Detektionsmetoderna för cirkulerande exosomal PD-L1

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Det finns fortfarande en brist på accepterade och vanliga metoder för detektering av cirkulerande exosomal PD-L1. Traditionella exosomdetektionsmetoder som enzymkopplad immunosorbentanalys (ELISA) och flödesanalys kan användas för att detektera PD-L1 i cirkulerande exosomer, och ELISA är för närvarande den mest använda metoden. ELISA-metoden kan kvantitativt detektera innehållet av PD-L1 i cirkulerande exosomer och är lätt att använda. Flödescytometri kan användas för att kvantitativt detektera cirkulerande exosomal PD-L1 i stora prover, men det kräver hög detektionsutrustning. Med den djupgående forskningen om exosomer berikas och utvecklas även detektionsmetoderna för exosomala proteiner och nukleinsyror, och några nya metoder har introducerats inom området för PD-L1-detektion i cirkulerande exosomer (Figur).

Detektering avcirkulerandeexosomalPD-L1

1. Digital PCR

På grund av den lilla mängden nukleinsyra som finns i exosomer är det svårt för konventionella detektionsmetoder att noggrant detektera deras genkopietal. Digital PCR-teknik är en nukleinsyradetektionsmetod med extremt hög känslighet och absolut kvantifiering. Dess känslighet kan nå nivån av en enda nukleinsyramolekyl, så den har fördelar när det gäller att detektera nukleinsyrainnehållet i exosomer. Forskarna använde digital PCR-teknik för att noggrant kvantitativt analysera PD-L1-mRNA-kopiantalet i plasmaexosomer hos patienter med melanom och icke-småcellig lungcancer och avslöjade sambandet mellan det exosomala PD-L1-mRNA-kopiantalet i plasma och anti-PD1-korrelationen mellan behandlingseffekter. Införandet av digital PCR-teknologi har avsevärt förbättrat detektionsförmågan hos exosomal PD-L1 mRNA, vilket är av stor betydelse för forskningen av exosomal PD-L1. Det kan dock finnas inkonsekvenser mellan innehållet av exosomalt PD-L1-mRNA och uttrycket av PD-L1-protein. Därför kan detektionen av enbart exosomal PD-L1-mRNA ha vissa defekter, som behöver ytterligare forskning och förtydligande.

Anti-cancer öken cistanche drar nytta av cistanche extrakt

2. ELISA

ELISA är en traditionell immunologisk analysmetod, som ofta används för att detektera små molekylära proteiner i plasma eller odlingsmedium. Den har hög känslighet och kan analyseras kvantitativt. ELISA kan också användas för att detektera exosomalt PD-L1-protein och kan uppnå kvantitativ detektion av stora partier av prover. PD-L1-proteindetektionskit baserat på principen om ELISA-metoden har även använts för kvantitativ detektion av exosomalt PD-L1-protein i plasma. Chen et al. konstruerade ett exosomalt PD-L1-proteindetektionssystem baserat på ELISA-principen, som användes för att detektera exosomalt PD-L1-protein härrörande från cellodlingsmedium eller plasma. Det linjära detekteringsintervallet var {{10}}.2-12.0 ng/mL. ELISA är en bra metod för att detektera exosomalt PD-L1-protein, som är lätt att kvantitativt upptäcka och har god repeterbarhet. Men på grund av närvaron av fritt PD-L1-protein i plasma, kommer det att störa dess noggrannhet. Därför detekterar denna metod cirkulation. Känsligheten och specificiteten hos exosomalt PD-L1-protein behöver fortfarande undersökas ytterligare.

Herba cistanche rot: anti-cancer

3. Flödesanalysmetod

Flödescytometri används ofta för att typa och räkna celler eller andra biologiska partiklar suspenderade i vätska, så denna metod har också introducerats i exosomdetektion och räkning. THEODORAKIS et al. först använde kromatografi för att initialt separera exosomer i plasma från huvud- och halscancerpatienter och använde sedan flödesanalys för att detektera och räkna PD-L1-positiva exosomer. PD-L1-proteinuttrycket uttrycktes som fluorescensintensitet. Resultaten visar att metoden har god reproducerbarhet vid detektering av exosomalt PD-L1-protein, och dess intra-individuella variation är 7 procent när flera parallella analyser utförs på ett enda patientprov. Samtidigt, för att verifiera metodens noggrannhet, använde forskarna konfokal fluorescensanalys som referensmetod för detektion av det exosomala PD-L1-proteinet. Tre prover testades parallellt, och resultaten jämfördes, och det visade sig att resultaten av flödescytometri och konfokal fluorescensanalys var mycket konsekventa, vilket indikerar att flödescytometri var en korrekt metod för kvantitativ analys av exosomal PD-L1. Dessutom har LUX et al. detekterade också framgångsrikt uttrycket av exosomala PD-L1- och c-Met-proteiner i serumet hos patienter med pankreascancer genom flödescytometri, men prestandan för detektionsmetoden måste studeras ytterligare. För närvarande har även flödesanalysatorer som är speciellt använda för exosomdetektion lanserats, såsom Apogee ultrasensitive nano-flow analysator, som är mer lämpad för exosomproteindetektion än traditionella flödesanalysatorer.

