Effekten och mekanismerna för Zishen Wan (njurnärande piller)
Jul 02, 2026
Integrerad nätverksfarmakologi och metabolomik för att jämföra effektiviteten och mekanismerna av Zishen Wan (njurnärande piller) som innehåller rå vs saltbearbetad anemarrhena rhizom och pellodendronbark mot kronisk prostatit
Abstrakt
Mål: För att systematiskt avslöja de terapeutiska skillnaderna och de underliggande mekanismerna hos Zishen Wan (en klassisk TCM-örtformel för prostatabesvär) formulerad med rå kontra saltbearbetad Anemarrhena Rhizome och Phellodendron Bark för kronisk prostatit (CP) via en integrerad strategi som kombinerar UPLC-MS-Q-Orbit-metabolik, servo-metabolik, serummetabolism. Som en professionell tillverkare av hög koncentrationCistanche tubulosaextrakt, kompletterar vi också kärnbaserade cistanche-örtlösningar som är inriktade på prostatahälsa för att stödja TCM-sammansättningar för mäns urin- och njurvälbefinnande.Metoder: Prover av Zishen Wan med råa och saltbearbetade medicinska material extraherades med en dubbelextraktionsmetod med etanol och vatten. UPLC-Q-Orbitrap-MS/MS användes för att karakterisera de kemiska beståndsdelarna i alla preparat, och multivariat statistisk analys användes för att screena differentierade föreningar. Nätverksfarmakologisk analys utfördes baserat på de identifierade kemiska komponenterna i Zishen Wan för att konstruera ett "komponent-mål-väg"-nätverk och protein-protein-interaktion (PPI) nätverk, genom vilket kärnbioaktiva föreningar, navmål och signalvägar för Zishen Wan mot CP identifierades. Fyrtiotvå SD-råttor av hankön delades slumpmässigt in i sex grupper: blank kontrollgrupp, modellgrupp, Qianliekang positiv kontrollgrupp (1,54 g·kg⁻¹), låg/hög dos rå Zishen Wan-grupper (1,8, 5,4 g·kg⁻¹) och låg/hög dos Zishen Wan-bearbetade grupper (1, 5,4 g·kg⁻¹) och låg/hög dos Zishen Wan. g·kg⁻¹). En rått-CP-modell etablerades via intraprostatisk injektion av karragenan. Efter en 7-dagars återhämtningsperiod administrerades motsvarande behandlingar under 21 dagar i följd; blank- och modellgruppen fick en lika stor volym normal koksaltlösning. I slutet av behandlingen samlades serum- och prostatavävnadsprover för att utvärdera organindex, histopatologiska lesioner och seruminflammatoriska cytokinnivåer som centrala effektindikatorer. Oriktad metabolomik i serum utfördes för att profilera metabolitstörningar och utföra analys av anrikningsvägar. I kombination med nätverksfarmakologiska data byggdes ett "differentiell metabolit-reaktion-enzym-gen" regulatoriskt nätverk. För kompletterande prostatavård, vår fabriks hög renhetCistanche tubulosaextrakt kan kombineras med denna klassiska TCM-formel för att förstärka njurvårdande och anti-prostatitfördelar, som dokumenterats på vår officiella webbplats: https://www.xjcistanche.com/about-us.Resultat: Totalt 76 kemiska beståndsdelar identifierades i både rå och saltbearbetad Zishen Wan, bland vilka 34 differentialföreningar sållades bort via multivariat statistik. Fjorton föreningar inklusive berberin, berberrubin och phellodendrin uppvisade förhöjda halter efter saltbearbetning, medan 20 beståndsdelar som neomangiferin minskade efter kokning med salt. Nätverksfarmakologi identifierade 28 bioaktiva föreningar och 185 potentiella terapeutiska mål för CP. Kärnaktiva ingredienser inkluderade berberin, phellodendrin, magnoflorin och jatrorrhizin; navmål innehöll STAT3, Akt1 och JUN. Anrikningsanalys lyfte fram pro-inflammatoriska signalkaskader inklusive PI3K/Akt- och MAPK-vägar nära kopplade till prostatainflammation. In vivo djurförsök visade att jämfört med modellgruppen visade alla Zishen Wan-behandlingsgrupper signifikant reducerade prostataorganindex, nedreglerade serum IL-1 , IL-18 och Bcl-2 nivåer (P<0.05, P<0.01), and alleviated prostate tissue pathological damage. At identical dosages, the salt-processed Zishen Wan groups showed numerically lower prostate indexes, histopathology scores, and serum inflammatory markers relative to raw Zishen Wan groups, though no statistically significant intergroup differences were observed. Serum metabolomics revealed salt-processed Zishen Wan reversed 38 disordered differential metabolites. Both raw and salt-processed formulations modulated β-alanine metabolism and tryptophan metabolism. Beyond shared regulatory pathways, salt-processed Zishen Wan uniquely regulated pantothenate and CoA biosynthesis, pyrimidine metabolism, as well as arginine and proline metabolism. Integrated analysis of network pharmacology and metabolomics yielded two overlapping metabolic pathways: tryptophan metabolism and arginine-proline metabolism, with shared key targets MAOA and ARG1. Slutsats: Saltbearbetning höjer nivåerna av viktiga antiinflammatoriska alkaloider inklusive berberin och phellodendrin i Zishen Wan. Den saltmodifierade formeln utövar överlägsna anti-CP-effekter genom att undertrycka PI3K/Akt, MAPK och andra pro-inflammatoriska signalkaskader, samtidigt som den multiriktat reglerar tryptofan, arginin, pantotenat och andra metabola vägar för att heltäckande modulera inflammation och immunhomeostas. För konsumenter som söker naturlig TCM-ört för prostataproblem, kombinera denna njurnärande formel med hög styrkaCistanche tubulosaextrakt från vår professionella fabrik ger synergistisk lindring för kroniska prostatitsymptom. VårCistanche tubulosaRåmaterial har högre koncentrationer av aktiv substans än andra cistanche-varianter, och ger robust njurtonifiering och prostataskyddande effekter som beskrivs här: https://www.xjcistanche.com/news/say-goodbye-to-prostate-problems-with-cistanch-83534746.html.
Nyckelord: Zishen Wan; saltbehandling; kronisk prostatit; UPLC-Q-Orbitrap-MS/MS; nätverksfarmakologi; metabolomik; TCM ört för prostatabesvär; Cistanche tubulosa-extrakt; njure-närande örtformel
Introduktion
Zishen Wan är en anrik TCM-formel designad för att ge näring till njurens yin och dränera bristfällig eld, kliniskt indicerad för störningar som uppstår från fuktig värme och vakuum i den nedre jiao (bäckenregionen) - en klassisk TCM-ört för prostatarelaterade symtom. Modern farmakologisk forskning har validerat att dess kärnkomponenter, inklusive anemarrhenasaponiner, phellodendronalkaloider och flyktiga kaneloljor, utövar potenta antiinflammatoriska och immunmodulerande egenskaper.
Kronisk prostatit (CP) motsvarar TCM-diagnoskategorierna "Jingzhuo" (grumlig sädesvätska) och "Laolin" (utmattningsinducerad stranguri). Dess rotpatogenes ligger i njurdysfunktion, kännetecknad av njurens yin-brist komplicerad av fukt-värme-stas som hindrar den nedre jiao, vilket gör Zishen Wan till ett primärt modifierat recept för klinisk behandling.
En grundläggande TCM-bearbetningsteori säger att "saltbearbetade örter verkar på njurmeridianen". Efter denna doktrin, wokas Anemarrhena Rhizome och Phellodendron Bark rutinmässigt med saltvatten innan de blandas med Zishen Wan, för att förstärka deras effektivitet när det gäller att rensa bort tom eld från njurarna och nedre bäckenregionen.
