Identifiering av maltasglukoamylas som en biomarkör för akut njurskada hos patienter med cirros
Mar 12, 2022
Bakgrund.Akutnjurskada(AKI) är en frekvent komplikation av dekompenserad cirros med ökad dödlighet. Traditionella biomarkörer som serumkreatinin är inte känsliga för att upptäcka skada utan funktionell förändring. Vi antar att urinexosomer potentiellt bär markörer som skiljer typen avnjurskadahos cirrospatienter.
Metoder.Detta är en prospektiv, singelcenter och observationsstudie av vuxna patienter med cirros. Patientgrupperna inkluderade friska normala kontroller, kompenserad cirros med normalnjurfunktion, dekompenserad cirros med normalnjurfunktion, och dekompenserad cirros med AKI. Data extraherades från den elektroniska journalen inklusive etiologin för leversjukdom, MELD-poäng, historia av dekompensation, Child-Turcotte-Pugh-poäng, historia av AKI och läkemedelsexponeringar. Urinprover togs vid tidpunkten för samtycke. Urin exosomproteininnehåll analyserades och proteomdata validerades genom immunblotting. Statistisk analys inkluderade partiell minsta kvadrat-diskriminerande analys i kombination med varierande betydelse i projektionsidentifiering.
Resultat.Arton cirrotiska försökspersoner registrerades och sex friska kontrollpersoner extraherades från vårt bioförråd. Urinexosomer isolerades och 1572 proteiner identifierades. Maltas-glukoamylas var det främsta diskriminerande proteinet som bekräftades av western blotting.
Slutsatser. Patienter med cirros och AKI har uppreglering av renal brush border disackaridas, MGAM, i urinexosomer, vilket kan skilja typen avnjurskadavid cirros; den kliniska betydelsen av detta kräver dock ytterligare validering.
För mer information vänligen kontakta:joanna.jia@wecistanche.com

Akut njurskadabehandlas avcistanche
1. Introduktion
Akutnjurskada(AKI) förekommer hos cirka 20 procent av sjukhuspatienter med cirros [1, 2]. AKI hos inlagda cirrospatienter är ofta progressiv, allvarlig och en oberoende negativ prediktor för dödlighet [3]. *Den vanligaste orsaken till AKI vid cirros är hemodynamisk och står för 70 procent av fallen. Akut tubulär nekros (ATN) står för 30 procent av fallen, och postrenala orsaker är sällsynta och står för mindre än 1 procent av fallen. Hepatorenalt syndrom (HRS) är hemodynamiskt utan identifierbarnjurskadaeller sjukdom och förekommer hos cirka 20 procent av cirrospatienterna [4, 5].
Serumkreatinin (Scr) är den mest använda biomarkören att bedömanjurfunktionoch identifieranjurskada. SCR är dock suboptimal hos cirrospatienter för Hindawi Critical Care Research and Practice Volume 2019, många orsaker, inklusive minskad leverproduktion, muskelförtvining med minskade förråd, ökad distributionsvolym och undernäring av proteinkalorier. Genomsnittliga Scr-värden är lägre hos cirrospatienter jämfört med den allmänna befolkningen, vilket resulterar i försenad diagnos av AKI baserat på den nuvarande definitionen av AKI [6]. Dessutom är Scr en biomarkör förnjurfunktionoch är inte en känslig skademarkör. Nya biomarkörer för njurskada har dykt upp för att förbättra upptäckten av AKI och hjälpa till att differentiera etiologin för AKI.Njurskadorbiomarkörer inklusivenjurskadamolekyl-1 (KIM-1), neutrofil gelatinasassocierat lipokalin (NGAL), interleukin-18, leverfettsyrabindande protein (L-FABP), insulinliknande tillväxtfaktorbindande protein -7 (IGFBP-7) och vävnadshämmare av metalloproteinas-2 (TIMP-2) kan vara förhöjda innan en ökning av Scr-förbättrande detektion avnjurskadautan funktionsändring [7]. Studier har visat att dessa biomarkörer kan differentiera etiologin för AKI [8, 9]. Förbättrade biomarkörer för att upptäcka och differentiera AKI representerar viktiga otillfredsställda kliniska behov hos patienter med cirros.
