Skillnaden mellan kemiska komponenter och biologiska aktiviteter för råvarornas skivor och den vinångbehandlade produkten från Cistanche Deserticola

1. Introduktion

Cistanche deserticolaär en vanlig traditionell kinesisk medicin och har allmänt använts som tonic i Kina och Japan i många år, allmänt känd som "Desert ginseng."Cistanche deserticolaspelades först in som en toppklass i "Shennong's Herbal Classic of Materia Medica (Shen Nong Ben Cao Jing)" omkring 100 f.Kr. och användes för att behandla olika sjukdomar inklusive njurbrist, impotens, kvinnlig infertilitet, sjuklig leukorré, riklig metrorragi (vita) , kall känsla i länd och knän, och kronisk förstoppning hos äldre [1]. Hittills har flera huvudbeståndsdelar isolerats, såsom polysackarider [2, 3], fenyletanoidglykosider (PhGs) [1, 4], iridoider [1] och ligander [1, 5]. Bland dem,PhGs och polysackariderär de huvudsakliga biologiskt aktiva komponenterna iCistanche deserticola[6–9]. Moderna farmakologiska experiment har bevisat detCistanche Cistanchedeserticolakan öka produktionen av testosteron och skydda spermier, stimulera cellproliferation och förbättra cellöverlevnad, uppvisa markerade aktiviteter för sexuell styrka, förbättra minnet, anti-aging, fria radikaler och neuroprotection [10–13].

NATURLIG CISTANCHE TUBULOSA TRADITIONELLA KINESISKA ÖRTER PHGS75% ECH 30% ACT 12%

För att minska toxiciteten och/eller förstärka effekterna, bör de flesta av de traditionella kinesiska örterna bearbetas före recept. de traditionella processtegen inkluderar rengöring, vattenprocess (malning i vatten, ångning och rostning) och fri process (omrörning med vin, vinäger, salt eller honung) [14]. Under processen kan de kemiska komponenterna ändras: det relativa innehållet av vissa komponenter kan ändras eller nya komponenter kan bildas [15]. Processen med Cistanche deserticola har en lång historia och Cistanche deserticola bör bearbetas genom blötläggning i risvin och ångning som beskrivs i Chinese Pharmacopeia (2015-utgåvan) [16]. SPW har visat sig påverka deras effekter på njurmeridianer enligt teorin om traditionell kinesisk medicin (TCM) [17]. WSCD dokumenteras först i "Lei Gongs avhandling om förberedelse och kokning av Materia Medica (Lei Gong Pao Zhi Lun)" i de norra och södra dynastierna i Kina. WSCD används bättre för att behandla njurbrister och skydda sperma som registrerats i "Taiping Shenghui Fang" i Songdynastin i Kina. Det har dock inte gjorts några jämförande studier på de kemiska komponenterna mellan RCD och WSCD hittills.

Moderna farmakologiska undersökningar har indikerat att WSCD kunde tonifiera njuren för att säkra essens genom att stimulera hypotalamus-hypofys-gonadaxeln i varierande grad och används för behandling av brist i njuren såsom brist på njure-yang [18]. Men hittills har skillnaderna i biologiska aktiviteter mellan RCD och WSCD inte undersökts. Nyligen, för att underlätta den experimentella forskningen, har djurmodellen med njure-yang-brist duplicerats genom att injicera råttor med en hög dos hydrokortison, där råttor kommer att visa symtom som mycket liknar de som beskrivs i njure-yang-brist på TCM [19, 20] . Råttor med njur-yang-brist har alltid vissa symtom som viktminskning, minskad matkonsumtion, svaghet, ökat vattenintag och minskad aktivitet. Baserat på denna djurmodell upptäcktes skillnaderna i närande-njureffekter mellan RCD och WSCD och avslöjade till och med den vetenskapliga essensen av den traditionella kinesiska processen.

