Synergistisk anti-hudpigmenteringseffekt av cistanche fenyletanoidglykosider och glabridin
Jan 14, 2025
Abstrakt för att undersöka synergistikenEffekt av cistanchephenyl ethanol side (PhGs) and glabridin (Gla) against skin pigmentation, the mass ratio of PhGs and Gla was screened by in vitro tyrosinase inhibition experiment, 1,1-diphenyl-2-trinitrophenylhydrazine (DPPH) and 2,2-diazo-bis(3-ethyl-benzothiazole-6-sulfonic acid diammonium cation (ABTS+) free radical scavenging experiments. The UVB-induced hypopigmentation model of B16F10 was established, and the inhibition of melanin production was evaluated using tyrosinase activity and melanin content as Index.
DeinflammatoriskModellen av Hacat-celler inducerade av lipopolysackarid (LPS) fastställdes, och den antiinflammatoriska effekten av läkemedlet utvärderades genom att hämma frisättningen av interleukin -6 (IL -6) och tumörnekrosfaktor- (TNF-). Den oxidativa stressmodellen för Hacat -celler inducerade av azodiisobuamidinhydroklorid (AAPH) fastställdes vidare, och den förbättrade aktiviteten av superoxiddismutas (SOD) och katalas (CAT) användes som index för att utvärdera antioxidanteffekten av läkemedlet. Det optimala massförhållandet för PHG och GLA bestämdes av ovanstående tre cellmodeller. Resultaten visade att vattenhaltiga lösningar av PHGS/GLA (1∶1), PHGS/GLA (5∶1) och PHGS/GLA (10∶1) framställda med M (PHGS) ∶m (GLA) =1 ∶1, 5∶1, 10∶1 uppvisade goda hämmande och synegistiska effekter på tyrosinsin och aktivitet. Hämningshastigheterna för PHGS/GLA (1∶1),
PHGS/GLA (5∶1) och PHGS/GLA (1 0 ∶1) Vattenlösningar med en masskoncentration av 0,4 g/L var 94,37%, 92,93%respektive 88,06%. De rensningshastigheterna för DPPH -fria radikaler var 89,44%, 88,72,%respektive 88,10%.
De rensningshastigheterna för ABTS+ fria radikaler var 1 0 0,13%, 100,0,1%respektive 99,87%. När masskoncentrationen av PHGS/GLA var 25 ug/ml, PHGS/GLA (1∶1) visade PHGS/GLA (5∶1) och PHGS/GLA (10∶1) vattenhaltiga lösningar ingen cytotoxicitet för B16F10 och Hacat -celler. Hämningen av tyrosinasaktivitet i PHGS/GLA (1 ∶1) vattenlösning var starkare (tyrosinasaktivitet 23,80%), och melanininnehållet (30,90%) minskade signifikant. PHGS/GLA (1∶1) Vattenlösning visade den bästa hämningseffekten på il -6 och TNF-frisättning, och förmågan att förbättra aktiviteten hos SOD och CAT. Kombinationen av PHGS och GLA visade god synergistisk prestanda, överlägsen A till enstaka läkemedel och högre än PHGS/ GLA (5∶1) och PHGS/ GLA (10∶1) vattenlösning. Kombinationen av PHG och GLA spelade en synergistisk roll för att förbättra hudpigmenteringen genom att hämma melaninproduktion och antiinflammatoriska och antioxidanteffekter.
Nyckelord cistanche fenyletanoid glykosider; glabridin; synergistiska effekter; anti-hudpigmentering; anti-oxidation; antiinflammatorisk; läkemedelsmaterial
Cistanche fenyletanolsida för blekning
Stödjande tjänst för Wecistanche den största cistanche-exportören i Kina:
E -post: wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/tel: +86 15292862950
För mer information om potentiella rabatter, tveka inte att kontakta vårt kundtjänst. De hjälper dig gärna!
Hudpigmentering är en hudsjukdom orsakad av faktorer som skada, hudinflammation och ultraviolett strålning [1-2]. Dessa faktorer kan leda till en onormal ökning av melanin, vilket i sin tur orsakar problem som kloasma, fräknar och postinflammatorisk hyperpigmentering (PIH) [3-4], vilket påverkar människors mentala tillstånd och livskvalitet. För närvarande fokuserar behandlingen av hudpigmentering huvudsakligen på att hämma tyrosinas, ett viktigt enzym i bildningen av melanin [5-6].
