Studie om separation och immunkompetens av vattenextrakt av polysackarid från Cistanche Tubulosa

för mer information:ali.ma@wecistanche.com

Ailadan·Maimaitiaili1,LI Yang1,YAO Jun1,YUAN Jie2

(1. School of Pharmacy, Xinjiang Medical University, Urumqi 830011, Kina;2. Collage of Houbo, Xinjiang Medical University, Xinjiang Klamayi 834000, Kina）

ABSTRAKT MÅL:För att isolera vattenextraktet avpolysackarider från Cistanche tubulosaoch att undersöka deras immunkompetens in vitro. METODER: AB{{{{30}}}} makroporöst adsorptionsharts användes för att avfärga C. tubulosa polysackarid. Avfärgningsprocessen optimerades genom ett ortogonalt test med retentionshastighet och avfärgningshastighet av polysackarid som heltäckande poäng, och med användning av adsorptionshastighet, avfärgningstid, provkoncentration som faktorer. Verifieringstesterna genomfördes. DEAE-650M jonbytarkolonn användes för att separera vattenextraktet av avfärgad C. tubulosa-polysackarid. CCK-8-analys användes för att detektera effekterna av olika koncentrationer av polysackarid (6.25-100 ug/mL) före och efter isolering på proliferationshastigheten för mössmakrofag RAW264.7. Griess-metoden och ELISA-analys användes för att detektera effekterna av låg, medelhög och hög koncentration av polysackarid (12,5,25,50 ug/mL) på frisättningen av NO,IL-6 och TNF- i LPS-inducerade RAW264.7-celler. RESULTAT: I den optimala avfärgningsprocessen av AB-8 makroporöst adsorptionsharts var adsorptionsflödet 1,2 BV/h, avfärgningstiden var 9 timmar och provkoncentrationen var 25 mg/ml. De omfattande poängen för 3 gånger av verifieringstest var 63,43％,63,29％ respektive 63,34％, med ett genomsnitt på 63,35％（RSD＝0.11％,n＝3）. En neutral polysackarid (CTZ) och 5 syror polysackarider (CT1, CT2, CT3, CT4, CT5) isolerades från polysackariden av C. cistanche, innehållet var 299,2,168.0},123.6,54.,123.6,54. 11,2 mg/g. Jämfört med kontrollgruppen, 6. 25-100 ug/mL CTZ (förutom 6,25 μ g/mL), CT2, CT4, CT5 och 6,25 μ g/mL CTC (polysackariden före separation) skulle kunna öka proliferationshastigheten avsevärt av RAW264.7-celler（P＜{{80}}.05）, medan 6.25-100 ug/mL CT1,CT3 och 50 ug/mL CTC kunde minska spridningshastigheten för RAW264. 7 celler (P＜0,05). Jämfört med LPS-gruppen minskade frisättningen av NO signifikant i låg-, medel- och högkoncentrationsgrupper av CTC, CT2, CT3 och CT5, CTZ lågkoncentrationsgrupper (P＜0,05), medan de ökade signifikant i högkoncentrationsgrupper av CT1 och CT4 （P＜0,05）. Frisättningen av IL-6 (förutom CT1 högkoncentrationsgruppen och CT5 lågkoncentrationsgruppen) och TNF- (förutom CT1 medelkoncentrationsgruppen) minskade signifikant i låg-, medel- och högkoncentrationsgrupperna (P＜0,05) ）. SLUTSATSER: Den optimerade avfärgningstekniken för makroporöst adsorptionsharts är stabil och genomförbar i studien. En neutral polysackarid och 5 sura polysackarider kan isoleras från vattenextrakt av C. tubulosa polysackarider, bland vilka CT2 polysackarid har den starkare antiinflammatoriska förmågan.

NYCKELORD:Cistanche tubulosa polysackarid; Avfärgning;Separation;Immunokompetens

Cistanche tubulosaär en torr, köttig stjälk med fjällblad avCistanche tubulosa (Schenk) Wightav familjen Lidanaceae. Moderna studier har visat att Cistanche Tubula innehåller fenetylalkoholglykosider, iridoidglykosider, lignaner, polysackarider, alkaloider och andra biologiskt aktiva ämnen, som har afrodisiakum, laxerande, leverskyddande och anti-aging egenskaper. , Förstärkt immunitet mot trötthet och nootropa effekter [1-4], kan användas för klinisk behandling av brist på njure yang, brist på essens och blod, impotens och infertilitet, svaghet i midja och knän, svaghet i muskler och skelett, torra tarmar och förstoppning [5].

