Studie om komponentanalys och antioxidantaktivitet hos polysackarider från Cistanche Deserticola Deserticola
Jul 06, 2023
Abstrakt: I detta dokument erhölls det neutrala sockret CLP1 och det sura sockret CLP2 från Cistanche deserticola genom att extrahera polysackariden från Cistanche deserticola deserticola och rena den råa polysackariden CLP från Cistanche deserticola deserticola med DEAE-cellulosakolonnkromatografi. Innehållet av totalt socker, uronsyra och protein i Cistanche deserticola-råpolysackarid CLP, Cistanche deserticola-neutralt socker CLP1 och Cistanche deserticola-syrasocker CLP2 bestämdes med ultraviolett spektrumskanning, och polysackaridens molekylvikt och monosackaridsammansättning bestämdes. Samtidigt analyserades halten av Cistanche deserticola-råpolysackarid CLP. DPPH-radikalfångande kapacitet och total antioxidantkapacitet hos neutralt socker CLP1 från Cistanche deserticola deserticola och surt socker CLP2 från Cistanche deserticola deserticola analyserades experimentellt. De uppmätta data visade att sammansättningen av rå polysackarid CLP av Cistanche deserticola deserticola, neutralt socker CLP1 från Cistanche deserticola deserticola och surt socker CLP2 av Cistanche deserticola deserticola var liknande, men innehållet var signifikant olika; Det neutrala sockret CLP1 från Cistanche deserticola deserticola och det sura sockret CLP2 från Cistanche deserticola deserticola kan erhålla flera elueringstoppar när de separeras och renas med DEAE-cellulosakromatografisk kolonn, och molekylvikten är mellan 0 och 10000 Da, vilket indikerar att huvudkomponenten i Cistanche deserticola deserticola polysackarid är småmolekylärt socker. Monosackariderna av neutralt socker CLP1 i Cistanche deserticola deserticola visade att monosackariderna i neutralt socker CLP1 i Cistanche deserticola deserticola deserticola huvudsakligen var mannos, galaktosuronsyra, glukos, galaktos och arabinos; Bestämningsresultaten av monosackarider av Cistanche deserticola surt socker CLP2 visade att monosackariderna i Cistanche deserticola surt socker CLP2 huvudsakligen var rhamnos, galaktos uronsyra, glukos och galaktos. Experimentet för rensning av fria radikaler med DPPH och total antioxidantkapacitetsexperiment av polysackarider i Cistanche deserticola visade att antioxidantkapaciteten för neutralt socker CLP1 i Cistanche deserticola var högre än för rå polysackarid CLP i Cistanche deserticola och surt socker CLP2 i Cistanche deserticola.
Nyckelord: Cistanche deserticola; polysackarider; Komponentanalys; Antioxidantaktivitet; absorbans
Cistanche deserticola experiment
Cistanche deserticola deserticola är en slags örtartad parasitväxt, som innehåller ett stort antal fenolglykosider, alkaloider, fenetylalkoholglykosider, sockerarter och alkoholer. Bland dem är sockerarter huvudsakligen i form av polysackarider. Cistanche deserticola polysackarider har en stark immunaktivitetsreglerande funktion [1-2]. Som en mellanmetabolit i mänskliga livsaktiviteter är fria radikaler i ett instabilt tillstånd och har hög oxidationsaktivitetsintensitet, vilket kommer att orsaka skador på vävnader och organ hos biomakromolekyler i människokroppen. Därför har användningen av naturliga antioxidanter för att eliminera fria radikaler blivit huvudinriktningen för aktuella matstudier. Polysackaridkomponenter i Cistanche deserticola har en stark antioxidantkapacitet, vilket kan främja eliminering av fria radikaler i människokroppen [3].
Fördelar med cistanche tubulosa - Antioxidant
I denna artikel togs Cistanche deserticola deserticola som forskningsobjekt, och polysackaridämnena extraherades och klassificerades. Molekylvikten för Cistanche deserticola deserticola polysackaridsubstanser mättes med högpresterande gelpermeationskromatografi. Samtidigt fördjupades sammansättningen av polysackaridämnen. Antioxidantaktiviteten hos Cistanche deserticola deserticola polysackarid analyserades genom att mäta kapaciteten för att avlägsna fria radikaler och den totala antioxidantkapaciteten hos Cistanche deserticola deserticola polysackaridkomponenter. Det ger en teoretisk grund för utveckling och utnyttjande av Cistanche deserticola deserticola deserticola.