Den senaste forskningen [7-8] visar att hudpigmentering beror på den nära kopplingen mellan keratinocyter och melanocyter i epidermis. När de fria radikalerna och inflammatoriska faktorer som släppts av keratinocyter kommer i kontakt med melanocyter, kommer de att inducera en ökning av tyrosinasaktivitet, vilket leder till en ökning av melanininnehållet. De kommer också att påskynda melanintransport och få melanin att avsätta på hudens yta. Därför kräver behandling av hudpigmentering en mängd olika mått såsom att hämma melaninproduktion, antiinflammatorisk och antioxidation.
För närvarande, även om traditionella läkemedelspreparat, såsom hydrokinon och hydrokinon, har vissa effekter vid behandlingen av hudpigmentering, är deras verkningsmetoder relativt enstaka och kan ge biverkningar [9-10]. Som jämförelse är naturliga läkemedel naturliga och milda i kraft och erkänns alltmer och berömda av konsumenterna [11-12]. I synnerhet kan kombinationen av flera växtextrakt [13-14] inte bara hämma produktionen av melanin utan har också flera effekter såsom antiinflammatoriska och antioxidanteffekter, vilket ger nya idéer och metoder för behandling av hudpigmentering.
Cistanche Deserticola Ma har unikt medicinskt värde och är känt som "Desert Ginseng". Studier har funnit att den karakteristiska ingrediensen fenyletanoidglykosid som finns i cistanche har god antioxidantaktivitet [15] och antiinflammatoriska effekter [16], och har också en viss tyrosinasinhiberande effekt [17]. Glycyrrhizin är en flavonoidkomponent i Glycyrrhiza glabra L., som har en kraftfull blekningseffekt och kallas "blekande guld" [18]. Traditionell kinesisk medicinbehandling av hudpigmentering startar vanligtvis fbystenbrering av mjälten och njuren, rensar bort värme och avgiftande och fyller på Qi och blod [19].
Fenyletanoliska glykosider i Cistanche Deserticola kan fylla på njurens yang och gynna essens och blod, medan Glycyrrhiza glabra kan fylla på mjälten och Qi, rensa bort värme och avgifta. De två kan arbeta tillsammans för att motstå pigmentering. Kombinationen av fenyletanoidc -glykosider i cistanche deserticola och glabridin kan motstå hudpigmentering från flera dimensioner och mål, skydda mot ultravioletta strålar i hela bandet, synergistiskt hämmande tyrinasaktivitet och minska melaninproduktionen och kan också minska fria radikaler och inflammare, minska hudinflammet. Det finns emellertid få rapporter i litteraturen om den synergistiska hämningen av hudpigmentering av fenyletanoidglykosider i Cistanche Deserticola och Glabridin.
Detta dokument avser att undersöka om det finns en synergistisk effekt mellan pfenyletanoidglykosider av cistanche deserticola (PHG) och glabridin (GLA) genom in vitro -biokemiska experiment och etablering av 3 cellmodeller, ND erhåller den optimala förenade massförhållandet för en synergistisk effekt. Det förväntas ge teoretiskt stöd och praktisk vägledning för utvecklingen av naturliga växthudvårdsprodukter och hjälpa till att främja hudvårdsindustrin att utvecklas i en mer naturlig, hälsosam och effektiv riktning.
Var: En reaktion är absorbansen av provlösning, L-tyrosinlösning, PBS och tyrosinaslösning; En reaktionskontroll är absorbansen av provlösning, L-tyrosinlösning, N- och PBS-lösning; En tom är absorbansen av L-tyrosinlösning, PBS-lösning och tyrosinaslösning; En tom kontroll är absorbansen av L-tyrosin- och PBS-lösningar.
'
1.3.2 Bestämning av DPPH Free Radical Scavenging -förmåga
First, accurately weigh {{0}}.0197 g (0.05 mmol) of DPPH and dissolve it in 250 mL of anhydrous ethanol to prepare a DPPH working solution with a concentration of 0.2 mmol/l. Sedan framställdes PHGS och GLA i PHGS -etanollösning och GLA -etanollösning med masskoncentrationer av 0. 0 01, 0,01, 0,1, 0,4, 0,8, 1,2, 1,6, 2,0 mg/ml med 50% etanol efter volym, och VC -etanol var beredd i samma sätt. Then, PhGs ethanol solution and Gla ethanol solution were mixed evenly at m(PhGs solution) ∶ m(Gla solution)=40∶1, 20∶1, 10∶1, 5∶1, 1∶1, 1∶5, 1∶10, 1∶20, 1∶40 to obtain 9 kinds of PhGs/Gla ethanol solutions with different mass ratios, which were recorded as PhGs/Gla (40∶1) ~ PHGS/GLA (1∶40) Etanollösningar. Slutligen, tillsätt 100 ul olika provlösningar och 100 ul DPPH -arbetslösning till 96- brunnplattan, blanda väl och håll dig borta från ljus vid rumstemperatur i 30 minuter. Mät absorbansen vid 517 nm med en enzymmarkör. VC användes som den positiva kontrollen och varje experiment upprepades tre gånger. Beräkna DPPH -fria radikala rensningshastighet (%) enligt formel (2).
