Effekter av Cistanche Deserticola Total Glycosides på oxidativ stressskada och cellapoptos hos råttor med cerebral ischemi-reperfusion Ⅰ
Mar 15, 2024
AbstOch det är just därför som det
Mål: Att utforska effekterna och möjliga mekanismer avCistanche deserticola totalglykosider(GC) om oxidativ stressskada och nervcellsapoptos hos råttor med cerebralischemi reperfusionsskada(CIRI).
Metoder: Den mellersta cerebrala artärocklusionsmodellen (MCAO) konstruerades i modellråttor med användning av suturemboliseringsmetoden. Efter att modellen framgångsrikt etablerats gavs råttorna i läkemedelsgruppen (GCs) GCs 50 mg/(kg·d) genom sondmatning under 14 på varandra följande dagar; råttorna i skenoperationsgruppen (Sham) och modellgruppen (modell) gavs samma volym normal saltlösning. Muntlig administration. Efter administreringen användes Longa-poängmetoden för att utvärdera det neurologiska underskottet; råttor avlivades sedan och TTC-färgning utfördes för att beräkna procentandelen av cerebral infarktarea; ELISA-metoden användes för att detektera serummalondialdehyd(MDA) innehåll,superoxiddismutas(SOD) ochGlutationperoxidas (GSH-Px)aktivitet; Western blot för att detektera nukleär faktor E2-relaterad faktor 2 (Nrf2), hemoxygenas-1 (HO-1) och B i hjärnvävnadCellulärt lymfom/leukemi-2 (Bcl-2), Bcl-2-associerat X-protein (Bax) och caspas-3 (Caspase-3) uttryck.
Resultat: Jämfört med Sham-gruppen hade modellgruppen en ökad poäng för neurologiskt underskott, ökad andel hjärninfarktarea,ökat MDA-innehåll, minskade SOD- och GSH-Px-aktiviteter och minskade Nrf 2, HO -1 och Bc l-2 proteinuttrycksnivåer Proteinexpressionsnivåerna för Bax och Caspase-3 ökade; jämfört med modellgruppen minskade det neurologiska underskottspoängen för råttor i GCs-gruppen, andelen hjärninfarktområde minskade,MDA-halten minskade, SOD och GS H-Px-aktiviteten ökar, proteinuttrycksnivåerna för Nrf 2, HO -1 och Bcl - 2 ökade, och proteinuttrycksnivåerna för Bax och Caspase - 3 minskade. Slutsats: GC:er kan effektivt minska cerebral ischemi-reperfusionsskada, och dess mekanism kan vara relaterad till att aktivera Nrf 2 / HO - 1-vägen, och därigenom minska oxidativ stressnivåer och hämma nervcellsapoptos.
[Nyckelord]Cistanche deserticola totalglykosider; cerebral ischemi-reperfusionsskada; oxidativ stress; cellapoptos
NATURLIGT ORGANISKT CISTANCHEEXTRAKT
Klicka för att få mer information
Supportive Service Of Wecistanche - Den största cistanche-exportören i Kina:
E-post:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/Tel:+86 15292862950
Handla för fler specifikationer:
https://www.xjcistanche.com/cistanche-butik
Cerebral ischemi-reperfusion,
CIS är en sjukdom med extremthög sjuklighet, handikappochdödlighet. Hjärnceller är extremt känsliga för ischemi och hypoxi, så att rekanalisera cerebrala blodkärl så snart som möjligt är det mest effektiva sättet att hantera akut ischemisk stroke. Intravenös trombolys och mekanisk trombektomi är idag mycket använda metoder, men på grund av deras relativt
Enbart på grund av det smala tidsfönstret och andra okontrollerbara faktorer<10% of stroke patients can achieve vascular recanalization within an effective time. Cerebral ischemi reperfusion, CIRI är en typ av återhämtning av cerebrala blodkärl från stenos. En överlagd patologisk skada som uppstår under blodflödet. Man tror för närvarande att dess patologiska mekanism kan vara relaterad till excitatorisk aminosyratoxicitet, kalciumöverbelastning, frisättning av inflammatoriska faktorer och ansamling av fria syreradikaler orsakade av mitokondriell skada [1], vilket i slutändan leder till förstörelse av blod-hjärnbarriären, störningar i mikrocirkulationen. , nervcellsapoptos och nekros [1] 2] och en serie reaktioner, vilket ytterligare förvärrar neurologiska underskott.