Öken levande cistanche
Klicka här för att se produkter från Cistanche
【Be om mer】 E-post:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692
1 Provberedning av Cistanche deserticola
Väg upp 2,5 kg Cistanche deserticola, skiva den, tillsätt 12,5 L destillerat vatten och koka i 3 timmar. Efter kokning, filtrera och samla upp filtratet. Tillsätt 75 procent etanol och låt stå i 24 timmar. Centrifugera det vid 4000 r/min i 30 minuter, samla upp sedimentet och frys och torka sedimentet för att erhålla rå polysackarid CLP från Cistanche deserticola [4]. Ta DEAE-cellulosa, blötlägg och sväll den före avgasningsbehandling, ladda den i DEAE-cellulosaanjonbytarkromatografikolonnen och balansera den med destillerat vatten och NaCl-lösning. Väg upp 100 mg oren polysackarid CLP från Cistanche deserticola deserticola och lös den i 10 ml destillerat vatten. Efter tvättning med destillerat vatten, samla upp elueringsmedlet och koncentrera det för frystorkning för att erhålla neutralt socker CLP1 från Cistanche deserticola deserticola; Efter eluering med NaCl-lösning uppsamlades eluenten, koncentrerades och frystorkades efter dialys för att erhålla det sura sockret CLP2 från Cistanche deserticola [5].
Bered det neutrala sockret CLP1 och det sura sockret CLP2 från Cistanche deserticola till polysackaridlösningar med en koncentration av 1 mg/ml. Använd en 210-600nm spektrofotometer för UV-spektroskopi. När en topp uppträder vid 260-280nm, bekräftas det att lösningen innehåller protein och nukleinsyra [6].
Huvudkemiska beståndsdelar i Cistanche deserticola
2 Bestämning av polysackaridkomponenter i Cistanche deserticola
Halten av totalsocker i Cistanche deserticola bestämdes med fenolsvavelsyrametoden. Mät {{0}}, 0.2, 0.4, 0.6, {{10}}.8 och 1mL glukoslösningar med en koncentration av 0,1 mg/ml, och placera dem i provrör av glas. Tillsätt destillerat vatten till en konstant volym på 1 ml och tillsätt sedan 0,5 ml fenolreagens med en koncentration av 6 procent och 2,5 ml koncentrerad svavelsyra till provrören. Skaka väl och kyl till rumstemperatur. Använd en spektrofotometer för att mäta absorbansen vid 490nm, med sockerhalten som x-axeln och absorbansen som y-axeln, rita en standardkurva och beräkna regressionsekvationen [7-8].
Coomassie brilliant blue metod användes för att bestämma proteinhalten i Cistanche deserticola-prover. Ta 1mL standardprover med olika koncentrationer och provlösningar med koncentrationer av 0,1mg/ml, tillsätt 4mL Coomassie brilliant blue-lösning i varje provrör, skaka väl och stå sedan stilla. Använd en spektrofotometer för att mäta absorbansen vid 495nm och beräkna proteinhalten i provet enligt standardkurvans ekvation [9].
Halten av uronsyra i Cistanche deserticola bestämdes med m-hydroxifenylmetoden. Ta 0,4mL standardlösning med olika koncentrationer och provlösning med en koncentration av 0,1mg/mL, tillsätt 2,5mL koncentrerad svavelsyra i provröret, skaka det väl och utför sedan ett 25 minuters kokande vattenbad, ta ut det och kyl det till rumstemperatur, tillsätt m-hydroxifenyl med en koncentration av 0,3 procent och natriumhydroxidlösning med en koncentration av 0,5 procent i provrör, skaka det väl och placera det sedan i 30 minuter. Använd en spektrofotometer för att mäta absorbansen vid 525 nm och beräkna halten av uronsyra i provet enligt standardkurvans ekvation [10-11]. Den relativa molekylvikten för Cistanche deserticola polysackarid bestämdes med högpresterande gelkromatografi, och monosackaridsammansättningen av Cistanche deserticola deserticola bestämdes med högpresterande vätskekromatografi [12].