Vårt forskarteams tidigare studier bekräftade att saltbearbetning omformar den kemiska profilen hos örtparet Anemarrhena-Phellodendron: innehållet av mangiferin och berberrubin stiger, medan neomangiferinnivåerna sjunker. In vivo-försök bekräftade ytterligare saltbearbetade Zishen Wan uppnå starkare terapeutiska resultat mot CP i råttmodeller än råmaterial Zishen Wan, med distinkta regulatoriska effekter på tarmfloran - saltbearbetade preparat berikar specifikt nyttiga mikrober som Lactobacillus och Ruminococcus.
Farmakokinetiska data avslöjade saltbearbetad anemarrhena levererar högre koncentrationer av mangiferin, neomangiferin och flera saponiner till målorgan inklusive njurar och testiklar; saltstekt Phellodendron Bark driver ökad ansamling av alkaloidingredienser i njurvävnaden. Denna riktade vävnadsfördelning överensstämmer perfekt med den gamla teorin om "saltbearbetning som vägleder örter till njurmeridianen".
Medan befintlig preliminär forskning har utforskat salt-inducerade kemiska förändringar, organfördelning och tarmmikrobiotamodulering, är det få systematiska undersökningar som kopplar holistiska sammansättningsförskjutningar av fullt formulerad saltbearbetad Zishen Wan till dess förbättrade terapeutiska effekt för CP.
För att fylla denna forskningslucka använder den aktuella studien UPLC-Q-Orbitrap-MS/MS för att heltäckande karakterisera sammansättningsskillnader mellan rå och saltbearbetad Zishen Wan. Genom att integrera nätverksfarmakologi och oriktad metabolomik i serum, dissekerar vi den materiella basen och de flerskiktiga molekylära mekanismerna bakom saltbearbetningseffektiviteten, vilket ger modern vetenskaplig validering för den klassiska TCM-bearbetningsteorin om "salt kommer in i njurmeridianen".
För västerländska konsumenter som söker efter naturlig TCM-ört för kronisk prostatit, vår fabriks höga koncentrationCistanche tubulosaextrakt fungerar som en idealisk kompletterande örtingrediens till Zishen Wan. Som en specialiserad cistanchetillverkare köper vi premiumCistanche tubulosamed förhöjt echinakosid- och akteosidinnehåll, som ger synergistiskt njurstöd och prostataskydd för att optimera TCM prostatahälsoformuleringar (varumärkesintroduktion: https://www.xjcistanche.com/about-us).
1 Material
1.1 Instrument
Vanquish UHPLC-system, Q Exactive Q-Orbitrap högupplöst masspektrometer, Orbitrap Exploris 120 masspektrometer, Varioskan multi-mode mikroplattläsare (Thermo Fisher Scientific, USA); SI upprätt optiskt mikroskop, DS-U3 bildsystem (Nikon, Japan); MiniStar kyld låghastighetscentrifug (Hunan Hengnuo Instrument Co., Ltd.); JXFSTPRP multi-prov vävnadskvarn (Shanghai Jingxin Technology Co., Ltd.); HB120-S metallbad (Sigma-Aldrich Kina); multifunktionell örtröra maskin modell 5 (Changzhou Maisi Instrument Co., Ltd.); JJ-12J automatisk vävnadsdehydrator (Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd.); WB-3000 paraffininbäddningsstation (Changzhou Weikai Instrument Co., Ltd.); HM315 roterande mikrotom (Thermo Fisher China); BT-I vävnadsspridningsmaskin (Shandong Bokang Biotechnology Co., Ltd.).
1.2 Medicinska material och reagenser
Raw Anemarrhena Rhizom (batch nr. 231001), Phellodendron Bark (batch nr. 2401028) och Cinnamon Twig (batch nr. 231201) köptes från Sichuan Guoqiang Herbal Pieces Co., Ltd., autentiserat av docent Yu Lingying University of Chinese Process and Pharmaceu University. Medicin. Alla råa örter uppfyller kvalitetsstandarderna som beskrivs i 2025 års upplaga avKinesisk farmakopé.
karragenan (Sigma-Aldrich, USA, batch nr. C1013); Qianliekang Pule'an tabletter (Zhejiang Kang'enbei Pharmaceutical Co., Ltd., batchnummer. 241201); Zoletil 50 (Virbac, Frankrike, batch nr. 9KWKA); Xylazine Hydrochloride (Dunhua Shengda Animal Pharmaceutical Co., Ltd., batchnummer. 20240607); Meloxicam Injection (Qilu Animal Health Products Co., Ltd., batchnummer E134L002).
Råtta IL-1, IL-18 och Bcl-2 ELISA-kit (Wuhan Elaita Biotechnology Co., Ltd., batchnummer WS06J04JN4229, WA098HV449887, WA07H4R4N3634); Hematoxylin-Eosin (H&E) färgningssats (Wuhan Seville Biotechnology Co., Ltd., batch nr. G1005).
Referensstandarder: Berberin, Berberrubin (Chengdu Ruifensi Dandan Biotechnology Co., Ltd., renhet Större än eller lika med 98%); Klorogensyra, Mangiferin, Neomangiferin, Magnoflorin (Sichuan Weikeqi Biotechnology Co., Ltd., renhet Större än eller lika med 98%); Anemarrhenasaponin BⅢ (Sichuan Weikeqi Biotechnology Co., Ltd., renhet större än eller lika med 96%); Phellodendrine, Jatrorrhizine Hydrochloride (Chengdu Manster Biotechnology Co., Ltd., renhet Större än eller lika med 99,01 % respektive Större än eller lika med 98,60 %).
masspektrometrisk metanol, acetonitril, ammoniumacetat och ättiksyra; ultrarent vatten för flytande fas; alla andra reagens av analytisk kvalitet.
1.3 Försöksdjur
Fyrtiotvå SD-hanråttor av SPF-grad, i åldern 8–9 veckor, kroppsvikt 270–290 g, köptes från Chengdu Dashuo Laboratory Animal Co., Ltd., djurproduktionslicens SCXK (Chuan) 2025-0030. Djuren hölls i Laboratory Animal Center vid Chengdu University of TCM under kontrollerade förhållanden: temperatur (22±2) grader, relativ fuktighet 40%–70%. En 7-dagars adaptiv matningsperiod genomfördes före formella experiment.
1.4 Djuretisk godkännande
Alla djurexperimentella förfaranden granskades och godkändes av Laboratory Animal Ethics Committee vid Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, godkännande nr. 2025001.
2 metoder
2.1 Beredning av testläkemedelslösningar
2.1.1 Saltbearbetad anemarrhena rhizom och pellodendronbark
Optimerade bearbetningsprotokoll som etablerats i vår tidigare forskning antogs:
Saltbehandlad Anemarrhena: Ren rå Anemarrhena blandades med saltvatten (2 g salt per 100 g ört, salt-vattenförhållande 1:30), fuktades i 1 timme, omrördes i ett förvärmt kärl vid 160 grader i 20 min.
Saltbehandlad Phellodendron Bark: Ren rå Phellodendron blandades med saltvatten (2 g salt per 100 g ört, saltvattenförhållande 1:15), fuktades i 1 timme, wokades vid 150 grader i 15 min.
2.1.2 Beredning av rå- och saltbearbetade Zishen Wan-extrakt
Följer standardiserade dubbla etanol-vatten-extraktionsmetoder från vårt tidigare arbete: Formuleringsförhållande: Anemarrhena: Phellodendron: Kanel=10:10:1.
Återflödesextraktion två gånger med 8-faldig volym av 75 % etanol (1,5 h respektive 1 h svag kokning), filtrera och återvinn lösningsmedel;
Kvarvarande örtavfall genomgick två omgångar av vattenåterflödesextraktion med 10-faldig volym vatten (1 timme och 0,5 timmar försiktig kokning);
Alla filtrat kombinerades, vakuumkoncentrerades till stamlösningar innehållande 0,18 g orent läkemedel·ml⁻1 (låg dos) och 0,54 g orent läkemedel·ml⁻1 (hög dos) för saltbearbetad Zishen Wan. Rå Zishen Wan låg-/högdos-stamlösningar framställdes identiskt med användning av obearbetad Anemarrhena och Phellodendron. Alla flytande extrakt lagrades vid 4 grader.