Klicka för att Cistanche herba produkter

Vattenextraktet avCistanche tubulosa polysackaridär brungul. Det tidigare experimentet från vår forskargrupp fann att utöverCistanche tubulosa polysackarid, innehåller vattenextraktet även icke-målkomponenter såsom vattenlösliga pigment och proteiner. Detta bidrar till separation och rening av polysackarider. Forskning om biologisk aktivitet har orsakat stora svårigheter. Den traditionella avfärgningsbehandlingen med organiska lösningsmedel kommer att förstöra den kemiska strukturen hos målkomponenten i råextraktet och minska personens farmakologiska aktivitet och införandet av skadliga ingredienser till människokroppen [6]. Makroporöst adsorptionsharts är ett vanligt material för avfärgning av polysackarider i kinesisk medicinextrakt. Det är ett kostnadseffektivt polymeradsorptionsmaterial med stabila fysikaliska och kemiska egenskaper. Det kan riktas mot dess selektiva adsorptions- och siktningsprestanda för pigmentkomponenter. För att ta bort pigmenten i extrakten från traditionell kinesisk medicin kan det dessutom regenereras genom betning och alkalisk tvätt, så det används flitigt [7]. Denna studie avser att använda makroporöst adsorptionsharts för att avfärga vattenextraktet av Cistanche Tubula polysackarid, och använda ortogonala experiment för att optimera avfärgningsförhållandena; efter avfärgningen av extraktet, beroende på den olika typen av grupp som bärs av polysackariden, är det planerat att använda metoden för jonbyteskolonnkromatografi separerar de neutrala och sura polysackaridkomponenterna i polysackariden avCistanche tubulosa.

Det har studier visatcistanche växtpolysackarider har immunmodulerande effekter och är naturliga immunmodulatorer som kan aktivera komplementsystemet och immunceller som T/B-lymfocyter, makrofager, naturliga mördarceller (NK) och kan också främja en mängd olika frisättning av cytokiner och främja produktionen av antikroppar , etc. [8-11]. Lipopolysackarid (LPS) kan aktivera den inflammatoriska signalvägen för makrofager, inducera kväveoxid (NO) och pro-inflammatoriska cytokiner som interleukin 6 (IL-6) och tumörnekrosfaktor-alfa (TNF-). Syntes och frisättning, vilket utlöser en rad inflammatoriska reaktioner i kroppen [12]. Denna studie avser att etablera en LPS-inducerad mus RAW264.7 makrofaginflammationsmodell, utgående från effekterna av Cistanche Tubula polysackarid på makrofagproliferation, inflammatorisk faktorsekretion och NO-produktion, och preliminär utvärdering av dess effekt på kroppens immunaktivitet Det syftar till att ge en teoretisk grund för en fördjupad studie av den antiinflammatoriska aktiva substansen.Cistanche tubulosapolysackarid och utvecklingen av dess polysackaridresurser.

Preliminära studier har funnit att när polysackariderna i Cistanche cistanche extraheras med vatten kommer mer vattenlösliga ämnen att lösas upp tillsammans, vilket påverkar renheten hoscistanche cistanche polysackarider. Därför kan ytterligare separation och rening av dem lägga grunden för studiet av polysackaridmaterialbas och biologisk aktivitet. Den makroporösa adsorptionshartsmetoden är en vanlig avfärgningsmetod [17-19]. Eftersom det fortfarande är oklart om pigmentsammansättningen iCistanche tubulosa, så forskargruppen använde statiska adsorptionsexperiment för att screena det mest lämpliga makroporösa adsorptionshartset AB-8 från makroporösa adsorptionshartser med olika polaritet. Polysackariden av Cistanche deserticola har god retentionsförmåga. För att uppnå en bättre avfärgningseffekt är denna forskning baserad på tidigare forskning och använde ortogonala experiment för att bestämma avfärgningsprocessen (tvättning. Desorptionsflödet, avfärgningstid och provmassakoncentration) har optimerats. Som ett resultat var den optimala avfärgningsmetoden för polysackariden av Cistanche tubulosa en elueringsflödeshastighet på 1,2 BV/h, en avfärgningstid på 9 timmar och en provmassakoncentration på 25 mg/ml. Verifieringsexperimentets resultat visar att avfärgningsmetoden är genomförbar.