3 Bestämningsresultat och analys av polysackaridkomponenter i Cistanche deserticola
UV-spektrumskanningskurvan för fotometern vid 210-600nm visas i figur 1
Figur 1 UV-spektral skanningskurva (210-600nm)
Det kan ses från figur 1 att det neutrala sockret CLP1 från Cistanche deserticola deserticola har en uppenbar absorptionstopp vid 280 nm, och det sura sockret CLP2 från Cistanche deserticola deserticola deserticola har ingen uppenbar absorptionstopp vid 260-280nm, men UV absorptionsspektrum är högt. Eftersom tryptofan och tyrosin som finns i proteinet har stort absorptionsvärde för ultraviolett ljus vid 280nm, kan det fastställas att det neutrala sockret CLP1 från Cistanche deserticola innehåller glykoprotein, och det är omöjligt att avgöra om det sura sockret CLP2 i Cistanche deserticola innehåller nukleinsyra syra och protein.
DEAE cellulosaanjonbyteskromatografisk kolonnkromatografi kan adsorbera joniska ämnen och föroreningar på den kromatografiska kolonnen för att åstadkomma separation av polysackaridämnen. Efter koncentrering och torkning av tvättlösningen med destillerat vatten erhölls totalt 34,68 mg neutralt socker CLP1 från Cistanche deserticola, och efter eluering, koncentrering och torkning med NaCl-lösning erhölls totalt 16,52 mg surt socker CLP2 från Cistanche deserticola. Under experimentet erhölls standardkurvans ekvationer för totalt sockerinnehåll, proteininnehåll och uronsyra från Cistanche deserticola. Innehållet av totalt socker, protein och uronsyra i Cistanche deserticola mättes, som visas i tabell 1.
Tabell 1 Totalt innehåll av socker, protein och uronsyra i Cistanche deserticola
Regressionsekvationen kan erhållas genom att bestämma molekylvikten och topparean för standardprovet. Molekylvikten för provet som ska testas kan erhållas genom att ersätta fotoemissionssignalvärdet för provet som ska testas i regressionsekvationen. Ytterligare analys och beräkning kan erhålla den antal medelmolekylvikten, viktmedelmolekylvikten och dispersionskoefficienten för det neutrala sockret CLP1 och det sura sockret CLP2 i Cistanche deserticola. Retentionstiden och molekylviktsberäkningsresultaten för högpresterande gelpermeationskromatogrammet för Cistanche deserticola neutralt socker CLP1 och Cistanche deserticola surt socker CLP2 visas i tabell 2. Antalets medelmolekylvikt används för att representera storleken på den uppmätta molekylen, och förhållandet mellan viktmedelmolekylvikten och talmedelmolekylvikten används för att representera molekylfördelningsbredden.
Tabell 2 Bestämningstid för retentionstopp och molekylviktsberäkningsresultat
Det kan ses från tabell 2 att molekylviktsfördelningsintervallet för det neutrala sockret CLP1 i Cistanche deserticola och det sura sockret CLP2 i Cistanche deserticola är 0~10000 Da, vilket indikerar att polysackariden i Cistanche deserticola är en liten molekylpolysackarid med olika molekyler, och molekylvikten visar heterogenitet. Man kan dra slutsatsen att det neutrala sockret CLP1 från Cistanche deserticola och det sura sockret CLP2 från Cistanche deserticola är blandningar av flera polysackaridämnen.
Se tabell 3 för HPLC-topparna och toppretentionstiderna för nio monosackaridstandardprover, neutralt socker CLP1 från Cistanche deserticola deserticola och surt socker CLP2 från Cistanche deserticola deserticola. Genom att jämföra topptiden kan man dra slutsatsen att det finns fem uppenbara monosackarider i det neutrala sockret CLP1 av Cistanche deserticola och fyra uppenbara monosackarider i det sura sockret CLP2 av Cistanche deserticola. Andelen monosackarider i neutralt socker CLP1 av Cistanche deserticola deserticola och surt socker CLP2 av Cistanche deserticola deserticola visas i tabell 4.