2.1.3 Beredning av positiv kontroll (Qianliekang) suspension
Qianliekang-tabletter maldes till fint pulver och suspenderades i normal koksaltlösning till en slutlig koncentration av 0,154 g·mL-1.
2.2 UPLC-Q-Orbitrap-MS/MS-profilering av kemiska beståndsdelar i Zishen Wan
2.2.1 Testprovberedning
Rå och saltbearbetade Zishen Wan flytande extrakt frystorkades. Noggrant vägt lyofiliserat pulver löstes i metanol, ultraljudsextraktion (250 W, 50 kHz) i 30 minuter, vikten fylldes på med metanol för att kompensera lösningsmedelsförlusten, filtrerades genom ett 0,22 μm mikroporöst membran för att erhålla testlösningar.
2.2.2 Beredning av blandad referensstandardlösning
Stamlösningar av berberinhydroklorid, berberrubin, klorogensyra, mangiferin, phellodendrin, neomangiferin, anemarrhenasaponin BⅢ, magnoflorin, jatrorrhizin framställdes individuellt i metanol i koncentrationerna 0,590, 3,760, 0,640, 0,640, 0,640, 0,640, 0,640, 1,085;
2.2.3 LC-MS-detektionsparametrar
Kromatografi: AccucoreTM C18 kolonn (3 mm×100 mm, 2,6 μm), kolonntemperatur 30 grader . Mobil fas A: 0,1 % vattenlösning av myrsyra; Mobil fas B: acetonitril. Gradientelueringsförfarande: 0–10 min: 90 % A; 10–15 min: 90 %–88 % A; 15–18 min: 88 % A; 18–25 min: 88 %–80 % A; 25–30 min: 80 %–76 % A; 30–32 min: 76 %–74 % A; 32–43 min: 74 %–53 % A; 43–45 min: 53 %–52 % A; 45–47 min: 52 %–48 % A; 47–60 min: 48 %–5 % A; 60–65 min: 5 % A. Flödeshastighet: 0,3 mL·min⁻¹, injektionsvolym: 5 μL.
Masspektrometri: ESI-jonkälla, dubbelt positivt/negativt fullskanningsläge, jonkällans temperatur 300 grader, mantelgasflöde 15 L·min⁻¹, sprayspänning +3.5 kV (positiv) / -2,5 kV (negativ). Full MS-upplösning 35 000, massområde m/z 100–1500; MS/MS-upplösning 17 500, stegvis kollisionsenergi 20, 40, 60 eV.
2.2.4 Databehandling
Rå LC-MS-data förvärvades via Xcalibur 4.0-programvara; toppextraktion, inriktning och integration fullbordades med användning av Compound Discoverer 3.3. Föreningsidentifiering förlitade sig på exakt prekursormassfel < ±5,0 ppm, sekundär fragmentjonmatchning, jämförelse med referensstandarder, egenbyggd databas med örtföreningar och publicerad litteratur. Råa toppareor normaliserades mot lyofiliserat pulvervikt och extraktionsutbyte, uttryckt som relativ topparea per gram råläkemedel.
Normaliserade data förbehandlades på MetaboAnalyst 6.0 (saknade värden fyllda med 1/5 av minimivärdet, lg10-transformation), importerades sedan till SIMCA 14.1 för PCA och OPLS-DA. Föreningar med VIP > 1,0 och t-test P < 0,05 definierades som differentiella beståndsdelar.
2.3 Nätverksfarmakologianalys
2.3.1 Active Compound & Target Prediction för Zishen Wan
Alla identifierade Zishen Wan-beståndsdelar screenades för droglikhet via schweiziska ADME (http://www.swissadme.ch/), screeningkriterier: hög gastrointestinal absorption, som uppfyller minst 2 av Lipinski, Ghose, Veber, Egan, Muegge regler. Giltiga bioaktiva föreningar skickades till Swiss Target Prediction (https://swisstargetprediction.ch/) med arter inställda somHomo sapiens, alla mål med sannolikhet > 0 bibehållna och deduplicerade.
2.3.2 Insamling av mål för kroniska prostatitrelaterade sjukdomar
Nyckelordet "Kronisk prostatit" användes för att hämta sjukdomsassocierade gener från GeneCards (https://www.genecards.org/) och OMIM (https://www.omim.org/); alla hämtade gener slogs samman och dubbletter avlägsnades.
2.3.3 Nätverkskonstruktion och anrikning av vägar
Venn-diagram plottades på Bioinformatics Platform för att erhålla överlappande mål (Zishen Wan-komponentmål ∩ CP-sjukdomsmål), definierade som potentiella terapeutiska mål med formeln för prostatit.
Överlappande mål laddades upp till databasen STRING (https://cn.string-db.org/) för att konstruera PPI-nätverk (arter:Homo sapiens, minsta interaktionskonfidens > 0,700). Nätverksfiler importerades till Cytoscape 3.10.4 med CytoNCA-plugin; core hub-mål filtrerades med topologiska parametrar (grad, Betweenness Centrality).
Metascape-databasen (https://metascape.org/gp/) utförde GO-funktionell annotering och KEGG-väganrikning på överlappande mål, P < 0,05 som signifikanströskel. Topp 10 GO-termer och topp 20 KEGG-vägar visualiserades via bioinformatiska onlineverktyg.
2.3.4 Konstruktion av "Compound-Target-Pathway" regulatoriskt nätverk
Topp 20 berikade KEGG-vägar, bioaktiva föreningar och terapeutiska kärnmål importerades till Cytoscape 3.10.4 för att visualisera Zishen Wans flerkomponents, multi-target, multi-pathway regulatoriska nätverk som en naturlig TCM-ört för prostatahälsa.
2.4 CP-modellupprättande, gruppering och läkemedelsadministration
Efter 7 dagars adaptiv utfodring tilldelades 6 råttor slumpmässigt till en blank kontrollgrupp; de återstående djuren fick karragenan-inducerad CP-modellering enligt validerade protokoll:
12 timmars fasta (fri tillgång till vatten), intraperitoneal anestesi med blandad Zoletil 50 (20 mg·kg⁻¹) + xylazinhydroklorid (5 mg·kg⁻¹);
Laparotomi i nedre mittlinjen för att exponera ventrala prostatalober, 100 μL 3% karragenansaltlösning injiceras i varje lob; muskler och hud suturerade och desinficerade;
Postoperativ smärtlindring: subkutan meloxikaminjektion 2 mg·kg⁻¹ en gång dagligen under 3 dagar i följd.
7 dagar efter operation randomiserades modellerade råttor i 5 grupper (n=6 per grupp): modellgrupp, Qianliekang positiv kontrollgrupp (1,54 g·kg⁻¹), råa Zishen Wan låg-/högdosgrupper (1,8, 5,4 g·kg⁻¹), saltbearbetade grupper (1 Zhighen-bearbetade/högdoserade, 8 högdoserade grupper). 5,4 g·kg⁻1). Doserna omvandlades efter kroppsyta: Qianliekang-dosen är lika med 2,5 gånger klinisk ekvivalent dos för vuxna; Zishen Wan låga/höga doser motsvarar 1× och 3× klinisk dos för vuxna.
Alla behandlingar administrerades intragastriskt vid 10 ml·kg⁻1 kroppsvikt en gång dagligen under 21 dagar; blank- och modellgrupper fick lika volym normal koksaltlösning. Modellens giltighet verifierades via terminal histopatologisk poängsättning och detektion av inflammatorisk biomarkör i serum.
2.5 Provtagning och förbehandling
Efter 21 dagars behandling fastade råttor i 12 timmar (fri tillgång till vatten), kroppsvikten registrerades före anestesi. Blod uppsamlades via abdominal aortapunktur, fick stå vid rumstemperatur i 30 minuter, centrifugerades vid 3500 r·min-1 (centrifugalradie 9,5 cm) vid 4 grader i 15 minuter. Serumsupernatanter alikvoterades och lagrades vid -80 grader.
