Effekter av Cistanche Tubulosa vattenextrakt på tarmmikrobiotan hos möss med tarmsjukdomar

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-post:audrey.hu@wecistanche.com

Störningar i tarmens mikrobiota är förknippade med många sjukdomar. te vattenhaltigextraherafrånCistanche tubulosa(CT), en traditionell kinesisk växtbaserad formel, har rapporterats spela en roll för att skydda den mänskliga tarmen. Men lite är känt om dess effekter på tarmmikrobiotan. *Den nuvarande studien utfördes för att fastställa om CT-vattenhaltenextraherakan modulera tarmmikrobiomet hos möss med tarmsjukdomar. Vi fann att den skadade tarmmorfologin till följd av behandling med cefixim kunde räddas med hjälp avCTvattenhaltigt extrakt. *e jämförelse av mikrobiell mångfald mellan möss som behandlats medCTextrakt- och kontrollmöss indikerade också att störningen i mikrobiomgemenskapen av modellgrupper kunde återställas genom behandling med höga och medelhöga koncentrationer avCTvattenhaltigt extrakt. Behandling med cefixim ledde till en signifikant minskning av mjölksyrabakterier; dock tillägget avCTvattenhaltigt extrakt återvann tillväxten av dessa mjölksyrabakterier. Dessutom CT vattenhaltigaextraherakunde moderera de dramatiska förändringarna i de metaboliska vägarna i tarmmikrobiomet inducerade av cefixim. Dessa fynd gav en inblick i de fördelaktiga effekterna av CT-vattenextraktet på tarmmikrobiota, och de gav också en viktig referens för utvecklingen av relaterade läkemedel i framtiden.