DPPH Free Radical Scavenging Rate/%=(1 −𝐴1 - 𝐴3𝐴2) × 100 (2) där: A1 är absorbansen av provlösning + DPPH -arbetslösning; A2 är absorbansen av 50% etanol efter volym + DPPH -arbetslösning; A3 är absorbansen av provlösning + 50% etanol i volym.
1.3.3 Bestämning av ABTS+ Fri radikal rensningsförmåga
Först väga 1 g (1,82 mmol) ABT och lösa upp det i avjoniserat vatten för att framställa en ABTS -arbetslösning med en slutlig koncentration av 7,4 mmol/L; Väg 0. 5 g kaliumpersulfat och löser upp det i avjoniserat vatten för att framställa en kaliumpersulfatarbetslösning med en slutlig koncentration av 2,6 mmol/L; Blanda ABTS -arbetslösningen och kaliumpersulfatarbetslösningen i lika stora volymer och reagera i 12 timmar i mörkret för att framställa ABTS+ arbetslösningen. Sedan, enligt metoden i avsnitt 1.3.2, förbered PHGS -etanollösning, GLA -etanollösning, N- och VC -etanollösning samt PHGS/GLA (40∶1) ~ PHGS/GLA (1∶40) etanollösning.
Slutligen, tillsätt 40 ul olika provlösningar och 160 ul ABTS+ arbetslösning till 96- brunnplattan, blanda väl, reagera vid rumstemperatur i mörkret i 6 minuter och mät absorbansen för lösningen vid 734 nm med en ELISA -läsare. Beräkna ABTS+ Free Radical Scavenging Rate (%) enligt formel (3).
Var: A1 är absorbansen av provlösning + ABTS + arbetslösning; A2 är absorbansen av avjoniserat vatten + ABTS + arbetslösning; A3 är absorbansen av provlösning + avjoniserat vatten.
1.4 Cellexperiment
1.4.1 Cellkultur
Efter att B16F10- och HACAT-celler återupplivas, inokuleras de till DMEM-hög-glukosmedium (innehållande en blandning av 10% fetalt bovint serum och 1% penicillin-streptomycin med en massfraktion) och odlas i en inkubator vid 37 grader, 5% CO2 volymfraktion och 70% fuktighet för 24 timmar. Celltillväxtstatusen observeras under ett mikroskop, och mediet ersätts eller subkultureras enligt celltillväxtstatusen.
1.4.2 Experimentell gruppering
B16F10- och HACAT -celler i den logaritmiska tillväxtfasen ympas i 96- brunnsplattor med lämpliga cellantal och odlas under 24 timmar för att låta cellerna hålla fast vid väggen. Provlösningar av olika masskoncentrationer framställs med användning av ett DMEM -odlingsmedium. The normal group, model group, low-dose PhGs (125 ug/mL) group, medium-dose PhGs (250 ug/mL) group, high-dose PhGs (500 ug/mL) group, low-dose Gla (6.25 ug/mL) group, medium-dose Gla (12.5 ug/mL) group, high-dose Gla (25 ug/mL) group, and PhGs/Gla (1∶1) Grupp, PHGS/GLA (5∶1) -grupp och PHGS/GLA (10∶1) -kulturmedelsgrupp inrättades.
I den UVB-inducerade B16F10-pigmenteringsmodellen tillsattes modellgruppcellerna med 30 ul PBS (pH =7. 4) och placerades 3 cm direkt under UVB-bestrålaren under 110 s; Den experimentella gruppen förbehandlades med 100 ul provlösningar med olika masskoncentrationer under 1 timme, tillsattes sedan med 30 ul PBS och placerades 3 cm direkt under UVB -bestrålaren under 110 s; Den normala gruppen använde alltid DMEM-odlingsmedium med hög glukos; Den tomma gruppen ympades inte med celler, utan med en lika stor mängd odlingsmedium.
I den LPS-inducerade HACAT-cellinflammationsmodellen odlades modellgruppen med PBS-lösning av LPS i en koncentration av 20 ug/ml under 24 timmar; Den experimentella gruppen förbehandlades med 100 ul provlösningar med olika masskoncentrationer under 24 timmar och tillsattes sedan med 20 ug/ml LPS -lösning under 24 timmar; Den normala gruppen använde alltid DMEM-medium med hög glukos; Den tomma gruppen ympades inte med celler, utan med en lika stor mängd odlingsmedium.