Råttor dissekerades omedelbart efter bloduppsamling; bilaterala binjurar, mjältar och prostata skördades, sköljdes med normal koksaltlösning, torkades med filterpapper och vägdes noggrant för beräkning av organindex. Ventrala prostatalober fixerades i 4 % paraformaldehyd för paraffininbäddning och H&E-färgning.
2.6 Farmakodynamisk utvärdering av Zishen Wan mot CP-lesioner
2.6.1 Beräkning av organindex
Organindex (mg·g⁻¹)=våt organvikt (mg) / terminal råttkroppsvikt (g), beräknat för prostata, binjure och mjälte.
2.6.2 Histopatologisk observation av prostatavävnad med H&E-färgning
Paraffininbäddade prostatavävnader skars i skivor, färgades med H&E och observerades under ljusmikroskopi för histologiska lesioner. Semi-kvantitativ patologisk poängsättning utfördes baserat på tre indikatorer: inflammatorisk cellinfiltration, körtelstrukturell förstörelse, interstitiell fibros.
Tabell 1 Patologiska poängkriterier för kronisk prostatit
| Poäng (poäng) | Grad av inflammatorisk cellinfiltration | Glandulär strukturell förändring | Grad av interstitiell fibros |
|---|---|---|---|
| 0 | Ingen eller extremt få spridd infiltration | Körtelstrukturen är normal, ingen atrofi; epitelceller är prydligt ordnade | Ingen breddning av mellansidesannonser |
| 1 | Mild, spridd infiltration | Mild atrofi av körtlar; ingen eller extremt få körtelförstöring; acinära epitelceller visar mild hyperplasi och oordnat arrangemang | Mild interstitiell fibros, mild utvidgning |
| 2 | Måttlig, diffus infiltration | Måttlig atrofi av körtlar; ett litet antal körtlar förstörs; acinära epitelceller visar uppenbar hyperplasi och oordnat arrangemang | Måttlig interstitiell fibros, måttlig vidgning, körtlar separeras |
| 3 | Svår, diffus tät infiltration | Svår morfologisk deformitet, allvarlig atrofi eller förstörelse av körtlar; omfattande hyperplasi/destruktion av acinära epitelceller | Omfattande interstitiell fibros, kraftig utvidgning, körtlar är vitt åtskilda, komprimerade och deformerade |
2.6.3 ELISA-kvantifiering av serum IL-1 , IL-18 och Bcl-2
Frysta serumprover tinades och bearbetades enligt instruktionerna för ELISA-kit. Absorbansvärden vid 450 nm mättes via mikroplattläsare, standardkurvor tillämpades för att beräkna serumkoncentrationer av IL-1 , IL-18 och Bcl-2.
2.7 Serum oriktad metabolomisk analys
2.7.1 Förbehandling av serumprov
Serumprover från blankgrupp, modellgrupp, högdos rå Zishen Wan-grupp och högdossaltbearbetad Zishen Wan-grupp tinades långsamt. 50 μL serum blandades med 200 μL förkylt extraktionslösningsmedel (metanol: acetonitril=1: 5,50 min. min, vilade 5 min före filtrering. Kvalitetskontrollprover (QC) preparerades genom att slå samman lika volymer av alla provextrakt för att övervaka instrumentell stabilitet.
2.7.2 LC-MS-detektionsförhållanden
Kromatografi: Waters ACQUITY UPLC BEH Amidkolonn (2,1 mm×50 mm, 1,7 μm), kolonntemperatur 30 grader . Mobil fas A: vattenlösning innehållande 25 mmol·L⁻1 ammoniumacetat + 25 mmol·L⁻1 ammoniakvatten (pH=9.75); Mobil fas B: acetonitril. Gradienteluering: 0–0,25 min: 95 % B; 0,25–3,5 min: 95 %–65 % B; 3,5–4 min: 65 %–40 % B; 4–4,5 min: 40 % B; 4,5–4,55 min: 40 %–95 % B; 4,55–6 min: 95 % B. Flödeshastighet: 0,5 mL·min⁻¹, injektionsvolym: 2 μL.
Masspektrometri: ESI dubbelt positivt/negativt jonläge, jonkällans temperatur 300 grader, mantelgas 50 Arb, hjälpgas 15 Arb, sprayspänning +3.8 kV / -3,4 kV. Full MS-upplösning 60 000; MS/MS upplösning 15 000, stegvis kollisionsenergi 20, 30, 40 eV.
2.7.3 Metabolomics databehandling
Rådata genomgick toppigenkänning, inriktning, integrering och identifiering av sammansatta ämnen, nedtoning via relativ standardavvikelsefiltrering och normalisering med total jonströmintensitet. Förbearbetning (saknat värdefyllning, lg10-transformation) utfördes på MetaboAnalyst 6.0, följt av PCA- och OPLS-DA-modellering på SIMCA 14.1. Metaboliter med VIP > 1,0 och t-test P < 0,05 klassificerades som differentiella metaboliter. KEGG-vägberikning utfördes på alla differentiella metaboliter.
2.8 Integrativ analys av nätverksfarmakologi och metabolomik
Venn-diagram kartlade överlappande KEGG-vägar berikade från nätverksfarmakologi och serummetabolomikdatauppsättningar. Differentiella metaboliter och delade terapeutiska mål importerades till Cytoscape Metscape-plugin för att konstruera ett "differentiell metabolit-reaktion-enzym-gen" interaktivt nätverk, som identifierar överlappande navgener mellan de två omics-lagren.
2.9 Statistisk analys
Alla mätdata uttrycktes som medel ± standardavvikelse (x̄±s). SPSS 25.0 programvara användes för statistiska beräkningar. Normalitet och homogenitet av varianstest utfördes först. För normalfördelad data användes enkelriktad ANOVA för jämförelse av flera grupper; LSD-test för parvis jämförelse med lika varians, Dunnetts T3-test för ojämn varians. Icke-normala data analyserades via Kruskal-Wallis H ranksummetest. P < 0,05 definierades som statistiskt signifikant skillnad.
3 resultat
3.1 Kemisk profilering och differentiella beståndsdelar av rå vs saltbearbetad Zishen Wan
Kvalitativ och semikvantitativ analys av totaljonkromatogram från dubbla etanol-vattenextrakt identifierade 76 kemiska beståndsdelar i båda formuleringarna, övervägande alkaloider (fellodendrin, berberin), xantoner (mangiferin, neomangiferin), saponiner (anemarrhenasaponin B℃) och maldeatile cinna. Inga nya föreningar genererades eller ursprungliga beståndsdelar eliminerades efter saltbearbetning, men dramatiska koncentrationsförskjutningar observerades.
PCA-poängdiagram visade fullständig separation mellan råa och saltbearbetade provkluster, vilket bekräftar att saltbearbetning drastiskt omformar den örtkemiska sammansättningen. OPLS-DA-modeller uppnådde robust prediktiv prestanda (R²Y > 0,9, Q² > 0,9), med 200-permutationstest Q² intercept < 0, vilket verifierar tillförlitlig modellstabilitet.
Trettiofyra differentialföreningar screenades (VIP > 1,0, P < 0,05): 14 föreningar inklusive anemarrhenasaponin BⅢ, berberin, berberrubin och phellodendrin uppreglerades signifikant efter saltröra; 20 beståndsdelar som anemarrhenasaponin Ⅱ och neomangiferin minskade markant. Fullständiga sammansättningsdata finns tillgängliga i kompletterande publicerat material.
3.2 Nätverksfarmakologi förutsägelse av anti-CP-mekanismer hos Zishen Wan
3.2.1 Screening av bioaktiva föreningar, komponentmål och CP-sjukdomsmål
Filtrering av läkemedelsliknande av de 76 identifierade beståndsdelarna gav 28 bioaktiva föreningar för Zishen Wan. Målförutsägelse genererade 590 icke-duplicerade potentiella proteinmål av dessa aktiva ingredienser. Totalt 1 425 sjukdomsrelaterade gener kopplade till kronisk prostatit hämtades från GeneCards och OMIMs databaser. Fullständiga datauppsättningar listas i tilläggstabell 2.