cistanches anti-aging funktion

1. Introduktion

Intestinala mikroorganismer koloniserar huvudsakligen tarmallumen och slemhinnelagret och mutualiserar sig med värdens material och energiutbyte, transformation och andra processer [1].Dey är signalhubbar som integrerar miljömeddelanden, såsom kost, med genetiska och immunsignaler, vilket följaktligen påverkar värdens metabolism, immunitet, nervsystem och svar på infektioner [2]. Normalt finns det en dynamisk balans mellan tarmfloran och värdarna; tarmdysbios kan dock resultera i förändringar i balansen mellan hälsa och sjukdom, immunförsvar och en mängd sjukdomar [3]. Måttliga förändringar i tarmmikrobiotan är acceptabla för värden; detta kan dock fortfarande ge möjligheter att förstärka förändringarna i andra försvårande faktorer, såsom bakteriofager, bakteriociner och oxidativ stress [4]. Tidigare studier har visat att etanolextraktet avCistanche tubulosa(CT), en traditionell kinesisk örtformel, kan reglera tarmens mikrobiella sammansättning hos råttor [5], och de totala glykosiderna av CT justerade den oordnade tarmmikrobiotan [6]. Cistanche-arter, som huvudsakligen parasiterar på rötterna av Tamarix-arter, kallas också "öknens ginseng" och en tonic som består av stjälkar av Cistanchedeserticola (CD) ochCistanche tubulosa(CT) används som naturläkemedel [7].Dehuvudkemiska komponenter i CTfenyletanolglykosider (PHG), som är antioxidantsubstanser [8, 9], visade sig förbättra reproduktiv dysfunktion [10], undertrycka aktivering av leverstjärnceller, blockera ledning av signalvägar i TGF- 1/SMAD [ 11], och förhindra bovint serumalbumin-inducerad leverfibros hos råttor [12]. Bland mer än 100 komponenter i CT är polysackarid också ett av de viktiga ämnena med rikligt innehåll [13, 14]. Tidigare studier har visat att C. deserticola-polysackarider inducerar melanogenes i melanocyter, minskar oxidativ stress[15], lindrar kognitiv dysfunktion genom att reglera antioxidant- och antiinflammatoriska processer hos råttor [16], skyddar PC12-celler mot OGD/RP-inducerad skada [17] , förbättrar absorptionen av ekinakosid in vivo och påverkar tarmmikrobiotan [18]. Probiotika är levande icke-patogena mikroorganismer som har hälsofördelar och ger mikrobiell balans i mag-tarmkanalen när de administreras i tillräckliga mängder [19].Dey kan förstärka ospecifika cellulära immunsvar som kännetecknas av aktivering av makrofager, naturliga mördarceller (NK) och antigenspecifika cytotoxiska T-lymfocyter och frisättningen av olika cytokinesiner på ett stamspecifikt och dosberoende sätt [20]. Probiotiska stammar förbättrar tarmepitelets egenskaper via TJ-modulering, och specifika probiotiska stammar har visats reglera mucinuttryck, och därigenom påverka egenskaperna hos slemskiktet och indirekt reglera tarmens immunsystem [21]. Stammar av mjölksyrabakterier (LAB) och Bifidobacterium är majorprobiotika som har använts inom många områden [22–26].ThHälsofördelarna är många, där deras antioxidantkapacitet är en viktig faktor i deras hälsorelaterade funktioner[27]. Probiotika kan kelatera metalljoner för att förhindra dem från att katalysera oxidation [28, 29]; de kan också öka uttrycket av antioxidantenzymer [30, 31], producera olika metaboliter med antioxidantaktivitet [32, 33], förmedla antioxidantsignalvägar [34–36] och reglera enzymerna som producerar reaktiva syrearter (ROS) och responsen från tarmarna. mikroorganismer till oxidativ stress[37]. En nyligen genomförd studie visade att polysackarider av CD kan stimulera tillväxten av vissa mjölksyrabakterier, vilket kan gynna människors hälsa [38]. Men innehållet av polysackarider i CD skiljer sig från det i CT [7, 39], och denna skillnad kan leda till olika effekter på tarmmikroorganismer. Dessutom, även om CD-polysackarider kan minska oxidativ stress genom att aktivera NRF2/HO-1-vägen [15], kan effekterna av en enda polysackarid skilja sig från den totala effekten av flera kompositioner i CT.ThFör oss är det nödvändigt att exakt definiera effekterna av CT-vattenhaltiga extrakt på tarmmikroorganismer. Dessutom kan PHG också motstå oxidativ stress [40] och undertrycka lipopolysackaridmedierade inflammatoriska svar genom att aktivera Keep1/Nrf2/HO-1-vägen [41].Dedärför är det av stort värde att bestämma effekten av det vattenhaltiga CT-extraktet. Dessutom tyder effekterna av vissa beståndsdelar i det vattenhaltiga CD-extraktet på oxidativ stress och tarmflora att motståndet mot oxidativ stress kan vara korrelerad med förändringar i tarmfloran. För att fylla luckorna i kunskapen om de ämnen som nämns ovan undersökte vi effekterna av CTaqueous extrakt på tarmmikrobiota av möss med tarmflora störningar. Dessa resultat kommer att ge värdefull information om de möjliga mekanismerna genom vilka CT förändrar tarmfloran och ger tarmresistens mot oxidativ stress.

2. Material och metoder

2.1. Försöksdjur.

Totalt 18 SPF-klassade hanmöss C57BL/6J, som vägde 18–22 g, köptes från Experimental Animal Center vid Xinjiang Medical University med licensnummer SCXK (nytt) 2018-0003.Dey hölls i burar under standardiserade förhållanden: 12 timmar ljus/mörker fotoperiod, temperaturen 23 ± 2 grader och luftfuktighet på 55 ± 5 procent.Dedjuren fick en kommersiell diet (51 procent kvävefritt extrakt, 25 procent råprotein, 4,6 procent råfett, 6,5 procent råaska, 4,0 procent råfiber och 8,9 procent fukt) och kranvatten.Dedjuren behandlades enligt rekommendationerna som beskrivs i Guide for Care and Use of Laboratory Animals från National Institutes of Health.