Exosomer är nanovesiklar som frigörs från levande celler som en mekanism för intercellulär kommunikation [10]. *E proteininnehåll i exosomer har visat sig vara anmärkningsvärt modifierat under patologiska eller stressförhållanden [11–13]. I dennjure,exosomer levereras till urin från alla celltyper [14, 15], och urinexosomer kan potentiellt betraktas som patientens biokemiska signatur. Eftersom urinexosomer inte rutinmässigt analyseras, kan de ge ytterligare okänd information om proteinbiomarkörer för AKI hos patienter med cirros.
Syftet med denna studie var att utvärdera urinexosomproteomik hos patienter med cirros och AKI jämfört med friska försökspersoner. Vi antog att urinens exosomproteininnehåll skiljer sig hos patienter med kompenserad eller dekompenserad cirros som upplever AKI jämfört med normala friska kontrollpersoner. Dessutom postulerade vi att differentiellt exosomalt proteininnehåll i urin skulle ge insikt i mekanismer förnjurskadavid cirros.

2. Material och metoder
Detta är en prospektiv, singelcenter och observationsstudie av vuxna patienter med cirros. Alla patienter till studien rekryterades från UC San Diego Health-systemet mellan 1 juli 2013 och 1 juni 2014 och gav informerat samtycke. Patienter var berättigade till inkludering om de hade diagnosen cirros och kunde ge ett urinprov. Cirros bestämdes genom leverbiopsi, tvärsnittsavbildning eller kliniskt (via identifiering av en dekompensationshändelse som bestämts av en hepatolog). Data extraherades från elektroniska journaler inklusive demografi, antropometri, vitala tecken, komorbida medicinska problem, etiologi av cirros, komplikationer av cirros (ascites, varicer, leverencefalopati och hepatocellulärt karcinom), historia av AKI ellerkronisk njursjukdom, och medicinexponeringar inom 30 dagar efter inskrivningen. Endast patienter med fullständiga kliniska data och laboratorietester inom 30 dagar efter inskrivningen var kvalificerade för inkludering i denna studie. Patienterna kategoriserades i grupper enligt följande:
(1) Grupp 0: normala friska kontroller
(2) Grupp 1: kompenserad cirros (Child-Turcotte-Pugh klass A, MELD 10) utan historia av AKI och normalnjurfunktion
(3) Grupp 2: dekompenserad cirros (Child-Turcotte-Pugh klass B eller C) utan historia av AKI och normalnjurfunktion
(4) Grupp 3: dekompenserad cirros (Child-Turcotte-Pugh klass B eller C) och AKI
Vanligtnjurfunktiondefinierades som en uppskattad GFR > 60 ml/min/1,73 m2 (MDRD-formel), ingen albuminuri och ingen historia av AKI. AKI definierades enligt AKIN-kriterier: Scr-ökning med 0,3 mg/dl på 48 timmar eller 50-procentig ökning av Scr från baslinjen [16]. Patienter med AKI rekryterades under inläggningar och konsultationer från den slutna hepatologitjänsten om de hade tagit blod- och urinprov under episoden av AKI. Den fjärde gruppen av friska kontroller extraherades från ett friskt normalt biolager vid UCSD O'Brien Center for AKI Research vid UC San Diego School of Medicine. *Arbetet godkändes av Institutional Review Board vid University of California, San Diego.
2.1. Urinprovtagning och bearbetning för exosomisolering.
Urin centrifugerades vid 3000 × g under 30 min. Supernatantens pH justerades till 7, alikvoterades och frystes vid -80 grader C. Exosomer framställdes med användning av polyetylenglykol-(PEG-)-inducerad utfällning [17]. *e PEG-blandade urinprover hölls vid rumstemperatur i 2 timmar och centrifugerades vid 10 000 xg i 30 minuter. *e pelleten återsuspenderades i 10 mM Tris med 1 mM EDTA-Na-salt. * Detta steg upprepades två gånger för att avlägsna föroreningar. Endimensionell SDS PAGE av exosomproteinerna utfördes före in-gel trypsinisering för att förhindra förvirring [18].