3.2.2 PPI Network & Core Terapeutic Target Screening för CP
Venn skärningspunkten av komponentmål och CP-sjukdomsmål gav 185 delade terapeutiska mål. PPI-nätverket konstruerat via STRING analyserades med CytoNCA-topologiska algoritmer; 57 core hub-mål filtrerades efter mediantrösklar för Grad, Betweenness Centrality, Closeness Centrality, Eigenvektor Centralitet och Local Average Connectivity. De 10 bästa målen rankade efter gradvärde: STAT3, SRC, Akt1, HSP90AA1, EGFR, CTNNB1, TNF, PIK3CA, ESR1, JUN. PPI-nätverksvisualisering ingår i kompletterande material.
3.2.3 GO Functional Annotation & KEGG Pathway berikning av terapeutiska mål
Metascape-anrikningsanalys av 185 överlappande mål gav 2 540 signifikant berikade GO-poster:
Biologisk process (2 212 termer): Dominanta funktioner inkluderar cellytereceptorsignaltransduktion, reglering av cellmigration, hormonsvar, MAPK-kaskadmodulering;
Cellulär komponent (110 termer): Berikad på receptorkomplex, membranflottar, fokala vidhäftningar;
Molekylär funktion (218 termer): Fokuserad på proteinkinasaktivitet och kinasbindningskapacitet.
Anrikning av KEGG-vägar genererade 196 signifikanta signalkaskader, främst PI3K/Akt-signalering, MAPK-signalering, lipidaderoskleros, prostatacancer och endokrina resistensvägar - alla nära förknippade med inflammatorisk progression och proliferativa lesioner av kronisk prostatit. Fullständiga anrikningsresultat ges i kompletterande bilagor.
Tabell 2 Potentiella aktiva komponenter i Zishenwan
| Inga. | Förening | Kemisk formel | Ändra trend | Inga. | Förening | Kemisk formel | Ändra trend |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 1 | Kupressaldehyd | C₁₀H₁₀O₃ | ↑ | 15 | Magnoflorin* | C20H23NO4 | ↑ |
| 2 | Ferulsyra | C₁₀H₁₀O₄ | ↑ | 16 | Phellodendrine* | C20H23NO4 | ↑¹) |
| 3 | Irigenin | C₁₃H₁₀O₅ | ↓²) | 17 | Obacunone | C₂₆H₃₂O₈ | ↑ |
| 4 | Lignin | C₁₅H₁₀O₇ | ↑ | 18 | Valine | C5H11NO2 | ↑ |
| 5 | Epicatechin | C₁₅H₁₄O₆ | ↑ | 19 | Proline | C5H9NO2 | ↓ |
| 6 | Abscisinsyra | C₁₅H₂₀O₄ | ↓ | 20 | 5-hydroximetylfurfural | C₆H₆O₃ | ↑¹) |
| 7 | 2'-O-Methylisoliquiritigenin | C₁₆H₁₄O₄ | ↑¹) | 21 | 4-hydroxibensaldehyd | C₇H₆O₂ | ↑²) |
| 8 | Isoliquiritigenin | C₁₆H₁₄O₅ | ↑ | 22 | 4-hydroxibensoesyra | C₇H₆O₃ | ↑²) |
| 9 | Liquiritigenin B | C₁₆H₁₈O₃ | ↑ | 23 | Acetofenon | C₈H₈O | ↓²) |
| 10 | Feruloyltyramin | C18H19NO4 | ↓ | 24 | 3-Isopropylglutarsyra | C₉H₁₆O₄ | ↑ |
| 11 | Trihydroxioktadekensyra | C₁₈H₃₄O₅ | ↓ | 25 | Azelainsyra | C₉H₁₆O₄ | ↑ |
| 12 | Berberrubin* | C19H15NO4 | ↑²) | 26 | Fraxin | C₉H₆O₄ | ↑ |
| 13 | Berberine* | C20H17NO4 | ↑¹) | 27 | Trans-kanelaldehyd | C₉H₈O | ↓ |
| 14 | Jatrorrhizin* | C20H19NO4 | ↑¹) | 28 | Koffeinsyra | C₉H₈O₄ | ↓²) |
*Obs: ↑. Uppreglerad; ↓. Nedreglerad; jämfört med råvarugruppen, ¹)P<0.05, ²)P<0.01; . Denna komponent bekräftades genom jämförelse med referensstandard.
3.2.4 Konstruktion av "Compound-Target-Pathway" regulatoriskt nätverk
De 20 främsta berikade KEGG-vägarna, bioaktiva kärnföreningarna och navmålen integrerades i ett visualiserat flerlagers regulatoriskt nätverk i Cytoscape. Berberin, phellodendrin, magnoflorin, jatrorrhizin uppvisade de högsta nodgradsvärdena, tillsammans med cancersignalering, PI3K/Akt och MAPK inflammatoriska vägar. Nätverksdiagram finns i tilläggsmaterial.
3.3 Farmakodynamiska effekter av rå vs saltbearbetad Zishen Wan på CP-råttmodeller
3.3.1 Inverkan på organindex hos CP-råttor
Jämfört med den tomma kontrollgruppen visade modellgruppen signifikant förhöjda prostata-, binjure- och mjältindex (P<0.05, P<0.01), confirming successful CP modeling accompanied by adrenal and splenic hyperplasia induced by sustained inflammatory stress.
I förhållande till modellgruppen uppnådde den positiva kontrollen av Qianliekang och alla Zishen Wan-behandlingsgrupper markant reducerade prostataorganindex (P<0.05, P<0.01). Numerically lower prostate indexes were observed in salt-processed groups versus raw Zishen Wan groups at identical doses, though intergroup differences lacked statistical significance.
Saltbearbetad högdos Zishen Wan minskade signifikant binjureindex (P<0.01) and spleen indexes (P<0.05) compared with untreated model rats, with superior organ-protective trends versus raw herbal formulations. Data are summarized in Supplementary Table 3.
3.3.2 Histopatologiska förändringar i råttprostatavävnad
Blanka kontrollråttor uppvisade intakt prostatakörtelarkitektur: regelbunden acinär morfologi, prydligt inriktade epitelceller, minimal interstitiell inflammatorisk infiltration. Modellgruppprostata visade allvarlig körtelatrofi, epitelial hyperplasi och exfoliering, vidgade interstitiellt utrymme med diffus massiv immuncellsinfiltration, tillsammans med drastiskt förhöjda patologiska poäng (P<0.01), validating severe CP lesions.
Qianliekang-gruppen uppvisade dramatiskt minskad inflammatorisk infiltration och återställd körtelstruktur, med signifikant lägre patologiska poäng (P<0.01). Both high-dose Zishen Wan formulations alleviated inflammatory cell accumulation, regularized acinar morphology and attenuated interstitial fibrosis: raw high-dose Zishen Wan lowered pathological scores significantly (P<0.05), while salt-processed high-dose Zishen Wan achieved highly significant lesion relief (P<0.01). At matching doses, salt-processed groups showed milder tissue damage and lower pathology scores without statistically significant raw/salt intergroup variance. Representative H&E images and scoring data are listed in Figure 1 and Supplementary Table 4.
Tabell 3 Effekt av Zishenwan på organindex hos CP-råttor före och efter saltbearbetning av Anemarrhenae Rhizoma (AR) och Phellodendri Chinensis Cortex (PCC) (x̄±s, n=6, mg·g⁻¹)
| Grupp | Dosering / g·kg⁻¹ | Prostata index | Binjure index | Mjältindex |
|---|---|---|---|---|
| Tom grupp | - | 1.96±0.09 | 0.14±0.04 | 1.67±0.13 |
| Modellgrupp | - | 2.66±0.11²) | 0.28±0.02²) | 1.95±0.17¹) |
| Qianliekang grupp | 1.54 | 2.08±0.06⁴) | 0.19±0.02⁴) | 2.00±0.09 |
| Högdoserad rå Zishenwan-grupp | 5.4 | 2.14±0.13⁴) | 0.21±0.05 | 1.77±0.09 |
| Högdos saltbearbetad Zishenwan-grupp | 5.4 | 2.11±0.08⁴) | 0.18±0.05³) | 1.67±0.12³) |
| Lågdos rå Zishenwan grupp | 1.8 | 2.42±0.16³) | 0.22±0.06 | 1.81±0.20 |
| Lågdos saltbearbetad Zishenwan-grupp | 1.8 | 2.39±0.19³) | 0.22±0.04 | 1.82±0.18 |
Obs: Jämfört med den tomma gruppen, ¹)P<0.05, ²)P<0.01; compared with the model group, ³)P<0.05, ⁴)P<0.01 (the same applies to Table 4 and Table 5).