I den AAPH-inducerade HACAT-celloxidativa stressmodellen odlades modellgruppen med 100 ml AAPH (2,5 mmol) lösning i en koncentration av 25 mmol/l 24 timmar; Den experimentella gruppen förbehandlades med 100 ul provlösningar med olika masskoncentrationer under 24 timmar och tillsattes sedan med AAPH -lösning i en koncentration av 25 mmol/L under 24 timmar; Den normala gruppen använde alltid DMEM-medium med hög glukos; Den tomma gruppen ympades inte med celler, utan med en lika stor mängd odlingsmedium.
Varje grupp inrättades med 3 replikatbrunnar och odlades i en inkubator vid 37 grader, 5% CO2 -volymfraktion och 70% fuktighet.
1.4.3 Cytotoxicitetsanalys
CCK8 -metoden användes för att bestämma cytotoxicitet. B16F1 0 och HACAT -celler i den logaritmiska tillväxtfasen digererades med 0,25% trypsin under 3 minuter. Efter att matsmältningen avslutades blåste odlingsmediet upprepade gånger för att göra en cellsuspension med en densitet av 1 × 104 celler/ml. Cellerna ympades jämnt i en 96- brunnplatta, 100 ul per brunn, och PBS lades till brunnarna runt cellerna. Efter att cellerna vidhäftade väggen tillsattes olika masskoncentrationer av provlösning, 3 replikerade brunnar per grupp och odlades i en inkubator vid 37 grader, 5% CO2 -volymfraktion och 70% fuktighet för 24, 48 och 72 timmar, och sedan kasserades lösningen. Alla grupper tillsattes med 100 ul komplett odlingsmedium innehållande 10% CCK8 -volymfraktion och inkuberades under 60 minuter. Absorbansen av lösningen vid 450 nm mättes med användning av en ELISA -läsare. Cellviabilitet (%) beräknades enligt formel (4).
Var: En experimentell grupp är absorbansen av brunnarna som innehåller celler och provlösning under UVB -bestrålning; En normal grupp är absorbansen för brunnarna som innehåller celler och provlösning utan UVB -bestrålning; En tom grupp är absorbansen för brunnarna som innehåller odlingsmedium men inga celler.
1.4.5 Bestämning av melanininnehåll
Melanininnehållet bestämdes av NaOH -lysmetoden. Efter behandling av cellerna i 72 timmar enligt metoden i avsnitt 1.4.2 kasserades supernatanten och tvättades två gånger med PBS, och 100 ul NaOH -vattenlösning innehållande 10% DMSO efter volym (koncentration av 1 mol/L) tillsattes. Efter att ha placerats i en 90 graders ugn i 1 timme bestämdes absorbansen av lösningen vid 490 nm av en enzymmarkör. Experimentet upprepades tre gånger. Melanininnehållet (%) beräknades enligt formel (5).
1.5 Bestämning av inflammatoriskt faktorinnehåll och oxidativ stressindex
Efter behandling av cellerna i 48 timmar enligt metoden i avsnitt 1.4.2 samlades HACAT -cellerna i varje grupp med en cellskrapa, centrifugerades och supernatanten uppsamlades. Innehållet i IL -6 och TNF- bestämdes enligt instruktionerna från ELISA-satsen.
Efter behandling av cellerna i 48 timmar enligt metoden i avsnitt 1.4.2 samlades HACAT -cellerna i varje grupp med en cellskrapa, och cellerna bröts genom upprepad frysning och tining. Cellerna centrifugerades vid 12000 r/min vid 4 grader under 10 minuter och supernatanten uppsamlades. SOD -aktiviteten och kattinnehållet bestämdes enligt instruktionerna från ELISA -satsen.
1.6 Bestämning av det kombinerade indexet
Metoden Combined Index (CI) [20] användes för att bestämma om PHG: er och GLA i olika massförhållanden hade en synergistisk effekt för att hämma tyrosinasaktivitet och antioxidation. Kombinationsindexet beräknades enligt formel (6):
Wherein: D1 and D2 are the mass concentrations (mg/mL) of the two drugs when the activity reaches x% in the combined treatment; DX is the mass concentration (mg/mL) required for the activity to reach x% when the two substances are used alone. Compusyn software was used for calculation. CI>1 indikerar en antagonistisk effekt, CI =1 indikerar en tillsatseffekt och CI<1 indicates a synergistic effect.
1.7 Dataanalys
All data uttrycks som "aritmetiskt medelvärde ± standardavvikelse (𝑥̅ ± 𝑠)". Graf Prism 9.5. 0 Programvaran användes för statistisk analys. Envägsanalys av varians användes för jämförelse mellan flera grupper. P<0.05 was considered statistically significant.