2. Material och metoder

2.1. Material och kemikalier

Standardämnena som t.exacteosid, isoacteosid, echinacosid, cistanosid A och 2- acetylacteosidköptes från Shanghai Yuanye Biotechnology Co. Ltd (Shanghai, Kina). Cistanoside F, cistanosid C, osmanthusid B och tubulosid B köptes från Chengdu Pfeide Biotechnology Co. Ltd (Chengdu, Kina). Renheten för alla standarder var inte mindre än 98%. Metanol och acetonitril av HPLC-kvalitet köptes från Aladdin Chemistry Inc. (Shanghai, Kina). Avjoniserat vatten erhölls med ett MilliQ50 SP Reagent Water System (Bedford, MA, USA) för att bereda prover och mobila lösningar. Alla andra organiska lösningsmedel som användes i denna studie var av analytisk kvalitet och köptes från Shanghai Chemical Co. Ltd (Shanghai, Kina).

2.2. Samling av prover

Alla råa Cistanche deserticola (7 omgångar av prover) samlades in av Inner Mongolia Medical University från Inner Mongolia och Ningxia provinserna. Alla identifierades som cistanche deserticola YC Ma av Xiaoqin Wang, professor i farmakognosiavdelningen vid Inner Mongolia Medical University. Ett kupongexemplar deponerades vid School of Pharmacy, Inner Mongolia Medical University. efter insamling togs blomställningarna av Cistanche deserticola bort, stjälkarna skivades och torkades i rumstemperatur med luft, och sedan delades skivorna slumpmässigt upp i två grupper i varje sats: en är RCD och den andra användes för framställning av WSCD .

WSCD:n bereddes i labbet enligt kinesisk farmakopé (2015 års utgåva) [16], vilket innebär att de skivade RCD:n blötlades i risvin med en stängd behållare i 6 timmar tills de var mjuka, ångades i vattenbad i ytterligare 12 timmar tills ytan blir svart och torkas i rumstemperatur med luft.

2.3. Principal Component Analysis (PCA)

Principal component analysis (PCA) är en sofistikerad teknik som ofta används för att reducera dimensionerna av multivariata problem. Det minskar dimensionaliteten hos den ursprungliga datamängden genom att förklara korrelationen mellan ett stort antal variabler i termer av ett mindre antal underliggande faktorer utan betydande förlust av information. I denna studie utfördes skillnaderna mellan RCD och WSCD av oövervakad PCA med hjälp av SIMCA 13.0-programvaran baserad på de relativa toppareorna i HPLC-kromatografin. Med hjälp av PCA fann man de viktigaste kemikaliernas inverkan på klassificeringen bland olika prover.

2.4. Provberedning

2.4.1. Extraktberedning för djur

RCD och WSCD valdes från proverna som samlades in och preparerades enligt beskrivningen i avsnitt 2.2.

Lufttorkade och skivade RCD pulveriserades med en pulveriserare (FW135, Tianjin Taisite Instrument Co., Ltd.), vägde noggrant 1,0 kg och blötlades i 50 % etanol i 30 minuter, och växtförhållandena /etanol som användes var 1/10 (vikt/vikt). Och sedan extraherades den under återflöde två gånger under 1 timme varje gång. de två extrakten kombinerades och filtrerades och etanolen utvanns under reducerat tryck vid 60°C. te Det totala råextraktet av PhGs torkades i vakuum vid 60°C och renades med makroporöst harts. Slutligen erhölls PhG-extraktet av RCD och vägdes noggrant.

PhG-extraktet av WSCD erhölls enligt samma procedur ovan.

sedimenten från att extrahera PhGs lufttorkades och avkokades två gånger i 1,5 h varje gång med 20 gånger vatten. De två extrakten kombinerades och centrifugerades vid 4000 rpm under 10 min, och supernatanten koncentrerades och fälldes ut med 95 % etanol. efter centrifugering torkades fällningen i vakuum vid 60°C. SlutligenpolysackaridextraktRCD erhölls och vägdes noggrant.

Polysackaridextraktet av WSCD erhölls enligt samma procedur ovan.

PhG och polysackaridextrakten av RCD och WSCD var blandade suspensioner i vatten, respektive när råttorna behandlades oralt.

2.4.2. Provberedning för bestämning av PhG

PhGs-extrakten i avsnitt 2.4.1 vägdes noggrant vid 0,15 g och extraherades genom ultraljudbehandling med 50mL 50% vattenhaltig metanollösning under 40 minuter. Efter kylning fylldes viktförlusten på med 50 % metanol. Alla prover och lösningsmedel filtrerades genom ett 0,45 µm membran före analys. Innehållet av fyra PhGs i RCD och WSCD bestämdes med hjälp av HPLC, och det totala PhGs bestämdes med UV-spektrofotometri.