2.2. Proteomisk analys.
Gelén skars till 1 mm × 1 mm och avfärgades 3 gånger med 100 µL 100 mM ammoniumbikarbonat i 15 minuter, följt av 100 µL acetonitril (ACN) i 15 minuter [19 ]. *e supernatanten lyofiliserades och den resulterande pelleten reducerades med 200 µL 100 mM ammoniumbikarbonat-10 mM DTT och inkuberades vid 56 grader i 30 minuter. Efter avlägsnande av vätskan sattes gelbitar till 200 µL 100 mM ammoniumbikarbonat-55 mM jodacetamid. *is inkuberades vid rumstemperatur i 20 minuter i mörker. Supernatanten avlägsnades och tvättades med 100 mM ammoniumbikarbonat under 15 min. *sv, 100 µL ACN tillsattes för att dehydratisera gelbitarna och lösningen lyofiliserades. Iskallt trypsin (0,01 µg/µL) i 50 mM ammoniumbikarbonatlösning tillsattes sedan för att täcka gelbitarna för digestionsprocessen och sattes på is i 30 minuter. När rehydreringen väl var fullbordad tillsattes färskt 50 mM ammoniumbikarbonat för att ersätta överskottet. trypsin och lämnas över natten vid 37 grader. Extraktion av peptiderna gjordes två gånger genom tillsats av 50 ul 0,2 procent myrsyra och 5 procent ACN och vortexade i 30 minuter vid rumstemperatur. Efter avlägsnande av supernatanten sattes 50 µl av 50 procent ACN-0.2 procent myrsyra till provet, vortexade igen under 30 minuter vid rumstemperatur. *is supernatanten togs bort och kombinerades med den föregående supernatanten från den första extraktionen. Prover analyserades med Eksigent nano-LC-Ultra® 2D med chHiPLC-nano flex-systemet (Eksigent, AB SCIEX Dublin, CA, USA) i ett trap-elueringsläge i kombination med tandemmasspektroskopi med QExactive-masspektrometern (Thermo Fisher Scientific, San Jose´, CA, USA) med elektrosprayjonisering [17].
2.3. Datahantering.
Sökmotorn SEQUEST (programvaran Thermo Scientific Proteome Discoverer, version 1.4) användes i analysen. *e proteindatabas för tryptiska peptidsekvenser för Homo sapiens från National Center for Biotechnology Information (NCBI) användes för att jämföra våra experimentella MS/MS-spektra. För att identifiera peptidsekvenser och relaterade proteiner använde vi tidigare publicerade kriterier [17]. För att bedöma statistisk signifikans användes separata mål- och lockbetssökningar och beräkning av klassiska poängbaserade falska upptäcktsfrekvenser (FDRs). Slutligen filtrerade vi SEQUESToutputdata för att tilldela ett slutresultat till proteiner. Minimivärden för korrelationspoäng (Xcorr) på 1,5, 2.0, 2.25 och 2.5 valdes för enkel-, dubbel-, trippel- respektive fyrpolladdade joner. Tidigare publicerade parametrar användes för att garantera en hög stringens [20], och den falska positiva peptidkvoten var mindre än 3 procent.