Tabell 3 Retentionstid för monosackarid högpresterande vätskekromatografi toppar
Tabell 4 Andel monosackarider i Cistanche deserticola
Monosackaridhalten i det neutrala sockret CLP1 i Cistanche deserticola efter hydrolys skiljer sig väsentligt från det sura sockret CLP2 i Cistanche deserticola. Glukoshalten i det neutrala sockret CLP1 i Cistanche deserticola är så hög som 88,62 procent, glukoshalten i det sura sockret CLP2 i Cistanche deserticola är endast 9,99 procent, och halten galaktosaldehydsyra, galaktos och ramnos i det sura sockret CLP2 i Cistanche deserticola är alla mer än 5 procent.
4 Antioxidantaktivitetsanalys av Cistanche deserticola polysackarid
Under antioxidantexperimentanalysen av Cistanche deserticola deserticola polysackarid, bereddes Cistanche deserticola deserticola polysackarid till Cistanche deserticola deserticola polysackaridlösning med koncentrationen av {{0}}, 0.25, 0 .5, 1.0, 2.0, 4,0 mg/ml och DPPH-hastigheten för fria radikaler och lösningens totala antioxidantkapacitet mättes. Under bestämningen av DPPH-fångningshastigheten för fria radikaler för Cistanche deserticola deserticola-polysackaridlösning, tillsätt 2 × Totalt 2mL 10-4mol/L DPPH blandades jämnt och placerades i mörka förhållanden i 15 minuter. Lösningen centrifugerades vid en centrifugeringshastighet av 4000 r/min och en centrifugeringstid på 15 minuter. Använd en spektrofotometer för att mäta absorbansvärdet för lösningen vid 517 nm våg, från vilken DPPH-radikalupptagningshastigheten för Cistanche deserticola deserticola polysackaridlösning kan erhållas, som visas i tabell 5.
Tabell 5 DPPH-radikalupptagningshastighet för Cistanche deserticola polysackaridlösning
Det kan ses från tabell 5 att renhållningshastigheten för rå polysackarid CLP från Cistanche deserticola och neutralt socker CLP1 från Cistanche deserticola på fria DPPH-radikaler är signifikant högre än den för surt socker CLP2 från Cistanche deserticola på fria DPPH-radikaler. När koncentrationen av lösningen är mindre än 2,0mg/ml, ökar DPPH-radikalupptagningshastigheten för rå polysackarid CLP av Cistanche deserticola deserticola och neutralt socker CLP1 av Cistanche deserticola deserticola gradvis med ökningen av koncentrationen, och blir äntligen stabil.
Under bestämningen av den totala antioxidantkapaciteten hos Cistanche deserticola deserticola polysackarid användes antioxidantkapacitetstestsatsen för snabb upptäckt. Ta Trolox standardlösning för detektion och späd den med destillerat vatten till {{0}}, 0.25, 0.5, 1.0, 2.{ {10}} respektive 4,0 mg/ml. Tillsätt peroxidasarbetslösning till detektionsbrunnsplattan, tillsätt sedan provet eller standarddetektionslösningen som ska testas och tillsätt slutligen arbetslösningen från snabbdetektionssatsen. Blanda väl och låt stå i 6 minuter. Den totala antioxidantkapaciteten för Cistanche deserticola polysackarid bestämdes av en mikroplattläsare vid våglängden 405nm och 734nm [14-15]. Se tabell 6 för testresultaten av det totala antioxidantprestationstestet för Cistanche deserticola deserticola polysackaridlösningen.
Tabell 6 Total antioxidantkapacitet för Cistanche deserticola polysackaridlösning
Det kan ses från tabell 6 att när koncentrationen av Cistanche deserticola-lösning är mindre än 4,0mg/ml, den totala antioxidantkapaciteten för rå polysackarid CLP från Cistanche deserticola, neutralt socker CLP1 av Cistanche deserticola och surt socker CLP2 av Cistanche deserticola ökar med ökningen av lösningskoncentrationen; Antioxidantkapaciteten för neutralt socker CLP1 från Cistanche deserticola deserticola är betydligt högre än för rå polysackarid CLP för Cistanche deserticola deserticola deserticola och surt socker CLP2 från Cistanche deserticola deserticola deserticola.
Cistanche te
5. Sammanfattning
Analysresultaten av Cistanche deserticola deserticola polysackarid genom högpresterande gelpermeationskromatografi visade att molekylvikten för polysackariden som fanns i den inte var mer än 10 000 Da, och den innehöll flera elueringstoppar. Cistanche deserticola deserticola polysackarid hade vissa antioxidantegenskaper. Resultaten av denna studie lägger en grund för vidareutveckling och användning av Cistanche deserticola.