2.4.3. Provberedning för bestämning av polysackarid

Polysackaridextrakten i avsnitt 2.4.1 vägdes noggrant som 0.10 g och extraherades genom ultraljudsbehandling med 50 ml varmt vatten under 40 minuter; efter kylning fylldes viktminskningen på med vatten. Alla prover och lösningsmedel filtrerades genom ett 0,45 µm membran före analys.

2.5. Kromatografiskt tillstånd för HPLC och bestämning av de fyra PhG

Den kromatografiska separationen utfördes i ett UltiMate 3000 HPLC-system (Thermo Fisher Scientific, USA), utrustat med en dubbelgradientpump, ett kolonnfack och en DAD-detektor . Data samlades in och bearbetades med ett ChromeLeon Chromatography Data System. Proverna separerades på en Agilent Zorbax SB-C18 (250mm×4,6 mm, 5 µm) med en C18-skyddskolonn (4,6 mm×12,5 mm, 5 µm). Den mobila fasen bestod av acetonitril (A) och 0,1 % fosforsyralösning (B) med en flödeshastighet av 1 ml/min. Gradientelueringen är som följer: initial 0–13 min, linjär förändring från AB (5:95, v/v) till AB (15:85, v/v); 13–25 min, linjär förändring till AB (20:80, v/v); 25–43 min, linjär förändring till AB (25:75, v/v). Detektorns våglängd övervakades vid 330 nm. Kolonntemperaturen sattes till 30∘C och provvolymen som injicerades var 10µL [21]. Stamlösningen innehållande fyra referensstandarder framställdes genom att lösa upp referensstandarderna i 50 % metanol till en slutkoncentration av 0,20 mg/ml för 2-acetylakteosid, 0,20 mg/ml för akteosid, 0,05 mg/ml för osmanthusid B, och 0,10 mg/ml för isoakteosid. Lösningen späddes sedan till fem olika koncentrationer med tre replikat för att upprätta kalibreringskurvor. Provinnehållet uttrycktes i g/kg råvikt.

2.6. Bestämning av totalt PhG

De totala PhG-värdena bestämdes med hjälp av UV-spektrofotometrimetoden vid våglängden 330nm i en UV1000-spektrofotometer (Shanghai Tianmei Scientific Instrument Co., Ltd.). Stamlösningen framställdes genom att lösa echinakosidstandarder i 50 % metanol till en slutlig koncentration av 0,10 mg/ml och späddes sedan till fem olika koncentrationer med tre replikat för att upprätta kalibreringskurvor.

NATURLIG CISTANCHE TUBULOSA FÖR ATT FÖRBÄTTRA SEXUELL FUNKTION PHGS75% ECH 30% ACT 12%

2.7. Bestämning av polysackarider

Bestämningen avpolysackaridergenomfördes med användning av fenol-svavelsyrametoden. 1 ml av provlösningen placerades i ett 20 ml provrör med en glaspropp, och 1 ml 6% fenollösning och 5 ml koncentrerad svavelsyra tillsattes och skakades i 5 minuter. Blandningen överfördes till ett kokande vattenbad under 10 min och kyldes till rumstemperatur för ultraviolett detektion. Den ultravioletta absorptionen övervakades vid 480 nm i en UV1000 spektrofotometer. Referensstandarden för vattenfri D-glukos vägdes noggrant och löstes i destillerat vatten till en slutlig koncentration av 0,10 mg/ml. Därefter späddes lösningen till fem olika koncentrationer med tre replikat för att upprätta kalibreringskurvor.

2.8. Djurförsök

2.8.1. Djur och bostäder

SD-hanråttor av sexuell mognad (180-200 g) köptes från Xinglong (Beijing) Experimental Animal Farm (ålder: 6 veckor gamla) och försöksdjurslicensen var SCXK (Jing):2016-0003. Alla djurförsök godkändes av Inner Mongolia Medical University Animals Research Committee och utfördes enligt National Institute of Healths riktlinjer angående principerna för djurvård (2004). Alla djur hölls i ett barriärsystem med en reglerad temperatur på 21–23∘ C och en relativ luftfuktighet på 40–65 % och i en 12 timmars mörk/ljus-cykel. Råttorna fick ad libitum mat och vatten och acklimatiserades till ovanstående miljö under en vecka.