2.4. Statistisk analys.
Den normaliserade spektrala överflödsfaktorn (NSAF) användes för att beräkna den relativa förekomsten av polypeptider [21]. Loggtransformation och skalning av peptidantal utfördes före statistisk analys. MetaboAnalyst 2.0 webbportal användes för att utföra Students t-test, partiell minsta kvadraters diskriminantanalys (PLS-DA) och variabel betydelse i projektion (VIP) med ett a priori p < 0.="" 05="" [22].="" *e="" förhållandet="" mellan="" individuellt="" protein="" och="" total="" koncentration="" utvärderades="" med="" hjälp="" av="" det="" parade="" students="" t-testet="" för="" varje="" grupp.="" pls-da="" och="" vip="" användes="" för="" att="" identifiera="" diskriminerande="" proteiner="" [23].="" vi="" valde="" proteiner="" med="" en="" falsk="" upptäcktsfrekvens="" (fdr)="" på="" mindre="" än="" eller="" lika="" med="" 10="" procent="" för="" att="" validera="" med="" hjälp="" av="" western="">
2.5. Western Immunoblotting och kvantifiering.
Antikroppen mot MGAM köptes från Proteintech Group, Inc., (Chicago, IL, USA) och användes för att lösa upp 100 ug protein från urinexosomer från varje individ. Efter separation överfördes proteinerna till nitrocellulosapapper, blockerades, inkuberades med primär antikropp över natten innan de tvättades med Tris-buffrad saltlösning, inkuberades i 1 timme med HRP-sekundär antikroppskonjugat och visualiserades genom att utvecklas som beskrivits i tidigare publikationer från vårt laboratorium [ 24, 25]. ImageJ programvara (NIH) användes för att kvantifiera västerländska immunoblotband [24] och plottades (GraphPad Prism, San Diego, CA, USA).

3. Resultat
3.1. Kliniska egenskaper hos cirros och friska kontrollpersoner.
Sex patienter i varje grupp med fullständiga kliniska data analyserades och jämfördes med sex friska kontroller. Demografi och etiologi för leversjukdomar sammanfattas i tabell 1. Som förväntat enligt studiedesign varierade Child Turcotte-Pugh och MELD poäng signifikant mellan patientgrupper.
3.2. Proteomiska analyser av urinexosomer från cirrospatienter och friska kontroller.
Totalt, i alla 4 grupper, identifierades 1572 unika proteiner. Det fanns 36 0 proteiner som var gemensamma för alla grupper. Vi hittade 83 unika exosomala proteiner för grupp 0 (kontroller), 250 för grupp 1, 84 för grupp 2 och 212 för grupp 3 (Figur 1). Vi genomförde vidare multivariat PLS-DA på proteiner, vilket visade en tydlig separation mellan den friska kontrollgruppen och olika undergrupper av cirrotiska försökspersoner, som visas i figur 2. Kompenserade och dekompenserade cirrotiska försökspersoner utannjurskada(grupp 1 och 2) visade avsevärd överlappning medan cirrotiska försökspersoner med AKI (grupp 3) visade tydlig separation från de andra cirrotiska försökspersonerna och friska kontrollpersoner. En separat ANOVA av proteiner mellan de fyra grupperna visade att 126 proteiner var signifikant förändrade (p < 0.05),="" varav="" 13="" nådde="" gränsvärdet="" för="" falsk="" upptäckt="" (fdr)=""><10% (table="" 2).="" maltase-glucoamylase="" (mgam)="" was="" the="" top="" discriminant="" protein="" with="" a="" vip="" score="" of="" 4.35="" for="" the="" entire="" study="">10%>
3.3. Maltas-glukoamylasprotein ökar i dekompenserade cirrhotiska urinexosomer.
De proteomiska data visade en högre koncentration av MGAM i urinexosomen hos dekompenserade cirrospatienter, med och utannjurskada(grupp 2 och 3). Detta var det enskilt mest diskriminerande proteinet bland alla fyra grupperna med en VIP-poäng på 4,35 (Figur 3). Bekräftande western blotting av dessa exosomer visade endast påvisbart protein hos cirrospatienter mednjurskada(grupp 3) (Figur 4).
