C valdes för att undersöka den hepatoprotektiva effekten mot kronisk leversjukdom inducerad av alkohol.

3.3 Effekterna av CDP-C på HepG2-cellviabilitet

Att mäta cellviabilitet är ett vanligt sätt att bedöma effekten av naturliga läkemedel [52]. Baserat på resultaten att CDP-C hade den högsta antioxidantaktiviteten utvärderades effekterna av CDP-C på HepG2-cellens livskraft. Resultaten visas i fig. Alkoholbehandlingsinducerad markant minskning av HepG2-cellviabiliteten. Men CDP-C kan särskilt förbättra överlevnadsgraden jämfört med den negativa gruppen. Som visas i fig. 3 uppvisar cellens livskraft inte ett exakt koncentrationsberoende sätt med CDP-C. Däremot, när koncentrationen av CDP-C når 3,00 mg / ml, minskar HepG2-cellens livskraft dramatiskt. Orsaken till minskningen av cellens livskraft kan vara att en låg koncentration av CDP-C var till hjälp för överlevnaden av HepG2-celler. Men när koncentrationen av polysackarider i odlingsmediet var tillräckligt hög för att förändra cellernas mikromiljö, hämmades HepG2-cellens livskraft.

3.4 Farmakologiska effekter av CDP-C

3.4.1 Effekterna av CDP-C på serologiska index

Alkoholmissbruk tillskriver nästan 4% av alla dödstal, vilket har blivit ett allvarligt socialt problem i världen. I människokroppen metaboliseras alkohol i levern efter att den absorberats genom mag- och tunntarmsslemhinnan [53-55]. Alkoholhaltiga leversjukdomar uppträder normalt efter år av alkoholmissbruk [56]. Vanliga patologiska tillstånd som fettlever, hepatit, fibros och cirros [57], eller till och med cancersjukdomar som hepatocellulärt karcinom och tjocktarmscancer [58], observeras vid alkoholbundna leversjukdomar. Därför är alkohol en typisk hepatoxisk och används ofta som en inducerare av leverskada i vetenskaplig forskning [59]. Med tanke på att alkoholinducerade leversjukdomar ofta orsakas av alkoholhaltiga drycker och livsmedelstillsatser snarare än industriell etanol, användes Er Guo-tou white spirit för att upprätta en leverskademodell hos ICR-möss i denna studie. Bicyklol är ett vanligt medel som används för att behandla en kronisk leverskada, så det användes för att ställa in en positiv kontrollmodell.

Leverceller innehåller högre koncentrationer av ALAT i cytoplasman och mitokondrierna. På grund av olika levercellskador kommer läckaget av cytosol att orsaka en ökning av ALAT i serumet. Således är främjandet av ALT indikatorn för cellulärt läckage och funktionella störningar i levern [60]. Så serum-ALT-nivån ställs vanligtvis in som indikator för att bedöma leverhälsan [61]. Av liknande skäl används γ-GTP, AVS och TG också som indikatorer för att bedöma leverns hälsotillstånd [62].

I föreliggande studie bedömdes den hepatoprotektiva aktiviteten hos CDP-C genom bestämning av nivåerna av ALT, AVS, γ-GTP och TG. Resultaten visas i fig. Fyra serumindikatorer främjas drastiskt av alkoholbehandling i den negativa gruppen. Men CDP-C kan dämpa dessa förändringar som induceras av alkoholadministration. Men inte alla serologiska index uppvisar ett dosberoende sätt med CDP-C. I fig. 4 A och B har CDP-C vid låg koncentration en signifikant effekt på återställandet av ALAT och AVS, men effekten av CDP-C vid den högsta koncentrationen var inte signifikant. Faktum är att många naturliga produkter är fördelaktiga för hälsan vid låga doser, men skadliga för hälsan vid höga doser [60]. Anledningen kan vara att överdriven intag av polysackarider kommer att påverka organismernas normala metabolism, så attatt påverka kroppens hälsa negativt. Den detaljerade mekanismen måste dock undersökas ytterligare.

3.4.2 Effekterna av CDP-C på leverindikatorer

Organismer som utsätts för oxidativ stress utvecklade vanligtvis en antioxidantförsvarsmekanism, och SOD är ett typiskt enzymbaserat antioxidantsystem [63]. SOD katalyserar dismutationen av superoxidanjon till O2 och H2O2 [64]. GST, ett lösligt protein som finns i cytosolen, spelar också en viktig roll vid avgiftning av levern. Av de skäl som nämns ovan blir SOD och GST indikatorerna för alkoholinducerad hepatotoxicitet. MDA och TG i levern används också som indikatorer på hepatotoxicitet [65].