2.8.2. Dosering och provtagning

Råttorna överfördes till individuella metaboliska burar och delades slumpmässigt in i 6 grupper (?=10 i varje grupp). De gavs en intramuskulär injektion av 15 mg/kg hydrokortisonnatriumsuccinat (köpt från Tianjin Biochemical Pharmaceutical Co., Ltd., Tianjin, Kina) under 2 veckor förutom grupp 1 som injicerades med en lika stor volym fysiologisk saltlösning. På den 14:e dagen samlades kroppsvikten, matkonsumtionen, vattenintaget, urinvolymen och spontan aktivitet inom 5 minuter för att säkerställa om modellen för njur-yang-brist var framgångsrik. Från den 15:e dagen behandlades 6 grupper enligt följande: grupp 1 och grupp 2 (modellgrupp, M) behandlades med en lika stor volym destillerat vatten, grupp 3 (PhGs-extrakt från RCD-grupp, PR) behandlades med {{12 }}.42 g/kg PhGs-extrakt av RCD, vilket var lika med cirka 1,8 g/kg av den råa Cistanche deserticola och de andra grupperna var desamma, grupp 4 (PhGs-extrakt från WSCD-gruppen, PW) behandlades med en dos av { {17}}.49 g/kg PhGs-extrakt av WSCD, grupp 5 (polysackaridextrakt av RCD-grupp, SR) behandlades med {{20}}.18 g/kg polysackaridextraktet av RCD, och grupp 6 var (polysackaridextrakt av WSCD-grupp, SW) behandlades en dos av 0,22 g/kg polysackaridextraktet av WSCD. Alla råttor behandlades med magperfusion per dag. Efter en månads behandling nekades råttorna mat i 12 timmar före bloduppsamling. Nästa dag sövdes alla råttor och avlivades. Under testningen vägdes råttorna en gång i veckan för att justera dosen och vägdes igen innan de avlivades. Blodprover togs i Eppendorf-röret med 10 % EDTA-2Na-lösning. Serumet separerades via centrifugering vid 2000 rpm under 15 minuter och lagrades vid -80 grad för vidare användning. Dessutom togs njurar, testiklar, bitestiklarna, prostatakörteln och sädesblåsan bort och vägdes snabbt. Efter vägning frystes testiklarna i flytande kväve för bestämning av SOD och MDA.

2.9. Hormon- och antioxidanteffektanalys

Nivåerna av testosteron (T) och östradiol (E2) bestämdes i Qingdao Kechuang Quality Inspection Center med radioimmunitet och kolorimetrisk metod. De frusna testiklarna vägdes och blandades med 20 gånger kall fysiologisk saltlösning (W/W). Testikelhomogenatet erhållet genom vävnadshomogenat i isbadet centrifugerades för att erhålla supernatanten. Innehållet av SOD och MDA i testikeln bestämdes med SOD- och MDA-kit enligt instruktionerna.

2.10. Statistisk analys

Betydelsen av skillnader mellan grupper jämfördes genom ett envägs ANOVA-test följt av Schefes test med en signifikansgräns på 0.05 med SPSS-programvaran 25.0. Alla data uttrycktes som medelvärde ± standardavvikelse (SD) (n=3).

3. Resultat

3.1. Analysen av PhG-förändringar efter SPW med PCA

För att jämföra PhG-förändringarna efter SPW valdes 9 kromatografiska toppar ut som karakteristiska toppar och identifierades. Deras strukturer visas i figur 1, vars relativa toppareor beräknades för kvantitativt uttryck. HPLC-kromatogrammet visas i figur 2, vilket indikerar att det relativa innehållet av huvudsakliga PhG ändrades under SPW. PCA-analys på de relativa toppareorna för 9 komponenter erhölls för att urskilja olika prover. RCD och WSCD var långt ifrån varandra i plotten av poängen (Figur 3(a)), vilket indikerade att proverna klassificerades i två kluster. Så man tror att innehållet i de kemiska beståndsdelarna var olika. För att ytterligare hitta de potentiella kemiska markörerna för diskrimineringen utfördes en utökad statistisk analys för att generera laddnings-Bi-diagrammet (Figur 3(b)). Topparna 2, 3, 4, 6 och 7 kommer att minska efter SPW medan topparna 5, 8 och 9 kommer att öka, och alla var de viktigaste komponenterna för att särskilja RCD och WSCD. det relativa innehållet av topp 1 varierar inte mycket efter SPW.