4. Diskussion
Vi genomförde en proteomisk analys av urinexosominnehållet från patienter med kompenserad cirrhos, dekompenserad cirrhosis och dekompenserad cirrhos med AKI och jämförde dem med friska kontroller. Den proteomiska analysen av urinexosomer hos cirrospatienter identifierade flera potentiellt viktiga biomarkörer förnjurskada, framför allt MGAM, ett bifunktionellt enzym. Vi hittade de högsta koncentrationerna av MGAM i urinexosomer hos patienter med cirros och AKI. Dessutom ökade MGAM hos patienter med cirros men inte i den utsträckning som hos de med AKI. MGAM saknades i den friska kontrollgruppen, vilket framhävde dess potentiella roll som en biomarkör för kritisk sjukdom.

Denna studie har flera andra viktiga resultat. För det första, såvitt vi vet, är detta den första rapporten om beskrivande analys av urinhalt av exosomprotein hos välkarakteriserade cirrosepatienter. För det andra är detta den första studien som rapporterar ökat tubulärt epitelial disackaridas icirros-njurskadaparadigm. Urinexosomens proteomiska data från de fyra olika grupperna visade att MGAM-uppreglering i cirros AKI-gruppen var robust och konsekvent. Maltas är det huvudsakliga disackaridaset i njurborstes gränsmembran [26, 27], men den exakta funktionen av detta enzym är inte klart klarlagd; dock har en möjlig roll för de relaterade disackaridaserna, sukras-isomaltas och trehalas i sockertransport postulerats [28]. Hos tio däggdjursarter har disackarider relaterade till MGAM hittats i njurborstens kant [27]. Farquhar och kollegor har visat att maltas finns i mikrovilli i den proximala hoprullade tubuli, kanske fungerar i glukosreabsorption och transport; och denna absorptionsförmåga minskar mot mer distala delar av nefronet [29]. MGAM visades vara närvarande i exosomer och mikropartiklar i en musmodell av alkoholfri steatohepatit (NASH) [30], en vanlig orsak till cirros. Eftersom cirrospatienter har flera underliggande tillstånd som bidrar till en minskning av Scr, är detektion av AKI problematisk. Dessutom är etiologin för skada ofta okänd, och det är svårt att skilja mellan hepatorenalt syndrom och andra etiologier av AKI. Dessutom är patofysiologin för dekompenserad cirros med AKI oklar eftersom den kan återspegla hemodynamiska förändringar eller inflammatoriska mediatorer vid akut på kronisk leversvikt [31]. Vi resonerade att de strukturella och funktionella förändringar som cirros och portal hypertoni orsakar injurfunktionvariera i svårighetsgrad beroende på svårighetsgraden av cirros. Dessa skillnader mellan den kompenserade och dekompenserade leversjukdomen mednjurskadakan förstås genom att studera nedströmsprodukterna avnjuresåsom urin. Med tanke på den nefroncelltillståndsspecifika lasten av urinexosomen, antog vi att urinexosomanalys innehåller nyckelinformation som är relevant för differentieringen av AKI vid cirros. Denna rapport är det första steget mot att testa denna hypotes.


Denna studiedesign hade flera begränsningar. För det första är antalet ämnen som analyseras per grupp litet. Större provstorlek kan ha ökat robustheten hos dessa data ytterligare, och ytterligare proteiner kan ha nått tröskeln för en acceptabel FDR av<10%. however,="" despite="" this="" small="" sample,="" these="" data="" demonstrating="" mgam="" as="" a="" unique="" exosomal="" protein="" in="" cirrhotic="" patients="" with="" aki="" is="" robust.="" second,="" we="" used="" 1d="" gel="" electrophoresis="" to="" resolve="" the="" exosome="" proteins="" prior="" to="" lc/ms-ms="" analysis="" that="" resulted="" in="" the="" identification="" of="" 1572="" proteins="" overall.="" if="" we="" had="" conducted="" direct="" exosome="" protein="" trypsinization="" instead="" of="" following="" this="" method,="" perhaps="" the="" number="" of="" identified="" proteins="" might="" have="" increased.="" in="" our="" experience,="" exosomes="" are="" packaged="" with="" nonfull="" length="" peptides="" from="" proteolytic="" action="" as="" well="" as="" endogenous="" peptides="" and="" may="" have="" con-founded="" the="" analysis.="" by="" following="" the="" gel="" electrophoresis="" method,="" we="" ensured="" that="" we="" only="" compared="" full-length="" protein="" differences="" between="">10%.>
Sammanfattningsvis har vi karakteriserat urinexosomproteinskillnader hos friska kontroller och kompenserat och dekompenserat cirrospatienter med och utan AKI med proteomiska metoder. Arbete från Knepper-gruppen visar att många viktiga njurproteiner (t.ex. aquaporiner, polycystiner och podocin) avges i urinexosomen [32, 33]. Vår nuvarande rapport lägger till MGAM till denna grupp av funktionellt viktiga njurproteiner identifierade i urinexosomer. Våra resultat tyder på att MGAM kan skilja proximal tubulär skada från andra typer av AKI hos cirrospatienter. Den kliniska betydelsen av MGAM-uppreglering hos cirrospatienter med AKI måste dock fastställas i framtida studier.