2.2. Extraktion av det vattenhaltiga extraktet.

Torkade skivor av C.tubulosa,tillhandahållna av Hotan Dichen PharmaceuticalBiotechnology Co., Ltd., maldes till pulver, och granulat med partikelstorlekar mellan 20 och 40 mesh valdes ut.Deextraktionsförhållandena var som följer: fast-vätskeförhållande på 1:19, temperaturen på 80 grader, mikrovågstid på 6 min, ultraljudstid på 16 min, mikrovågseffekt på 400 W och ultraljudseffekt på 400 W.Deinnehållet i huvudkomponenterna i det vattenhaltiga extraktet mättes med HPLC (Agilent 1260 Infinity II, Kalifornien, USA). I korthet löstes standardämnena echinakosid (0,2 mg/ml) och akteosid (0,2 mg/ml) i 50 procent metanol för att fungera som referenssubstanslösning.Den, 1 g av det CT-vattenhaltiga extraktet löstes i 100 ml 50 procent metanol och lämnades att stelna i 30 min.Deextraktlösningen behandlades med ultraljud vid 250 W och 35 kHz under 10 minuter och centrifugerades därefter vid 12, 000 rpm/min.Desupernatanten filtrerades av ett {{0}}.45 μm mikroporöst filtermembran. Referenssubstanslösningen och filtratet detekterades sedan med HPLC under följande förhållanden: oktadecylsilanbunden silikagel som fyllmedel, metanol som mobil fas A och 0,1 procent myrsyra som mobil fas B.Dekolumntemperaturen sattes till 30 grader, detektionsvåglängden ställdes till 330 nm och injektionsvolymen var 10 μL.

2.3. Experiment.

Efter en veckas anpassning delades de 18 mössen slumpmässigt in i sex grupper: A (normalt med medeldos CT-vattenextrakt tillsatt), B (normalt utan CT-vattenextraktet), C (modell utan vattenextraktet), D (modell med hög- dos CT vattenhaltigt extrakt tillsatt), E (modell med medeldos CT vattenhaltigt extrakt tillsatt) och F (modell med lågdos CT vattenhaltigt extrakt tillsatt).Degrupperna behandlades enligt följande: normalgruppen dränktes med normal saltlösning, modellgruppen dränktes med cefixim (30 mg/kg, Shiyao Group OuyiPharmaceutical Co., Ltd., Shijiazhuang, Kina) och normalsaltlösning, högdosgruppen dränktes med cefixime och 221,14 mg/kg av det vattenhaltiga CT-extraktet, medeldosgruppen dränktes med cefixim och 165,54 mg/kg av det vattenhaltiga extraktet, och lågdosgruppen dränktes med cefixim och 110,57 mg/kg av det vattenhaltiga extraktet.DeAgroup dränktes med 165,54 mg/kg vattenhaltigt extrakt och ingen cefixim tillsattes. Cefixime was2 Evidensbaserad komplementär och alternativ medicin administrerades dagligen kl. 12:00 och andra substanser administrerades dagligen kl. 15:00. Under experimenten hölls C-, D-, E- och F-grupperna i modelltillståndet för tarmsjukdomar.Deavföring samlades var sjunde dag på asterilt manövrerbart bord och förvarades vid -20 grader.

2.4. Histopatologisk observation av möss kolon.

I slutet av experimentet dödades mössen genom cervikal dislokation och deras koloninnehåll samlades på asterilt operationsbord och lagrades vid -80 grader; samtidigt fixerades kolonvävnadsprover i 10 procent neutralt formalin.Den, proverna dehydrerades med användning av gradientkoncentration av etanol, hyaliniserades med xylen, inbäddade i paraffin, sektionerades och färgades med hematoxylin-eosin. Morfologiska förändringar i tjocktarmens slemhinna observerades och jämfördes med ett optiskt mikroskop. Villuslängd och kryptdjup i tjocktarmen mättes och förhållandet mellan villuslängd och kryptdjup (V/C-värde) beräknades (51).