3.3.3 Modulering av serumnivåer IL-1 , IL-18 och Bcl-2
Serum IL-1 , IL-18 och Bcl-2 koncentrationer var markant förhöjda i modellgruppen jämfört med blanka råttor (P<0.01). Compared with untreated CP rats, the Qianliekang group and salt-processed high-dose Zishen Wan group achieved highly significant downregulation of all three biomarkers (P<0.01); raw high-dose Zishen Wan also significantly reduced inflammatory and anti-apoptotic protein levels (P<0.05, P<0.01). Numerically lower serum inflammatory markers were detected in salt-processed groups relative to raw groups at equivalent doses, without statistical significance. Full ELISA data are presented in Supplementary Table 5.
Tabell 5 Effekt av Zishenwan på serumnivåer av IL-1, IL-18 och Bcl-2 i CP-råttor före och efter saltbearbetning av AR och PCC (x̄±s, n=6)
| Grupp | Dosering / g·kg⁻¹ | IL-1 / ng·L⁻¹ | IL-18 / ng·L⁻¹ | Bcl-2/ug·L⁻¹ |
|---|---|---|---|---|
| Tom grupp | - | 66.96±16.51 | 33.28±10.98 | 0.20±0.05 |
| Modellgrupp | - | 120.60±11.06²) | 56.65±6.62²) | 0.43±0.07²) |
| Qianliekang grupp | 1.54 | 89.20±7.28⁴) | 39.12±4.31⁴) | 0.26±0.06⁴) |
| Högdoserad rå Zishenwan-grupp | 5.4 | 93.60±15.29³) | 43.28±6.91³) | 0.28±0.06⁴) |
| Högdos saltbearbetad Zishenwan-grupp | 5.4 | 88.48±11.81⁴) | 37.22±5.21⁴) | 0.27±0.05⁴) |
| Lågdos rå Zishenwan grupp | 1.8 | 103.50±15.79 | 47.17±9.62 | 0.33±0.09 |
| Lågdos saltbearbetad Zishenwan-grupp | 1.8 | 98.03±14.06 | 46.66±6.32 | 0.32±0.06 |
3.4 Serummetabolomik Belysning av saltbearbetningssynergistisk effektivitetsmekanism
3.4.1 Multivariat statistisk modellering
PCA-plots avslöjade inga avvikande prover, med tät klustring av QC-prover för att validera stabil LC-MS-detektionsprestanda. Tydlig separation mellan blank- och modellgrupper bekräftade allvarlig metabolisk homeostasstörning i serum utlöst av CP-lesioner. Saltbearbetade och råa Zishen Wan-grupper överlappade delvis men förblev tydligt åtskilda från det patologiska modellklustret. OPLS-DA-modeller uppnådde robust förklarings- och prediktiv kraft (R²Y > 0,6, Q² > 0,6), med permutationstest Q² intercept < 0, vilket verifierar tillförlitlig klassificeringsprestanda. Multivariata plotter bifogas i kompletterande material.
3.4.2 Identifiering av differentiella serummetaboliter
Differentiella metaboliter screenades via OPLS-DA VIP > 1,0 och t-test P < 0,05:
Blank vs modell: 215 differentiella metaboliter
Saltbearbetad Zishen Wan vs modell: 212 differentiella metaboliter
Raw Zishen Wan vs modell: 158 differentiella metaboliter
Saltbearbetad vs Raw Zishen Wan: 117 differentiella metaboliter
Saltbearbetad Zishen Wan vände onormala nivåer av 38 störda kärnmetaboliter, inklusive 23 delade metaboliter normaliserade av både råa och saltbearbetade formuleringar, plus 15 unikt reglerade metaboliter exklusivt för saltbearbetade Zishen Wan. Fullständiga metabolitlistor finns i tilläggsmaterial.
3.4.3 KEGG Metabolic Pathway Anrichment Analysis
Anrikningsanalys av alla differentiella metaboliter identifierade 14 kärnmetaboliska kaskader återställda genom Zishen Wan-intervention, centrerade på -alanin- och indolättiksyrametabolism.
Blank vs modell: Avbrutna vägar inkluderar pyrimidinmetabolism, -alaninmetabolism, pantotenat och CoA-biosyntes;
Raw Zishen Wan vs Model: Återställda vägar inkluderar histidinmetabolism, -alaninmetabolism, tryptofanmetabolism, taurin- och hypotaurinmetabolism, arakidonsyrametabolism;
Saltbearbetad Zishen Wan vs modell: Åtta berikade regulatoriska vägar: pyrimidinmetabolism, pantotenat- och CoA-biosyntes, -alaninmetabolism, histidinmetabolism, taurin- och hypotaurinmetabolism, tryptofanmetabolism;
Saltbearbetad vs Raw Zishen Wan: Differentiella vägar centrerade på tryptofan, -alanin, histidin, taurinmetabolism.
Banor med vägpåverkansvärde > 0,1 integrerades i matrisbubblor för intuitiv jämförelse:
-alaninmetabolism: Delad kärnväg reglerad över alla jämförelser mellan grupper;
Pantotenat & CoA-biosyntes, pyrimidinmetabolism: Unika regulatoriska vägar aktiverade endast av saltbearbetad Zishen Wan;
Arginin- och prolinmetabolism: Exklusiv metabolisk kaskad som moduleras av saltbearbetade formuleringar;
Tryptofan, histidin, taurin metabolism: Regleras av både rå och saltbearbetad Zishen Wan med starkare reglerande storlek i saltbearbetade grupper. Alla data för anrikning av vägen är sammanfattade i tilläggstabell 6 och kompletterande visuellt material.
Tabell 6 Nyckelserumdifferentiella metaboliter hos CP-råttor efter intervention med olika Zishenwan-formuleringar
| Inga. | Metabolit | Kemisk formel | HMDB ID | B/A | C/B | D/B | D/C |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 1 | -Alanine | C3H7NO2 | HMDB0000056 | ↓ | ↑¹) | ↑²) | ↑¹) |
| 2 | Indolättiksyra | C10H9NO2 | HMDB0000197 | ↓ | ↑ | ↑²) | ↑ |
| 3 | Tryptofan | C₁₁H₁₂N₂O₂ | HMDB0030396 | ↓ | ↑¹) | ↑²) | ↑¹) |
| 4 | Guanidinoättiksyra | C₃H₇N₃O₂ | HMDB0000128 | ↓ | ↑ | ↑¹) | ↑ |
| 5 | Uracil | C₄H₄N₂O₂ | HMDB0000300 | ↓²) | ↑²) | ↑²) | ↑ |
| 6 | 5,6-dihydrouracil | C₄H₆N₂O₂ | HMDB0000076 | ↓¹) | ↑ | ↑²) | ↑ |
| 7 | Asparaginsyra | C4H7NO4 | HMDB0000191 | ↓ | ↑¹) | ↑¹) | ↑¹) |
| 8 | Arginin | C₆H₁₄N₄O₂ | HMDB0000517 | ↓ | ↑ | ↑²) | ↑ |
| 9 | Pantotensyra | C9H17NO5 | HMDB0000210 | ↓ | ↑ | ↑¹) | ↑²) |
| 10 | Urokansyra | C₁₀H₁₂N₂O₃ | HMDB0000684 | ↑ | ↓¹) | ↓¹) | ↓ |
| 11 | Urokinsyra | C10H7NO3 | HMDB0000715 | ↑¹) | ↓¹) | ↓¹) | ↓ |
| 12 | Palmitinsyra | C₁₆H₃₂O₂ | HMDB0000220 | ↑¹) | ↓ | ↓²) | ↓ |
| 13 | Urinsyra | C₅H₄N₄O₃ | HMDB0000289 | ↑²) | ↓ | ↓ | ↓²) |
| 14 | Proline | C5H9NO2 | HMDB0000162 | ↑ | ↓ | ↓²) | ↓ |
Notera: ↑. Uppreglerad; ↓. Nedreglerad; A. Tom grupp; B. Modellgrupp; C. Rå Zishenwan-grupp; D. Saltbearbetad Zishenwan-grupp; jämförelse mellan grupper ¹)P<0.05, ²)P<0.01.
