Spontan granulocytisk leukemi i A NOD/Shi-scid IL-2R null mus

Abstrakt:Här rapporterar vi ett fall av spontan granulocytisk leukemi hos en 51-vecka gammal manlig NOD/Shi-scidIL-2R noll (NOG) mus. Musen visadeprogressiv anemiochgrova andningsrörelser. Makroskopiskt var mjälten missfärgad och förstorad. Histologiskt, benmärgen avbröstbenoch lårbenet var mycket cellulärt och nästan uteslutande fyllt medneoplastiska celler. Kärnorna hos neoplastiska celler var stora, ovala till något oregelbundna till formen, och ett litet antal celler hadenjure- eller ringformade kärnor.Neoplastiska cellerinfiltrerade i stor utsträckning organen, och mjälten och levern var framträdande involverade. Immunhistokemiskt var en stor population av neoplastiska celler i den röda pulpan i mjälten och sinusoiden i levern positiv förmyeloperoxidas. Baserat på de histologiska egenskaperna diagnostiserades detta fallgranulocytisk leukemi. Denna nya information omspontana tumörerkan vara till hjälp för lämplig användning av denna musstam i vidare forskning. (DOI: 10.1293/tox.2020-0092; J Toxicol Pathol 2021; 34: 241–244)

Nyckelord: granulocytisk leukemi, NOG-mus, spontan tumör

KLICKA HÄR FÖR ATT FÅ NATURLIGT EKOLOGISKT CISTANCHEEXTRAKT MED 25% ECHINACOSID OCH 9% ACTEOSIDE FÖR NJURFUNKTION

Supportive Service Of Wecistanche - Den största cistanche-exportören i Kina:

E-post:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel:+86 15292862950

Handla för fler specifikationer:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

Spontan granulocytisk leukemirapporteras sällan i flera stammar av möss, även om kemiska medel och joniserande strålning kan öka förekomsten hos vissa musstammar1, 2. NOD/Shi-scid IL-2R noll (NOG) möss är allvarligtdjur med immunbrist, och presenterar defekter i T-, B- och naturliga mördarceller, och dåligt fungerande makrofager och dendritiska celler genom knockout av IL-2-receptorkedjan (IL2R c) i NOD-scid-stammen3. Denna musstam används för icke-kliniska tester, såsom tumörgenicitetstestet, för att bedöma kvaliteten och säkerheten hos biologiska produkter för regenerativ medicin med användning av mänskliga celler/vävnader, på grund av den markant bättre ympningen av xenogena celler4–6. Även om det immunbristtillstånd och dess implikationer för xenotransplantat har studerats väl, finns lite information tillgänglig om spontana tumörer som förekommer i denna musstam, såsom tymisk lymfom,bröst-körtel adenom/adenokarcinom, bronkioloalveolärt karcinom, rabdomyosarkomoch teratom7. Här rapporterar vi ett fall av granulocytisk leukemi hos en 51-vecka gammal NOG-hanmus.

Djuret erhölls från In-Vivo Science Inc. (Kanagawa, Japan) vid en ålder av 6 veckor och hölls obehandlat. Djuret hölls individuellt i en plastbur med ett individuellt ventilerat bursystem (Maxi Miser Caging System; Oriental Giken Inc., Tokyo, Japan) i ett miljökontrollerat barriärsystemrum, som hölls vid en temperatur på 22 ± 2 grader med en luftfuktighet på 50 ± 20 % och en 12-h ljus/mörkercykel. Musen matades med en autoklaverad pelleterad diet (CRF-1; Charles River Japan, Inc., Tokyo, Japan) med autoklaverat kranvatten och libitum. Djuret hanterades enligt det protokoll som godkänts av Institutional Animal Care and Use Committee vid CMIC Pharma Science Co., Ltd., som är ackrediterat av AAALAC International.

Denna mus visade kliniska tecken på försvagning, såsom anemi, hårda andningsrörelser och minskning av kroppsvikt mellan 49 och 51 veckors ålder. Djuret avlivades vid 51 veckors ålder. Vid obduktion var mjälten missfärgad och förstorad. Inga uppenbara onormala grova fynd observerades i de andra organen. Tymus och lymfkörteln var atrofiska, liknande de hos normala NOG-möss.

Alla organ och vävnadsprover samlades rutinmässigt, fixerades i 10% neutralt buffrat formalin, inbäddades i paraffin och snittades vid cirka 3 μm. För hans till patologiska undersökning färgades sektionerna med hematoxylin och eosin (HE). Sektioner av mjälten och levern färgades immunhistokemiskt för kanin anti-humant myeloperoxidas (MPO) polyklonal antikropp (Dako Japan, Tokyo, Japan) som en myeloid cellmarkör, kanin anti-human CD3 monoklonal antikropp (Nichirei Biosciences Inc., Tokyo, Japan) ) som en T-cellsmarkör och kanin anti-human Pax-5 monoklonal antikropp (Abcam Inc., Cambridge, Storbritannien) som en B-cellsmarkör8. Sektioner inkuberades med antikropparna vid rumstemperatur under 1 timme, och immunodetektion utfördes med användning av ett Histofine® MOUSESTAIN-KIT (Nichirei Biosciences Inc.) med 3,3'-diaminobensidin/H2O2 som kromogen. Immunfärgade sektioner gjordes sedanmotfärgad med hematoxylin.