2.5. DNA-extraktion och bibliotekskonstruktion.

DNA extraherades från avföringen med hjälp av EZNA ® Soil DNA Kit (Omega Bio-Tek, Norcross, GA, USA) enligt tillverkarens protokoll. DNA-kvaliteten bestämdes med hjälp av en fluorometer (QuantiFluor™–ST, Promega Corporation, USA). Parade primrar i V3-V4-regionen av 16s rDNA designades för att amplifiera regionen och producera 466 bp DNA-fragment.Deframåtriktad primer var 341F (-5-CCTACGGGNGGCWGCAG-3-), och den omvända primern var 806R (-5-GGACTACHVGGGTATCTAAT-3-). Varje PCR-volym var 25 μL, innehållande 2,5 μL 10 × PCR-buffert, 2 μL dNTPs, 1 μL av varje primer och 20–30 ng mall-DNA. Sedan fästes de indexerade adaptrarna till änden av amplikonerna för att generera sekvenseringsbibliotek. Biblioteken validerades med användning av en QuantiFluor™-fluorometer och kvantifierades till 10 nmol.

2.6. 16s rRNA-gensekvensering och mikrobiell gemenskapsanalys.

Illumina-plattformen (Illumina MiSeq) användes för att erhålla 2 × 250 bp parade data. Operationella taxonomienheter (OTU) erhölls med hjälp av Uparse-programvara genom standardklustring med 97 procents likhet. Den naiva Bayesianska tilldelningsalgoritmen för RDP-klassificeraren användes för att anpassa OTU:erna med Greengene-databasen Release 13.5 och utföra artkommentarer. Alfa-diversiteten hos tarmmikrobiota beräknades med hjälp av Shannon- och Simpsonindexen, och skillnaderna mellan grupperna analyserades genom linjär diskriminantanalys Effektstorlek (LEfSe). Beta-mångfalden analyserades genom principal koordinatanalys (PCoA) av Bray-Curtis olikheter. PICRUST2 användes för att uppskatta den mikrobiella metaboliska kapaciteten hos tarmmikrobiomet [42].

2.7. Statistisk dataanalys.

SPSS 20 användes för envägsANOVA, och experimentdata uttrycktes som X ± S; X anger medelvärdet och S anger standardavvikelsen.

3. Resultat

3.1. Effekten av CT-vattenextraktet på kolonmorfologi.

De representativa föreningarna (echinakosid och acteosid) och deras koncentrationer av CT-extraktet validerades av HPLC (Figur S1). För att bestämma effekten av det vattenhaltiga extraktet på tarmen undersökte vi längden på tjocktarmen och djupet av fördjupningarna efter behandlingen med det CTaqueous extraktet.Detjocktarmsvilli i normal- och högdosgrupperna (A, B och D) var längre och fingerliknande, medan kolonvilli i modell- och lågdosgrupperna (C och F) var korta, och spetsarna på tjocktarmsvilli var brutna ( Figur 1). Följaktligen ökade högdos CT vattenhaltigt extrakt signifikant längden av kolon villi och minskade fördjupningsdjupet hos möss med tarmsjukdomar jämfört med temamus i modellgruppen (P < 0.01).="" däremot="" skilde="" sig="" fördjupningsdjupet="" inte="" signifikant="" mellan="" högdosgruppen="" och="" normalgruppen="" (p=""> 0,05) (tabell S1). Dessa resultat indikerade att den höga dosen av det vattenhaltiga CT-extraktet kan förbättra morfologin inuti tjocktarmen hos möss i tarmsjukdomar.