Datatillgänglighet
De kliniska och proteomiska data som används för att stödja resultaten av denna studie är begränsade av UCSD:s institutionella granskningsnämnd för att skydda patienternas integritet.*e data är tillgängliga från Dr. Linda Awdishu (lawdishu@ucsd.edu) för forskare som uppfyller kriterier för tillgång till konfidentiella uppgifter.
Intressekonflikt
Författarna förklarar att de inte har några intressekonflikter.
Erkännanden
Forskning stöds av NIH NIDDK UAB/UCSD O'Brien Center Grant DK0793337.
Författare
Linda Awdishu,1,2 Shirley Tsunoda,1 Michelle Pearlman,3 Chanthel Kokoy-Mondragon,2Majid Ghassemian,4Robert K. Naviaux,5Heather M. Patton,3Ravindra L. Mehta,2Bhavya Vijay,6och Satish P.Ramachandra Rao 2,6,7
1UC San Diego Skaggs School of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, San Diego, USA
2Biomarkers Laboratory, O'Brien Center förAkut njurskadaForskning, nefrologi-hypertoni, UC San Diego, Institutionen för medicin, San Diego, USA
3UC San Diego, Institutionen för medicin, avdelningen för gastroenterologi, San Diego, USA
4UC San Diego, Institutionen för kemi och biokemi, Biomolecular & Proteomics Spectrometry Facility, San Diego, USA
5UC San Diego, Institutioner för medicin, pediatrik och patologi, San Diego, USA
6I-AIM Biomarkers Laboratory, Re University of Trans-Disciplinary Health Sciences and Technology (TDU), Bangalore, Indien
7UC San Diego, Institutionen för medicin, avdelningen för infektionssjukdomar, San Diego, USA
Korrespondens bör riktas till Satish P. Ramachandra Rao; Mottaget 30 oktober 2018; Reviderad 31 december 2018; Godkänd 19 februari 2019; Publicerad 16 april 2019 Akademisk redaktör: Antonio Artigas
Copyright © 2019 Linda Awdishu et al. Detta är en artikel med öppen tillgång som distribueras under,som tillåter obegränsad användning, distribution och reproduktion i vilket medium som helst förutsatt att originalverket är korrekt citerat.

Referenser
[1] F. Fabrizi och P. Messa, "Utmaningar vid behandling av njursvikt före levertransplantation,"Kliniker i Lever Sjukdomvol. 21, nr. 2, s. 303–319, 2017.
[2] P. Tandon, MT James, JG Abraldes, CJ Karvellas, F. Ye och N. Pannu, "Relevansen av nya definitioner för incidens och prognos av akutanjurskadahos inlagda patienter med cirros: en retrospektiv populationsbaserad kohortstudie,"PLoS Onevol. 11, nr. 8, artikel-ID e0160394, 2016.
[3] JM Belcher, G. Garcia-Tsao, AJ Sanyal et al., "Association of AKI with mortality and complications in hospitalized patients with cirrhosis,"Hepatologivol. 57, nr. 2, s. 753–762, 2013.