Cistanche deserticola totalglykosider (glykosider av cistanche, GCs) kommer från den traditionella kinesiska medicinen Herba Cistanche Den huvudsakliga aktiva ingrediensen utvinns från stjälkar och rötter av tum). Tidigare studier har visat att GC:er effektivt kan hämma lipidperoxidation, förbättra mitokondriell funktion, ta bort överskott av fria syreradikaler, hämma frisättningen av inflammatoriska cytokiner, minska cytotoxicitet, anti-trombocytaggregation, hämma cellproliferation, hämma neuronal apoptos och minska hormonnivåer, därigenom har anti-aging, anti-tumör, anti-depression, förbättrar immuniteten, förbättrar ischemiska kardiovaskulära och cerebrovaskulära sjukdomar, förbättrar inlärnings- och minnesförmåga och kognitiva funktioner, och förbättrar reproduktion [3].
Studier har visat att GC kan minska oxidativ skada på celler och bibehålla integriteten hos blod-hjärnbarriären.
[4]; GCs kan effektivt förbättra cellviabiliteten och blockera inflammation och apoptos inducerad efter ischemi-reperfusion [5]; Nrf 2 spelar en viktig roll i de antiinflammatoriska och antioxidanta processerna [6]. Baserat på ovanstående bakgrund syftar denna artikel till att ytterligare studera effekterna och möjliga vägar för GC på oxidativ stress och apoptos efter CIRI genom att replikera CIRI-modellen.
1 Material och metoder
1. 1 Läkemedel och reagens GCs (SN-5692, renhet 98 %, Western
Anshenong Biotechnology Co., Ltd.), 2 % trifenyltetrazoliumklorid (TTC) färgämneslösning (Beijing Solebao Technology Co., Ltd.), ELISA-kit (Beijing Boosen Co., Ltd.), BCA-protein kvantitativ analyssats (USA Cell Signaling Technology Company), kanin-anti-mus-antikropp Bcl-2, Bax, Caspas-antikroppar såsom e-3, Nrf 2, HO-1 och sekundära get-anti-kanin-antikroppar köptes alla från Proteintech Company i USA.
1. 2 instrument
Centrifuge (modell: TDL-40B, Shanghai Anheng Scientific Instrument Factory), mikroplattläsare (modell: Max-M5, American Molecular Devices Company), SDS-PAGE-elektroforesinstrument (modell: DYY-7C, Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd. Company), gelskanner (Modell: 4466611, US BIO-RAD Company).
1. 3 djur
Wistar-råttor av hankön [SCXK (Beijing) 2019-0010], ren klass, 8 veckor gamla, kroppsvikt 250-280 g.
1. 3 metoder
1. 3. 1 Gruppering och modellering
Råttor delades in i skengrupp (Sham), modellgrupp (modell) och läkemedelsgrupp (GC) med en enkel randomiseringsmetod. Det fanns 15 råttor i varje grupp. De växte adaptivt upp i 1 vecka och modellerades sedan. Strikt fastande och fastande 12 timmar före operationen använde modellgruppen och GCs-gruppen suturemboliseringsmetoden [7] för att skapa ocklusion av mellersta cerebral artär (mitthjärnsartär ocklusion). ocklusion, MCAO) råttmodell, avlägsnades embolus efter 2 timmars ischemi för att uppnå reperfusion. , registrera starttiden för reperfusion. Såret suturerades, huden desinficerades med jodofor, och djuren återfördes till buren och föddes upp och fick sedan perfunderas i 24 timmar. Operationen för råttorna i Sham-gruppen var densamma som för modellråttorna, men ingen pluggning utfördes. Slutligen behölls 10 råttor i varje grupp för efterföljande experiment.
1. 3. 2. Administrationsmetod
Ta GCs pulver och tillsätt rent vatten för att förbereda en 15 mg/ml lösning. Preliminära studier har visat att dosen 50 mg/(kg·d) är bättre än andra dosgrupper [8], så den dos som valts för detta experiment är densamma som tidigare. Råttor i GCs-gruppen gavs GCs genom sondmatning efter 24 timmars ischemi och reperfusion, och råttor i Sham-gruppen och modellgruppen gavs en lika stor volym normal saltlösning genom sondmatning under 14 dagar.