NATURLIG CISTANCHE TUBULOSA FÖR ATT FÖRBÄTTRA SEXUELL FUNKTION PHGS75% ECH 30% ACT 12%

3.2. Innehållet i totala polysackarider och PhG ändrades efter SPW

Som visas i figur 3(b), hade 8 komponenter (5, 8 och 9 ökade och 2, 3, 4, 6 och 7 minskade) förändrats signifikant och hade en stor inverkan på provklustringen. Bland dem hade isoacteosid och Osmanthusid B ökat mest medan 2? -acetylakteosid och acteosid minskade mest. Så, innehållet i isoakteosid, Osmanthusid B, 2? -acetylakteosid och acteosid bestämdes med HPLC. Som visas i figur 1 var topp 4 akteosid, topp 5 var isoakteosid, topp 7 var 2? -acetylakteosid, och topp 8 var osmanthusid B. Den totala PhG i RCD och WSCD bestämdes med UV-metoden och den totala mängden polysackarider utfördes med användning av fenol-svavelsyrametoden, resultaten visades i Tabell 1, isoacteosid, Osmanthusid B ,totala polysackarider och PhGsi WSCD hade ökat signifikant jämfört med RCD. 2? -acetylakteosid och acteosid hade minskat signifikant.

3.3. Den hydrokortisoninducerade modellen för njur-Yang-brist gjordes

Jämfört med normalgruppen, efter 2 veckors intramuskulär injektion av 15 mg/kg hydrokortisonnatriumsuccinat, minskade kroppsvikten, matkonsumtionen och den spontana aktiviteten signifikant (P<0.05) and the water intake and urine volume were increased; the results were shown in Table 2. The T and E2 levels in the serum of the model group were lower than normal group as shown in Figure 4. From the above, the kidney-yang deficiency model was successfully made.

3.4. Effekten av extrakt på den genomsnittliga vikten och indexet för inälvor.

Alla råttor och deras inälvor vägdes och sedan beräknades det genomsnittliga inälvsindexet. Jämfört med N-gruppen hade M-gruppen signifikant minskat vikterna av inälvorna i njuren, sädesblåsan, bitestikeln och testikeln, vilket också indikerade att den hydrokortisoninducerade modellen för njure-yang-brist gjordes framgångsrikt. Jämfört med M-gruppen hade all observerad visceravikt ökat i PW- och SR-grupperna, PR-gruppen hade ökad vikt av testikel, bitestikel, sädesblåsa och prostatakörtel, och SW-gruppen hade ökad vikt av njure, testikel, bitestikel och sädesblåsor. Jämfört med PR-grupperna var PW-gruppen bättre i njurarna, sädesblåsan och prostatakörteln. Det fanns ingen signifikant skillnad mellan SR- och SW-grupperna i vikten av testikeln, bitestikeln, sädesblåsan och prostatakörteln. Resultaten visas i tabell 3.

Jämfört med N-gruppen minskade visceraindexen för njure, testikel, epididymis och sädesblåsan i M-gruppen. Jämfört med M-gruppen hade PW- och SR-gruppen ökat indexet för njuren, testikeln, prostatakörteln och sädesblåsan, PR-grupperna hade ökat indexet för testikeln, prostatakörteln och sädesblåsan, och SW-gruppen hade ökat indexet för njure, testikel och sädesblåsa. Jämfört med PR-grupperna var PW-gruppen bättre i njurarna, sädesblåsan och prostatakörteln. SW- och SR-grupperna hade ett liknande index för njure, testikel, sädesblåsa och epididymis. Resultaten visas i tabell 4.

3.5. Effekten av extrakt på nivån av hormon (T och E2)

Som visas i figur 4, jämfört med M-gruppen, hade nivåerna av T och E2 i alla behandlingsgrupper (PW, PR, SW och SR-gruppen) ökat signifikant (P<0.05). However, the PW group was better than the PR group in the level T and E2. The SR and SW groups had no significant difference.