Referenser:
[1] Bi Cuicui, Liu Yinlu, Wei Fenfen, et al. Forskningsframsteg om de viktigaste kemiska beståndsdelarna och biologiska aktiviteterna hos Cistanche deserticola [J]. Drug Evaluation Research, 2019, 42 (9): 1896-1900
[2] Dong Yuwei, Miao Jingzhi, Li Yong. Optimering av dubbelenzymextraktionsprocess för vitlökspolysackarider och det är in vitro antioxidantaktivitet ［ J ］. Chinese Seasonings, 2020, 45 (10): 30-35, 48
[3] Yang Ting, Eladan McIntyre, Tao Yichun, et al. Bestämning av polysackaridinnehåll och antioxidantaktivitet hos Cistanche tubulosa-smuts ［ J ］. Journal of Xinjiang Medical University, 2019, 42 (2): 234-236241
[4] Liu Lisa, Zhang Qing, You Lin, et al. Studie av lösningsmedelsextraktionstekniken för fenetylalkoholglykosider från Cistanche tubulosa [J]. Food Science and Technology, 2019, 44 (4): 225-229
[5] Liu Yaowei, Su Zihao. Studie av flashextraktionsprocessen av echinacea och Verbascum thapsus-glykosider i Cistanche deserticola ［ J］. Medicinsk kost och hälsa, 2020, 18 (23): 27-28
[6] Tian Wenjing, Zhou Xuan, Huang Qunhui, et al. Effekt av ultraljudsbehandling på reologiska egenskaper hos Cistanche deserticola deserticola polysackarid ［ J］. Bulletin of Biology, 2021, 56 (2): 48-53
[7] Feng Jie, Guo Yehong, Zhu Wenjuan, et al. Effekter av olika värdar, livsmiljöer och skördedatum på innehållet av aktiva ingredienser i Cistanche deserticola ［ J ］. Kinesiska vilda växtresurser, 2021, 40 (5): 18-23
[8] Lv Mingshuai, Zhao Bo, Sun Wenyu, et al. Studie om de fysikalisk-kemiska egenskaperna och antioxidantaktiviteten hos selenrik Auricularia auricula-domare polysackarid ［ J］. Chinese Flavoring, 2021, 46 (6): 54-59
[9] Chen Yuebai. Screeningen av Lentinan-extraktionsprocessen och analysen av den aktuella statusen för forskning om dess hälsoeffekter [J]. Chinese Flavoring, 2021, 46 (8): 189-191
[10] Guo Qiaoli, Wu Zhibo, Zhou Yubi, et al. Sammansättningsanalys och antioxidantaktivitet av polysackarider från Cistanche deserticola i Lanzhou ［ J ］. Food Industry Science and Technology, 2021, 42 (15): 96-103
[11] Cao Libo, Gong Xingcheng, Jia Jinru, et al. Snabb kvalitativ analys av kemiska beståndsdelar i Cistanche-salsa genom direktinjicering av flerstegs masspektrometri fullskanningsmetod ［ J］. Chinese Journal of Traditional Chinese Medicine, 2021, 46 (16): 4150-4156
[12] Hu Dongbao, Du Wei, Yang Meng. Optimering av extraktionsprocessen och antioxidantaktiviteten för polysackarid från Macrocybe gigantea genom responsytmetodik ［ J］. Chinese Condiments, 2021, 46 (10): 78-82
[13] Xu Sheng, Chai Shasha. Den snabba detektionsmetoden för de viktigaste aktiva substanserna i Cistanche deserticola [J]. Journal of Wuhan Vocational and Technical College, 2021, 20 (4): 116-120
[14] Zhang Hongchi, Liu Rui, Jiao Lele, et al. Optimering av utvinningsprocessen av Lentinan baserat på den kvadratiska regressionsrotationsmetoden ［ J ］. Chinese Flavoring, 2021,46 (11): 88-93
[15] Song Qingqing, Zhang Ke, Li Ting, et al. Samtidig bestämning av multikomponentinnehållet i Cistanche deserticola genom omvänd fas hydrofil interaktionskromatografi anpassad multireaktionsövervakningsmetod [J]. Analytisk kemi, 2020, 48 (11): 1573-1593