I föreliggande studie visas effekterna av CDP-C på leverfunktionen i fig. Bild A, B, C och D uppvisar effekterna av CDP-C på SOD, MDA, GST respektive TG. Dessa fyra bilder visar att mössen som behandlas med alkohol markant minskar SOD- och GST-nivåerna och ökar MDA- och TG-nivåerna, men CDP-C kan uppenbarligen dämpa denna förändring. I likhet med de fenomen som beskrivs i avsnitt 3.4.1 var leverindikatorerna inte heller på ett dosberoende sätt med CDP-C. Anledningen till detta kan likna den mekanism som illustreras i avsnitt 3.4.1. Tidigare studier rapporterade att effekterna av polysackarider på SOD och katalas kan vara associerade med induktion av genuttryck av SOD och katalas [66]. Ytterligare studier behövs emellertid fortfarande för att belysa den hepatoprotektiva mekanismen för CDP-C och förhållandet mellan dess struktur och funktion.

3.5 Histopatologiska effekter av CDP-C på alkoholinducerade möss

På grundval av de histopatologiska observationerna på leversektionerna uppvisade den naiva gruppen normal cellulär arkitektur med distinkta leverceller och inga histologiska avvikelser (fig. 6 A). Som jämförelse orsakade alkoholadministrationen allvarliga leverskador hos möss i den negativa gruppen. Leversektionerna visade hepatocytfettavsättning, hepatocytnekros och svullnad, vakuolbildning i cellerna och cellgränserna försvann också (fig. 6 B). Leversektionerna hos mössen administrerade med bicyklol (fig. 6 C), med varierande doser av CDP-C (fig. 6 D-F) uppvisade uppenbarligen återställande av de snedvridningar som uppträdde i den negativa kontrollgruppen. Dessa resultat validerade att alkoholinducerade en viss grad av distorsion i hepatocyter i den negativa kontrollgruppen. CDP-C återställde dock dessa ändringar.

Det är väl accepterat att den hepatoprotektiva effekten av polysackarider är associerad med deras antioxidantaktivitet [67, 68]. Den höga uronsyrahalten hade visat sig vara fördelaktig för antioxidanteffekterna av polysackarider [44, 45]. Polysackarider rika på Gal och Ara hade också verifierats ha högre antioxidanteffekter [46]. Det är emellertid svårt för stora molekylära polysackarider att komma in i tarmepitelcellerna direkt. För CDP-C (med en molekylvikt på 1300kDa) är det inte lätt att komma in i kroppen direkt och spela den hepatoprotektiva rollen. Publicerade rapporter avslöjade att molekylvikterna för polysackariderna minskade efter mag- och tarmsmältning [69]. Således antog vi att CDP-C kan brytas ned till polysackarider med låga molekylvikter och absorberas av tarmepitelceller. Reducerande ändar av polysackarider kan ökas på grund av nedbrytningen av glykosidbindningar [69, 70]. Enligt monosackaridsammansättningen av CDP-C bör de nedbrutna polysackarider med låga molekylvikter innehålla GalUA, Ara och Gal. Därför kan dessa polysackarider med låg molekylvikt, som har reducerande ändar och innehåller GalUA, Ara och Gal, spela rollen som leverskydd i kroppen. Den detaljerade mekanismen måste dock undersökas ytterligare.

4. Slutsatser

Enligt monosackaridkompositionsanalyserna och FT-IR-spektra innehöll alla tre fraktionerna av CDP Man, Rha, GalUA, Glc, Gal och Ara. CDP-C innehöll en stor andel GalUA. CDP-C hade den högsta antioxidantaktiviteten. Resultaten av både in vitro- och Vivo-forskning illustrerade att CDP-C hade hepatoprotektiv aktivitet mot kronisk leverskada inducerad av alkohol. Den underliggande mekanismen var relaterad till modulering av relativa enzymaktiviteter, vilket minskade MDA och TG i levern. Den fysiologiska aktiviteten hos CDP-C kan associeras med GalUA. Dessa fynd ger nya insikter i de farmakologiska målen för C. deserticola i förebyggandet av alkoholhaltig leversjukdom.

Cistanche herbaskyddarleverochförbättrar immuniteten.

För mer information, klicka här.