[4] G. Garcia-Tsao, CR Parikh och A. Viola, "Akut njurskadai cirros,"Hepatologivol. 48, nr. 6, s. 2064–2077, 2008.
[5] R. Moreau och D. Lebrec, "Akut njursvikt hos patienter med cirrhosis: perspektiv i en ålder av MELD,"Hepatologivol. 37, nr. 2, s. 233–243, 2003.
[6] F. Wong, JG O'Leary, KR Reddy, et al., "Ny konsensusdefinition avakut njurskadaförutsäger exakt 30-dagarsdödlighet hos patienter med cirros med infektion,"Gastroenterologivol. 145, nr. 6, s. 1280.e1–1288.e1, 2013.
[7] PT Murray, RL Mehta, A. Shaw, et al., "Potentiell användning av biomarkörer iakut njurskada: rapport och sammanfattning av rekommendationer från den 10:e konsensuskonferensen för kvalitetsinitiativet för akut dialys,"NjureInternationellvol. 85, nr. 3, s. 513–521, 2014.
[8] WK Han, V. Bailly, R. Abichandani, R. Thadhani och JV Bonventre, "Njurskadamolekyl-1 (KIM-1): en ny biomarkör för mänsklig proximal tubuliskada,Njure Internationellvol. 62, nr. 1, s. 237–244, 2002.
[9] SG Coca, GN Nadkarni, AX Garg, et al., "Första postoperativa urinvägarnjurskadabiomarkörer och samband med varaktigheten av AKI i TRIBE-AKI-kohorten,"PLoS Onevol. 11, nr. 8, artikel-ID e0161098, 2016.
[10] C. Looze, D. Yui, L. Leung, et al., "Proteomisk profilering av mänskliga plasmaexosomer identifierar PPARc som ett exosom-associerat protein,"Biokemiska och biofysiska forskningskommunikationervol. 378, nr. 3, s. 433–438, 2009.
[11] J. Conde-Vancells, E. Rodriguez-Suarez, N. Embade, et al., "Karakterisering och omfattande proteomprofilering av exosomer som utsöndras av hepatocyter."Journal of Proteome Researchvol. 7, nr. 12, s. 5157–5166, 2008.
[12] GI Lancaster och MA Febbraio, "Exosomberoende trafficking av HSP70,"Journal of Biological Chemistryvol. 280, nr. 24, s. 23349–23355, 2005.
[13] GI Lancaster och MA Febbraio, "Mekanismer för stressinducerad cellulär HSP72-frisättning: implikationer för träningsinducerad ökning av extracellulär HSP72,"TräningsimmunologiRecensionvol. 11, s. 46–52, 2005.
[14] JPJJ Hegmans, PJ Gerber och BN Lambrecht, "Exosomes," iFunktionell proteomikvol. 484, s. 97–109, Humana Press, New York City, NY, USA, 2008.
[15] R. Zhan, X. Leng, X. Liu, et al., "Värmechockprotein 70 utsöndras från endotelceller genom en icke-klassisk väg som involverar exosomer,"Biokemiska och biofysiska forskningskommunikationervol. 387, nr. 2, s. 229–233, 2009.
[16] RL Mehta, JA Kellum, SV Shah, et al., "Akut njurskadanätverk: rapport om ett initiativ för att förbättra resultat vid akut njurskada,"Kritisk Vårdvol. 11, nr. 2, sid. R31, 2007.
[17] SP Ramachandra Rao, MA Matthias, C. Kokoy-Mon-dragonet al., "Proteomisk analys av urinexosomer avslöjar njurtubuli svar på leptospiral kolonisering i experimentellt infekterade råttor."PLoS försummade tropiska sjukdomarvol. 9, nr. 3, artikel e0003640, 2015.
[18] HC Christianson, KJ Svensson, TH van Kuppevelt, J.-P. Li och M. Belting, "Cancercells exosomer är beroende av cellytans heparansulfatproteoglykaner för deras internalisering
och funktionell aktivitet,"Förfaranden av de Nationell Vetenskapsakademinvol. 110, nr. 43, s. 17380–17385, 2013.