3.6. Effekten av extrakt på antioxidanteffekt

SOD är ett viktigt antioxidantenzym. MDA är produkten av lipidperoxidation som är indikatorn för att reeffektera graden av oxidantskada. Innehållet av SOD och MDA påverkar omfattningen av oxidant- och antioxidantförmåga. Som visas i figur 5, jämfört med M-gruppen, hade antioxidanteffekten i alla behandlingsgrupper (PW, PR, SW och SR) förbättrats. SW-gruppen hade störst antioxidanteffekt.

4. Diskussion

Före klinisk applicering bör råmaterialen utsättas för traditionell kinesisk processteknik. Ångkokning är ett av de traditionella bearbetningssätten för vissa kinesiska medicinska örter, vilket ger en svart färg som produceras av Maillard-reaktionen [22], vilket ökar mängden av vissa bioaktiva komponenter [23] och farmakologiska aktiviteter. WSCD som en av processprodukterna är bättre när det gäller närande njurar jämfört med RCD som dokumenterats i 2015 års upplaga av Chinese Pharmacopoeia. I denna studie indikerade PCA-resultaten att SPW hade ändrat den kemiska profilen för RCD. Dessutom hade 8 komponenter i PhGs förändrats avsevärt. Det totala antalet PhG, det totala antalet polysackarider, isoacteosid och Osmanthusid B hade ökat mest, medan 2? -acetylakteosid och acteosid minskade efter SPW. Resultaten visade att SPW kunde förändra de kemiska beståndsdelarna i RCD. Innehållet av PhG med 1,3,4- trisubstituerade glukopyranosyldelar (såsom acteosid, 2?-acetylakteosid och cistanosid C) minskade i WSCD, men koncentrationerna av deras isomerer med 1,3,{{13 }} trisubstituerad glukopyranosyldel (såsom isoacteosid och tableside B) ökade, vilket indikerade att omvandlingen av kemiska beståndsdelar kan ske under SPW, och hydrolysreaktion kommer att vara en av anledningarna. De föreslagna transformationsvägarna visas i figur 6. Ökningen av polysackarider efter SPW har också rapporterats i ginseng [24].

Cistanche deserticola dokumenterades för att stärka njuren och vända minskningen av testosteronnivåer och ha antioxidanteffekt och antiinflammatorisk verkan [25], och PhGs och polysackarider var de två huvudsakliga biologiskt aktiva komponenterna i Cistanche deserticola. Som PhGs hade isoacteosiden och Osmanthuside B antioxiderande och antiinflammatoriska effekter [26, 27]. Så jämförelsen av farmakologiska effekter i testosteronnivå och antioxidanteffekt av RCD och WSCD studerades. I modellen med hydrokortison-inducerad njur-yang-brist stördes det endokrina och nivån av könshormoner minskade kraftigt i blodet. I denna studie visade resultaten av könshormonanalys att både RCD och WSCD avsevärt kunde öka nivån av T och E2, och bådePhGs och polysackaridervisade förbättring av könshormoner. WSCD var bättre än RCD, särskilt i PhGs extraktgrupper. Resultaten av visceraindexen visade att både PhG och polysackarider kan förbättra visceravikterna och deras viktindex. I PhG-extraktgrupper är WSCD bättre än RCD när det gäller att öka vikten och indexet för njurar och sädesblåsor. Dessutom har Cistanche deserticola en betydande antioxidanteffekt, särskilt i polysackaridextraktgrupperna med WSCD. Som diskuterats ovan kan både RCD och WSCD förbättra njur-yang-bristsyndromet; WSCD är dock bättre än RCD när det gäller att öka nivån av T, E2, vikterna och indexen för bitestiklarna och testiklarna. Resultaten av den farmakologiska effektstudien visade att SPW hade förändrat de kemiska komponenterna i PhG och ökat innehållet av polysackarider, vilket i sin tur ökade könshormonnivån och förstärkte antioxidanteffekten.

5. Sammanfattning

Studien var att upptäcka förändringen av PhGs, totala polysackarider och den farmakologiska effekten i RCD och WSCD på råttan med njur-yang-brist, särskilt på hormonnivå och antioxidanteffekt. denna studie har visat att processen med traditionella kinesiska örter kan förändra deras kemiska beståndsdelar och påverka deras bioaktivitet. Det stöds också att råvaror och bearbetade produkter ordinerades olikaNtlypå kliniken.

NATURLIG CISTANCHE TUBULOSA FÖR ATT FÖRBÄTTRA SEXUELL FUNKTION PHGS75% ECH 30% ACT 12%