1. 3. 3 Poäng för neurologiskt underskott
Longa-poängmetoden [7] användes för att få poäng 24 timmar efter operationen, och modellråttor med poäng på 1 till 3 behölls för efterföljande experiment. Poäng efter den sista dosen. 0 poäng: Inga
Neurologiska symtom; 1 poäng: lätt neurologiskt underskott, den kontralaterala frambenen böjs och höjs när svansen lyfts och axeln addukterar; 2 poäng: måttligt neurologiskt underskott, den kontralaterala frambenen böjs och höjs när svansen lyfts, axeladduktion, vridning i cirklar till motsatt sida av lesionen när man går; 3 poäng: allvarligt neurologiskt underskott, lutande mot motsatt sida av lesionen när man går; 4 poäng: omedvetna och autonoma aktiviteter.
1. 3. 4 Bestämning av procentandel av hjärninfarktområdet
Efter den sista administreringen valdes 4 råttor från varje grupp slumpmässigt ut, sövdes djupt, halshöggs och deras hjärnor avlägsnades snabbt.
Frys snabbt in hjärnvävnaden i ett -20 graders kylskåp i 20 minuter. Efter att hjärnvävnaden är relativt fixerad, ta ut den. Börja från skärningspunkten mellan den främre polen av hjärnan till den optiska chiasmen, och från pannan till nackknölen, skär råtthjärnan längs koronalplanet. Skär i 5 hjärnskivor med en tjocklek av 2 mm, doppa dem i 2% TTC-lösning, lägg dem i ett 37 graders vattenbad för färgning i 15 minuter, vänd dem och färga dem i ytterligare 15 minuter. Slutligen nedsänktes hjärnskivorna i 4% paraformaldehydlösning och fixerades i 12 timmar innan de fotograferades. Normal hjärnvävnad visades i rött och infarkt hjärnvävnad visades i vitt. Använd bildprogram för att analysera och beräkna infarkthastigheten för varje hjärnskiva. Infarktfrekvens=infarktarea/totalarea av hjärnans skiva × 100 %.
1. 3. 5 Detektering av oxidativ stress relaterade indikatorer
Bedöva råttan, ta 4 mL abdominalt aortablod, alikvotera det i rena EP-rör och placera det i ett 4 graders kylskåp för 0. Centrifugera vid 3 500 r/min i 5 timmar vid 4 grader i 15 minuter, ta supernatanten och behåll slutligen serumet från 3 råttor i varje grupp. Innehållet av malondialdehyd (MDA) och superoxiddismutas (superoxiddismutas) bestämdes enligt ELISA-kitdriftsmetoden. e dismutas,
SOD), glutationperoxidas (glutationperoxidas, GSH-Px) aktivitet.
1. 3. 6 Western blot-detektion
Oxidativ stress och apoptosrelaterade proteiner mättes för att mäta uttrycket av proteiner Nrf 2, HO -1, Bcl -2, Bax och Caspase -3 i hjärnvävnad. Tre råttor valdes ut från varje grupp, och en lämplig mängd hjärnbark från det sjuka området togs, lyslösning tillsattes och proteinkoncentrationen beräknades efter proteinextraktion. Efter proteingelelektrofores, överför till membran, blockering med blockeringslösning i 2 timmar, sköljning och inkuberades sedan med primär antikropp vid 4 grader över natten, nästa dag togs TBST bort, sköljdes och sekundär antikropp tillsattes för inkubation i 2 h. Placera målbandet på bildanalysatorn för att analysera det grå värdet. Beräkna det relativa remsgråvärdet, relativa remsgråvärdet=målremsgråvärde / internt referensremsgråvärde.
1. 4 Statistiska analysmetoder
Dataapplikation SPSS 25. 0 programvara för dataanalys och de statistiska graferna i den här artikeln ritades med programvaran GraphPad Prism 8. Dataresultat som överensstämmer med normalfördelning uttrycks som medelvärde ± standardavvikelse. Enfaktorsvariansanalys användes för jämförelser mellan flera prover och LSD-t användes för jämförelser mellan två oberoende prover. Testa, med P < 0. 05 indikerar att skillnaden är statistiskt signifikant.