[19] A. Shevchenko, M. Wilm, O. Vorm och M. Mann, "Masspektrometrisk sekvensering av proteiner från silverfärgade polyakrylamidgeler,"Analytisk kemivol. 68, nr. 5, s. 850–858, 1996.
[20] F. Brambilla, F. Lavatelli, D. Di Silvestre, et al., "Hagelgevärsproteinprofil av mänsklig fettvävnad och dess förändringar i förhållande till systemiska amyloidoser."Journal of Proteome Researchvol. 12, nr. 12, s. 5642–5655, 2013.
[21] AC Paoletti, TJ Parmely, C. Tomomori-Sato, et al., "Kvantitativ proteomisk analys av distinkta däggdjursmediatorkomplex med hjälp av normaliserade spektrala överflödsfaktorer,"Proceedings of the National Academy of Sciencesvol. 103, nr. 50, s. 18928–18933, 2006.
[22] J. Xia, R. Mandal, IV Sinelnikov, D. Broadhurst och
DS Wishart, "MetaboAnalyst 2.0--en omfattande server för metabolomisk dataanalys,"Nukleinsyraforskningvol. 40, nej. W1, s. W127–W133, 2012.
[23] J. Xia, N. Psychogios, N. Young och DS Wishart, "MetaboAnalyst: en webbserver för metabolomisk dataanalys och tolkning,"Nukleinsyraforskningvol. 37, nr. S2, s. W652–W660, 2009.
[24] SPR Rao, R. Wassell, MA Shaw och K. Sharma, "Profilering av humana mesangiala cellsubproteomer avslöjar en roll för kalmodulin i glukosupptag."American JournalavFysiologi-Njure Fysiologivol. 292, nr. 4, s. F1182–F1189, 2007.
[25] SP Ramachandra Rao, Y. Zhu, T. Ravasi, et al., "Pirfenidon är återskyddande idiabetisk njursjukdom," Journal of the American Society of Nephrology, vol. 20, nr 8, s. 1765–1775, 2009.
[26] U. Reiss och B. Sacktor, "Njurebrush border membrane maltase: purification and properties," Archives of Biochemistry and Biophysics, vol. 209, nr 2, s. 342–348, 1981.
[27] B. Sacktor, "Trehalas och transporten av glukos i däggdjuretnjureand intestine," Proceedings of the National Academy of Sciences, vol. 60, nr 3, s. 1007–1014, 1968.
[28] SJ Berger och B. Sacktor, "Isolering och biokemisk karakterisering av borstkanter från kaninnjure," Journal of Cell Biologyvol. 47, nr. 3, s. 637–645, 1970.
[29] D. Kerjaschki, L. Noronha-Blob, B. Sacktor och
MG Farquhar, "Mikrodomäner med distinkt glykoproteinsammansättning injureproximal tubuli borstkant,"Journal of Cell Biologyvol. 98, nr. 4, s. 1505–1513, 1984.
[30] D. Povero, A. Eguchi, H. Li et al., "Cirkulerande extracellulära vesiklar med specifika proteom- och levermikroRNA är potentiella biomarkörer för leverskada vid experimentell fettleversjukdom."PLoS Onevol. 9, nr. 12, artikel-ID e113651, 2014.
[31] R. Hernaez, E. Sola`, R. Moreau och P. Gine`s, "Acute-on-chronic lever failure: an update,"Magevol. 66, nr. 3, s. 541–553, 2017.
[32] T. Pisitkun, R.-F. Shen och MA Knepper, "Identifiering och proteomisk profilering av exosomer i mänsklig urin,"Proceedings of the National Academy of Sciencesvol. 101, nr. 36, s. 13368–13373, 2004.
[33] PA Gonzales, T. Pisitkun, JD Hofert, et al., "Storskalig proteomik och fosfoproteomik av urinexosomer,"Tidning av de amerikansk Samhälle av Nefrologivol. 20, nej. 2, s. 363–379, 2009.