Fördelarna med cistanche tubulosa extrakttillskott: antitumör och cancer

4. Ytförbättrad Raman-spridningsteknik

Ytförstärkt Raman-spridning (SERS) är en mycket känslig fingeravtrycksspektroskopiteknik som har använts flitigt inom biomedicinska områden. För närvarande har forskare använt SERS-teknik för att detektera exosomalt PD-L1-protein. Forskarna använde först TiO2-modifierade magnetiska pärlor för att ospecifikt adsorbera exosomer i plasma och använde sedan SERS-sonder kopplade till PD-L1-antikroppar för att modifiera guldnanopartiklar och inkubera sedan exosomproverna med guldnanopartiklar. Den bildar en magnetisk pärla-exosom-guld nanopartikelkomplexstruktur och använder slutligen ett magnetfält för att berika och separera komplexet, och placeras sedan på en laserkonfokal Raman-spektrometer för detektion, för att realisera detektionen av PD-L1-positiva exosomer . Detektering av kroppsinnehåll. Denna metod har hög detektionskänslighet och dess lägsta detektionsgräns kan nå 1 PD-L1 plus exosom/μL plasma. Dessutom använde forskarna denna metod för att detektera en grupp prover med olika koncentrationer. Resultaten visade att SERS-intensiteten var linjärt relaterad till logaritmen för koncentrationen av exosomprover, vilket indikerar att detektionsmetoden har god stabilitet och kan användas direkt i plasma. Upptäck exosomer utan ett extra exosomisoleringssteg. För närvarande finns det få studier om den direkta tillämpningen av SERS-teknologi för detektion av exosomalt PD-L1-protein, men forskningen kring tillämpningen av SERS-teknologi för detektion av andra exosomer har utförts, vilket också har en viktig referens. för detektion av exosomalt PD-L1-proteinvärde.

Ökenlevande cistanche växande situation

5. HOLMES-ExoPD-L1-metod

HOLMES-ExoPD-L1-metoden är en ny detektionsmetod för det exosomala PD-L1-proteinet. I denna metod designades ett nytt MJ5C aptamer som riktar sig mot PD-L1-protein, som effektivt kan binda PD-L1-protein på exosommembranet och inte störs av PD-L1-proteinglykosylering. I denna metod saminkuberades den fluorescensmärkta MJ5C-aptameren och exosomer först i en tunn kapillär för att binda till varandra, och den infraröda lasern fokuserades in i den tunna kapillären för att bilda en temperaturgradient i mikronskala. Termoforeshastigheterna för de fria MJ5C-aptamer- och exosomala MJ5C-aptamerkomplexen var signifikant olika, och den termoforetiska utarmningen av den fria aptameren var snabbare än den för exosom-aptamerkomplexet. separerade ut. Därför, under verkan av excitationsljus, kan innehållet av exosomalt PD-L1-protein bestämmas genom att detektera fluorescensintensiteten hos fluorescensmärkta aptamerer. Metoden har hög känslighet och en detektionsgräns på 17,6 pg/mL. Dessutom har den också fördelarna med mindre provvolym och kort detektionstid. Det är en mycket originell metod för detektion av exosomalt PD-L1-protein, vilket är mycket viktigt för utvecklingen av nya. Den exosomala PD-L1-proteindetektionsmetoden har ett upplysande värde.

Antitumör: cistanche-tillägg

Exosomal PD-L1 har breda tillämpningsmöjligheter inom området för maligna tumörimmunterapi och har blivit en av hotspots inom området exosomforskning. Jämfört med detektion av vävnads-PD-L1-uttryck, är detektionen av cirkulerande exosomal PD-L1 lättare att få prover och utföra realtidsdetektering, samtidigt som man undviker problemet med vävnadsheterogenitet orsakad av patologisk provtagning; exosomal PD-L1 leder också till tumörimmunitet. Det är en viktig orsak till flykt och är relaterad till utvecklingen av maligna tumörer, och kan bli en viktig indikator för sjukdomsbedömning och prognosförutsägelse. Dessutom förväntas exosomala PD-L1-nivåer i plasma också användas för att screena patienter som är lämpliga för anti-PD-L1-immunterapi och förutsäga deras svar på behandlingen. Det finns dock fortfarande en brist på erkända och effektiva metoder för att detektera cirkulerande exosomer PD-L1. Det är nödvändigt att etablera en idealisk cirkulerande exosom med enkel eller ingen separation, mindre provbehov, hög känslighet, god repeterbarhet och mindre känsliga detektionssignaler. En metod för detektion av PD-L1 in vivo. Detektionsmetoden för cirkulerande exosomal PD-L1 behöver fortfarande mer djupgående forskning, men man tror att med utvecklingen och tillämpningen av nya detektionsmetoder i framtiden kommer cirkulerande exosomal PD-L1 att bättre kunna vägleda anti-PD1 immunterapi och användas vid diagnos och behandling av maligna tumörer. spelar en viktigare roll.