Histopatologiskt var benmärgen i bröstbenet och lårbenet mycket cellulär och nästan uteslutande fylld med neoplastiska celler (Fig. 1A). Fettvävnaden var helt förskjuten. Det fanns enstaka cellhärdar bestående av erytroida och megakaryocytiska element i märgen, som ansågs vara rester avnormal hematopoiesis. De flesta neoplastiska celler visade ett blastiskt utseende, kännetecknat av stora, ovala till något oregelbundet formade kärnor och med ett retikulärt kromatin innehållande en eller flera framträdande nukleoler. Det fanns ett litet antal celler med njur- eller ringformade kärnor och ett fåtal celler med flikiga kärnor fanns också (Fig. 1B). Granuler i cytoplasman hos neoplastiska celler var inte uppenbara i sektionerna färgade med HE. Många mitotiska figurer hittades i märgen, och enstaka apoptotiska kroppar observerades också. Neoplastiska celler invaderade markant periosteum och den omgivande skelettmuskeln. Det förekom omfattande infiltration av neoplastiska celler i andra organ och vävnader, och mjälten och levern var framträdande involverade. I mjälten observerades neoplastiska celler i hela den röda pulpan (fig. 2). Kapselinfiltration av neoplastiska celler var uppenbar. Ett fåtal utvecklande erytroidserier och megakaryocyter observerades. Megakaryocyter innehållande en eller några myeloidceller i cytoplasman, vilket tyder på emperipoles, observerades ibland. I levern infiltrerade neoplastiska celler Glissons kapsel och leversinusoider diffust (Fig. 3). Neoplastiska celler med njur- eller ringformade kärnor var också tydliga i vissa blodkärl. Vissa hepatocyter i det periportala området, med framträdande neoplastisk cellinfiltration, visade degeneration eller nekros, medan den normala strukturen av leverlobuli förblev intakt. Neoplastisk cellinfiltration hittades också i andra organ, inklusive alveolväggen och perivaskulära regionen i lungan, interstadion i njurarna, sinusoid i binjurarna och slemhinna och submukosa i mag- och tarmkanalen (mage och tarm). Immunhistokemiskt var en stor population av neoplastiska celler i den röda pulpan i mjälten (fig. 4) och leverns sinusform positiva för MPO. CD3- och Pax-5-positiva celler upptäcktes inte. Resultaten av immunfärgning av CD3 och Pax-5 liknade de för mjälten hos normala NOG-möss, som var histologiskt hypoplastiska och inte visade några CD3- eller Pax{13}}-positiva celler.

Immunhistokemisk undersökning avslöjade att de neoplastiska cellerna härstammar från myeloidcellslinjerna. I några av de inblandade områdena, särskilt mjälten och levern, hade ett litet antal celler njur-, ring- eller flikformer som tyder på differentierande myeloidserier. Dessa fynd tyder på att neoplastiska celler härrör från omogna granulocyter. Fallet med svår myelopoes kan vara uppenbart genom närvaron av alla typer av utvecklande myeloidserier, i motsats till dominansen av omogna celler vid leukemi. Dessutom är progressiv anemi ett vanligt kliniskt tecken på granulocytisk leukemi, och ökningen av erytroida och megakaryocytiska celler är dålig1. Den mindre populationen av granulocyter med flikiga kärnor i det drabbade området utan uppenbar inflammation indikerar att fynden i föreliggande fall är neoplastisk och inte reaktiv myelopoies.

Vid granulocytisk leukemi kan benmärgen ersättas av omogna och mogna myeloidceller. I en tidigare rapport om andra stammar av möss infiltrerade dessa neoplastiska celler helt och hållet levern, mjälten, lymfkörtlarna, etc.2, och dessa celler i mjälten och levern var huvudsakligen lokaliserade i den röda pulpan och runt Glissons kapsel1. Således var fördelningen av leukemiceller i det aktuella fallet identisk med den i det tidigare fallet. Baserat på cellers morfologi klassificeras granulocytisk leukemi hos möss i två typer: den juvenila typen, som är jämförbar med human akut myelogen leukemi, och den mogna typen till human kronisk myelogen leukemi1. I det juvenila fallet dominerades neoplastiska celler i benmärg, mjälte och lever av dåligt differentierade celler, medan myeloida element som representerar olika mognadsgrader kan ses och andelen myeloblaster var låg i vissa mogna fall2, 9. I detta fall dominerades leukemiceller av en omogen form med stora, ovala till något oregelbundet formade kärnor. Dessutom, med tanke på de kliniska fynden att allmän hälsoförsämring, inklusive progressiv anemi och grova andningsrörelser, utvecklades akut; därför antas förevarande mål vara av ungdomstyp.

Fig. 1. Histologiska bilder av lårbenets benmärg. S: Neoplastiska celler sprider sig diffust och ersätter därigenom benmärgen. B: Kärnorna är stora, ovala till något oregelbundna till formen. Ett litet antal celler har njur- (gul pilspets), ring- (grön pilspets) eller lob- (vit pilspets) formade kärnor. Den mitotiska figuren indikeras av den vita pilen. HAN fläckar. Svart streck=50 μm (A), 10 μm (B).

I en tidigare publikation om NOG-möss var neoplastiska lesioner generellt ovanliga; tymuslymfom har dock rapporterats vid 0.82 % i åldersgruppen från 16 till 40 veckor7, 10. Så vitt vi vet har spontan granulocytisk leukemi inte tidigare rapporterats hos NOG-möss. I flera stammar av möss, inklusive B6C3F1 och BALB/c, inträffade granulocytisk leukemi sällan2, 11 och har inte rapporterats i fallet med dessa möss vid 12 månaders ålder eller yngre. Det aktuella fallet utvecklade granulocytisk leukemi vid 51 veckors ålder, vilket var en relativt ung ålder. Denna nya information om spontana tumörer kan vara till hjälp för lämplig användning av denna musstam i vidare forskning.