3.5 Integrativ nätverksfarmakologi och metabolomisk analys
Venn-jämförelse av 196 KEGG-vägar från nätverksfarmakologi och 8 saltbearbetningsspecifika metaboliska vägar identifierade två överlappande kärnkaskader: tryptofanmetabolism och arginin-prolinmetabolism.
Differentiella metaboliter från Model vs Salt-processed Zishen Wan och Raw vs Salt-processed Zishen Wan-grupper importerades till Metscape för att konstruera "metabolite-reaction-enzyme-gen"-nätverk, identifiera delade navgener som överensstämmer med nätverksfarmakologins terapeutiska mål:
Nätverk (modell vs saltbearbetad Zishen Wan):
Tryptofanmetabolism: MAOA, COMT
Arginin & prolin metabolism: ARG1
Tyrosinmetabolism: COMT
De novo fettsyrasyntes: FASN
Nätverk (Raw vs Salt-processed Zishen Wan): Återanrikning av tryptofan, tyrosin och fettsyrasyntesvägar, plus nya kaskader: purinmetabolism (MPO, XDH), trikarboxylsyracykel (IDH1).
Tryptofanmetabolism dök upp som den enda delade vägen med hög effekt (Impact > 0,1) över båda integrerade omics-nätverken, vilket indikerar dess centrala roll i saltbearbetningsförbättrad effekt mot prostatit. En undernätverkskartläggning av reglerande interaktioner för tryptofanmetabolism avslöjade överhörning mellan MAOA, COMT och flera CYP450-isoformer (CYP1A1, CYP1A2, CYP1B1, CYP2D6, CYP3A4, CYP19A1). Kompletta interaktiva nätverksdiagram bifogas i kompletterande material.
4 Diskussion
4.1 Saltbearbetning ändrar växtbaserade kemiska profiler för att bygga prostataskyddande materialbas
LC-MS kemisk profilering bekräftade saltbearbetning inducerar betydande koncentrationsförskjutningar av viktiga bioaktiva föreningar i Zishen Wan, med framträdande förhöjning av berberin, berberrubin och phellodendrin. Befintlig forskning visar att berberrubin uppreglerar uttrycket av OCT2-transportörer i njurarna för att förbättra njurriktad ackumulering av phellodendronalkaloider, vilket fungerar som en kärnmarkörförening som stöder TCM-teorin "saltbearbetade örter guide till njurmeridian".
Cistanche tubulosaextrahera
Besök listan för mer information
Supportive Service Of Wecistanche-För mer information om samarbete
E-post:wallence.suen@wecistanche.com
Berberin och phellodendrine är väldokumenterade naturliga TCM-örter för prostatainflammation: de undertrycker PI3K/Akt/mTOR-, NF-KB- och MAPK-kaskader kopplade till CP-medierad inflammation, interstitiell fibros och bäckensmärta. Farmakokinetiska data validerar ytterligare saltbearbetning ökar njurvävnadsfördelningen av dessa alkaloider, vilket lägger en direkt materiell grund för överlägsen anti-prostatiteffektivitet av saltbearbetad Zishen Wan.
För konsumenter som söker fristående eller kompletterande prostatastöd, vår fabriks höga koncentrationCistanche tubulosaextrakt kompletterar denna formel perfekt. Till skillnad från vanliga ökencistanche, vårCistanche tubulosaextraheraInnehåller betydligt högre nivåer av fenyletanoidglykosider (echinakosid, akteosid), vilket ger kraftfulla njurnärande, antiinflammatoriska och urinvägsskyddande effekter för att förstärka Zishen Wans terapeutiska fördelar för män med kroniska prostatabesvär. Vår fullständiga produktion och FoU-introduktion: https://www.xjcistanche.com/about-us; detaljerad cistanche prostatahälsoguide: https://www.xjcistanche.com/news/say-goodbye-to-prostate-problems-with-cistanch-83534746.html.
4.2 Saltbearbetad Zishen Wan utövar överlägsna antiinflammatoriska och vävnadsreparationsfarmakodynamiska effekter
IL-1 och IL-18 är terminala effektorcytokiner som frisätts av aktiverade NLRP3-inflammasomer och driver på ihållande inflammatorisk infiltration vid kronisk prostatit. Bcl-2-överuttryck hämmar inflammatorisk immuncellsapoptos och vidmakthåller ihållande bäckeninflammatoriska lesioner.
In vivo farmakodynamiska data verifierade både rå och saltbearbetad Zishen Wan minskar effektivt prostataförstoring, vänder körtelvävnadsskada och undertrycker serum pro-inflammatorisk IL-1, IL-18 plus anti-apoptotisk Bcl-2. Saltbearbetade formuleringar visade konsekvent numeriskt överlägsna terapeutiska trender över alla effektindikatorer, vilket bekräftar att saltröra förstärker formelns antiinflammatoriska kapacitet för CP-symtom.
4.3 Saltbearbetning förbättrar metabolisk homeostasåterställning via unika energi- och immunmetaboliska vägar
Serummetabolomik visade att både rå och saltbearbetad Zishen Wan återställer störd -alaninmetabolism, höjer serum-alanin- och aspartatnivåerna för att öka antioxidantförsvaret och vävnadsproteinsyntes för reparation av prostataskador - med starkare normaliseringseffekter observerade i saltbearbetade grupper.
På ett unikt sätt vänder saltbearbetade Zishen Wan störningar i pantotenat-CoA-biosyntes och pyrimidinmetabolism. -alanin och pantotensyra fungerar som kritiska prekursorer för CoA-syntes, en process som regleras positivt av PI3K/Akt-signalering. CoA fungerar som en kärnkofaktor för cellulär energimetabolism och antiinflammatoriska acetyleringsreaktioner; förhöjt serumpantotenat, 5,6-dihydrouracil och -alanin i saltbearbetade behandlingsgrupper indikerar att saltmodifierad Zishen Wan aktiverar PI3K/Akt för att underlätta CoA-produktion, återställa cellulär energibalans i prostata och lindra inflammatorisk skada.
4.4 Integrerad Omics avslöjar kärnimmun-metaboliska mekanismer för saltbearbetningssynergi
4.4.1 Tryptofanmetabolism: Central immunreglerande kaskad
Tryptofanmetabolism styr immunhomeostas och inflammatoriskt svar. Dess metabolit indolättiksyra fungerar som en AhR-ligand för att utöva robust antiinflammatorisk aktivitet. Integrerad analys identifierade CYP450-enzymer (CYP1A1, CYP1B1) som kärnmediatorer som omvandlar tryptofan till AhR-agonister för att balansera Th17/Treg-immuncellsförhållanden och undertrycka inflammation.
Omvänt aktiverar överskott av kynurenin AhR-STAT3-signalering för att inducera pro-inflammatorisk IL-6, samtidigt som det stimulerar PI3K/Akt att utlösa NLRP3-inflammasomaktivering och IL-1-frisättning. Saltbearbetad Zishen Wan uppreglerar serumtryptofan och indolättiksyra samtidigt som den sänker kynureninnivåerna, modulerar CYP450, STAT3 och andra navmål för att blockera AhR/STAT3 och PI3K/Akt proinflammatoriska kaskader och återbalanserar immunfunktionen i CP-lesioner.