Renheten och typen av naturliga polysackarider är viktiga faktorer som påverkar dess aktivitet. Därför är den relevanta forskningen om isolering och reningsmetoder för polysackarider fortfarande i fokus för forskningsarbetet av naturliga aktiva polysackarider. De vanligaste metoderna för separation av polysackarider inkluderar utfällning, gelkromatografi, anjonbyteskromatografi, makroporös hartskolonnkromatografi och ultrafiltrering [20]. På grund av de olika sammansättningarna av monosackarider har polysackarider olika laddningsegenskaper. De kan delas in i neutrala polysackarider och sura polysackarider. Neutrala polysackarider är polymerer som består av två eller flera olika sockerbaserade monomerer som inte innehåller organiska syror. Sura polysackarider är mer komplexa än neutrala polysackarider vad gäller sammansättning och struktur, förutom att de innehåller mer än två sockerbaserade monomerer. , Innehåller även uronsyra mono Body [21]. Anjonbyteskolonnkromatografi använder skillnaden i laddning av polysackarider för att separera neutrala polysackarider från sura polysackarider [22]. Av denna anledning använde denna studie en DEAE-650M jonbyteskolonnkromatografikolonn för att separera Cistanche Tubula-polysackarider, och totalt 1 neutral polysackarid och 5-syrapolysackarider separerades. Makrofager är immunkompetenta celler som kan reglera immunitet genom att uppsluka och döda patogena mikroorganismer. Studier har visat att när människokroppen stimuleras av patologisk eller mekanisk skada, kan ett läkemedelsintervention aktivera makrofager för att förbättra den fagocytiska kapaciteten hos makrofager inducerad av LPS, och därigenom hämma produktionen av NO och en serie inflammatoriska celler som IL{{ 9}} och TNF-faktorsekretion, vilket skyddar värden från patogener [23]. För detta ändamål testade denna studie effekterna av olika Cistanche tubulosa-polysackarider på proliferationshastigheten av RAW264.7-celler, såväl som effekterna på LPS-inducerade makrofager för att frigöra NO, IL-6 och TNF-. Som ett resultat, inom masskoncentrationsintervallet 12,5, 25 och 50 ug/mL, främjade det inte bara proliferationen av RAW264.7-celler utan inhiberade också signifikant proliferationen av RAW264.7-celler.

Depolysackarid av Cistanche tubulosai RAW264.7-celler inducerade av LPS att frigöra NO, är IL-6 och TNF- CT2. Relevanta studier har visat att monosackaridsammansättningen och molekylvikten hos polysackarider kommer att påverka dessimmunmodulerandeaktivitet. Monosackarider som galaktos, arabinos, mannos och glukos är positivt korrelerade med immunaktiviteten hos polysackarider [24]. Polysackarider med högre molekylvikter kan innehålla högre multipla mycket repetitiva knutstrukturer, kan korskoppla plasmamembranytreceptorer i flera riktningar, och specifiktförbättra det immunmodulerandeeffekt [25]. Därför kan monosackaridsammansättningen av den sura polysackariden CT2 i denna studie innehålla speciella monosackarider eller multipla monosackarider som är positivt relaterade till immunaktivitet, och molekylvikten kan vara större än neutrala polysackarider och andra sura polysackarider, men ytterligare forskning behövs för att bekräfta . Sammanfattningsvis är den optimerade makroporösa adsorptionshartsavfärgningsprocessen i denna forskning stabil och genomförbar; 1 neutral polysackarid och 5 syrapolysackarider kan separeras från vattenextraktet av Cistanche cistanche cistanche, bland vilka den immunologiska aktiviteten av syrapolysackariden CT2 Stronger. Denna studie kan lägga den experimentella grunden för utveckling och användning av Cistanche Tubula polysackarider.