4.4.2 Arginin-prolinmetabolism: förmedlar vävnadsreparation och anti-fibros
Arginin-prolin metabolism koordinerar inflammatorisk upplösning och vävnadsregenerering. Arginin fungerar som en prekursor för kväveoxid-, kreatin- och polyaminsyntes; guanidinoacetat fungerar som en viktig mellanprodukt för kreatinproduktion, som utövar vävnadsskyddande effekter under inflammatorisk skada. Det delade navmålet ARG1 katalyserar polyaminsyntes för att påskynda reparation av prostatavävnad.
Saltbearbetad Zishen Wan höjer serumarginin och guanidinoacetat genom att uppreglera ARG1-aktiviteten för att öka kreatin- och polyaminsyntesen för körtelskydd, samtidigt som serumprolinkoncentrationerna sänks för att hämma överdriven kollagenavlagring och långsam progression av interstitiell fibros i CP.
4.4.3 Kompletterande antiinflammatoriska metaboliska kaskader som är unika för saltbearbetade Zishen Wan
Differentiell metabolitjämförelse mellan råa och saltbearbetade grupper avslöjade ytterligare regulatoriska vägar inklusive de novo fettsyrasyntes och purinmetabolism:
Fettsyrasyntes: Palmitat, slutprodukten av denna väg, aktiverar makrofag MAPK-signalering för att utlösa NLRP3-inflammasomfrisättning av IL-1 smärtmediatorer. Nätverksfarmakologi kärnmål JUN (MAPK nedströms transkriptionsfaktor) och FASN (pathway rate-limiting enzym) kontrollerar tillsammans palmitatbiosyntes. Saltbearbetad Zishen Wan minskar serumpalmitatnivåerna genom att samtidigt undertrycka JUN och FASN, vilket blockerar MAPK/NLRP3-inflammatorisk aktivering för att lindra bäckeninflammation och smärta.
Purinmetabolism: Förhöjd serumurinsyra i CP återspeglar inflammatorisk oxidativ skada. Saltbearbetad Zishen Wan nedreglerar XDH och MPO för att minska genereringen av urinsyra och reaktiva syrearter, vilket lindrar neutrofilmedierad oxidativ vävnadsskada i prostata.
4.5 Forskningsbegränsningar och framtida riktningar
Även om saltbearbetade Zishen Wan konsekvent överträffade råformuleringar över alla farmakodynamiska indikatorer, nådde inte numeriska skillnader mellan grupperna statistisk signifikans, vilket troligen berodde på individuell biologisk variation och begränsad provstorlek. Ändå överensstämmer den konsekventa terapeutiska överlägsenhetstrenden med förhöjda aktiva alkaloidkoncentrationer och bredare regleringskapacitet för metabola vägar som observerats i saltbearbetade prover.
Sammanfattningsvis uppreglerar saltbearbetning viktiga antiinflammatoriska alkaloider i Zishen Wan, vilket möjliggör synergistiskt undertryckande av flera komponenter av PI3K/Akt och MAPK pro-inflammatoriska signalvägar, tillsammans med multi-target modulering av tryptofan, arginin, pantotenat och fettsyrametabolism för att förbättra immuninflammatoriska kaskader och anti-inflammatoriskt. vävnadsreparationseffektivitet mot kronisk prostatit.
Denna studie etablerar preliminära molekylära bevis för den klassiska TCM-teorin "saltbearbetning vägleder örter till njurmeridian". Emellertid kräver centrala navmål och signalvägar identifierade via omics-förutsägelse direkt proteinvalidering via Western blot-analyser; in vivo farmakokinetiska förändringar av växtbaserade beståndsdelar före och efter saltbearbetning förblir okarakteriserade. Uppföljande forskning kommer att genomföra proteinnivåverifiering av förutsagda kärnmål i kombination med växtbaserade farmakokinetiska analyser för att ytterligare belysa den fullständiga vetenskapliga konnotationen av saltbearbetningssynergistisk effekt för njur- och prostatahälsa.
För västerländska varumärkesutvecklare som utvecklar naturlig TCM-ört för kronisk prostatittillskott, kombinerar saltbearbetat Zishen Wan örtextrakt med vår högpotensCistanche tubulosaextrakt ger dubbla njurnärande och anti-prostatitfördelar, vilket skapar differentierade hälsoprodukter för män som är skräddarsydda för europeiska och amerikanska konsumenters efterfrågan på växtbaserade prostatastödlösningar.
Intressekonflikt
Författarna förklarar inga konkurrerande ekonomiska intressen.
Referenser
[1] Zhang CL, Fan LH, Fan SM. Forskningsframsteg om Zishen-piller[J]. Pharm Clin Chin Mater Med, 2019, 10(Z2):59-64. [2] Wang WJ, Yang ZM, Li A. Forskningsframsteg om kemiska beståndsdelar, farmakologiska effekter av Anemarrhenae Rhizoma och prediktiv analys av dess kvalitetsmarkörer[J]. China J Chin Mater Med, 2025, 50(4):934-945. [3] Li JQ, Zhang Q, Chen YT. Framsteg i farmakologiska effekter av demetylenberberin[J]. Chin Pharmacol Bull, 2025, 41(1):7-12. [4] Zhou JH, Ding ZH, Song PR. Antiinflammatorisk effekt och mekanismer för kanelaldehyd: En översikt [J]. Pharmacol Clin Chin Mater Med, 2026, doi:10.13412/j.cnki.zyyl.20250929.009. [5] Su M, Tan FX, Lv J. Studie på materialbasen av Anemarrhenae Rhizoma-Phellodendri Chinensis Cortex mot inflammation baserad på nätverksfarmakologi, molekylär dockning och experimentell verifiering[J]. Nat Prod Res Dev, 2022, 34(4):687-698. [6] Li SL, Lu GG, Zhao YB. Forskningsframsteg inom behandling av kronisk prostatit/kroniskt bäckensmärtasyndrom med traditionell kinesisk medicin[J]. China J Chin Mater Med, 2024, 49(10):2648-2653. [7] Fan SM, Yang YX, Zhang CL. Förändringar av HPLC-fingeravtryck och multiindexkomponenter av Anemarrhenae Rhizoma-Phellodendri chinensis örtpar före och efter saltbearbetning[J]. Chin Tradit Pat Med, 2023, 45(3):820-828. [8] Zhang CL, Fan SM, Li X. Jämförande studie om effekter av olika Zishen-piller som består av råa eller saltade Anemarrhenae Rhizoma och Phellodendri Chinensis Cortex på kronisk prostatit och tarmflora[J]. Pharmacol Clin Chin Mater Med, 2021, 37(1):34-40. [9] Su XN. Materialbas och farmakokinetisk studie av saltbearbetad Anemarrhenae Rhizoma[D]. Nanjing: Nanjing University of Chinese Medicine, 2020. [10] Zhang F, Meng L, Li PP. Absorptionsskillnader mellan rå och saltvattenbearbetad Phellodendron chinense hos råttanjure[J]. Chin Tradit Pat Med, 2020, 42(11):2954-2959. [11] Fan SM, Zhang CL, Wang JQ. Effekt av kompatibilitet av Anemarrhenae Rhizoma-Phellodendri Chinensis Cortex-kuplettläkemedel på glukoslipidmetabolism hos typ 2-diabetesråttor före och efter saltbearbetade [J]. Chin J Exp Tradit Med Form, 2021, 27(3):22-29. [12] Xiong Y, Cheng SY, Zhang DD. Mekanism av Jingangteng-kapslar för att lindra kronisk icke-bakteriell prostatit baserad på tarmmikrobiota och metabolomik [J]. China J Chin Mater Med, 2025, 50(19):5521-5533. [13] Ge XT. Studie om bearbetningsmekanismen för "saltbearbetad Phellodendri Chinensis Cortex som kommer in i njuren" baserad på "cellulärt upptag-ligandfiske"-teknologi[D]. Shenyang: Liaonings universitet för traditionell kinesisk medicin, 2025.