3.2. Effekten av CT-vattenextraktet på mångfalden av tarmmikrobiota.

Vi utförde 16s rRNA-gensekvensering för att undersöka den potentiella orsaken till de morfologiska förändringarna inuti tjocktarmen och undersöka förändringarna i tarmmikrobiota efter behandling med CT-vattenextraktet. Ett genomsnitt av 100 553 effektiva taggar, från 77 734 till 125 144, erhölls från raw-data (Tabell S2).Desetags grupperades i 4932 OTUs (tabell S3). Vi analyserade sedan mångfalden av tarmmikrobiotan baserat på dessa OTU. Shannon- och Simpson-indexen visade ingen skillnad mellan A-gruppen (normalt med CT-vattenextraktet) och B-gruppen (normalt utan CT-vattenextraktet) (Figur 2(a)). Detta indikerade att i möss utan cefiximbehandling, kan CT-vattenextraktet inte ha haft några ytterligare fördelaktiga eller skadliga effekter på mångfalden av tarmmikrobiotan. Men -mångfalden i modellgruppen (C) visade en minskande trend jämfört med normalgrupperna. Mössen som behandlats med hög- och medeldos CT-vattenextrakt visade tecken på -diversitetsåterhämtning, medan ett sådant fenomen inte observerades hos möss som behandlats med lågdos CT-vattenextrakt (Figur 2(a)). Samtidigt avslöjade PCoA att de normala grupperna (A och B) och tarmstörningar som administrerades högdos (D) och medeldos (E) CT-vattenhaltiga extrakt tenderade att ha kortare avstånd mellan proverna än de i modellgruppen och i lågdosen CT vattenhaltigt extrakt tilläggsgrupp (F) (Figur 2(b)). Dessa resultat indikerade att det vattenhaltiga CT-extraktet kunde hjälpa till att förbättra mångfalden av tarmmikrobiotan hos möss i tarmsjukdomar.

3.3. Förändringar i sammansättningen av tarmmikrobiota behandlad med CT-vattenextraktet.

*Kompositionsprofiler för mikrobiota jämfördes mellan olika grupper. På fylumnivå var den relativa förekomsten av proteobakterier i modellgruppen högre än i de andra grupperna (Figur 3(a)). * Ökningen av proteobakterier antydde att mikrobiomet hos modellmöss förändrades av cefixim och att CT-vattenextraktet kan gynna tarmmikrobiotan eftersom den ökade förekomsten av proteobakterier är en ahub-markör för störd tarmflora [43–45]. Dessutom, på släktnivå, minskade den relativa förekomsten av Lactobacillus i modellgruppen jämfört med den i normal- och högdosgrupperna; den ökade dock jämfört med den i medel- och lågdosgruppen (Figur 3(b)). Dessa resultat indikerade att det högdoserade CTaqueous-extraktet kan främja tillväxten av vissa bakterier från släktet Lactobacillus. Skillnaden i mikrobiota mellan de studerade grupperna bestämdes ytterligare enligt LEfSe-analysen. *analys visade att, efter behandlingen med cefixim, ökade de relativa förekomsterna av Turicibacter, Alphaproteobacteria, Acidobacteria, Betaproteobacteriales och Chloroflexi signifikant, medan de relativa förekomsterna av Lactobacillus, Eubacterium_nodatum_Ps,udongroup, och Christensenellaceae_R-7_gruppen minskade signifikant jämfört med de i den normala gruppen (Figur 4(a)). Påfallande nog, när modellgruppen kompletterades med högdos CT-vattenextrakt, ökade de relativa förekomsterna av Muribaculaceae, Lactobacillus, Kineosporiaceae, Eubacterium nodatum-gruppen och Pedobacter signifikant jämfört med de i modellgruppen. Samtidigt minskade de relativa förekomsterna av Rhodobacter, Ruminococcaceae UCG_013, Roseburia, Ruminiclostri dium_9 och Candidatus Stoquefichus signifikant jämfört med de i modellgruppen (Figur 4(b)).

3.4. Funktioner hos tarmmikrobiotan relaterade till behandlingen med CT-vattenextraktet.

Vi använde programvaran PICRUST2 för att förutsäga de metaboliska vägarna i tarmmikrobiotan, och den normala gruppen användes som referens för att analysera förändringarna i andra grupper. Under cefiximbehandlingen ökade den relativa förekomsten av etylbensennedbrytning, biosyntesen av sideroforgruppens icke-ribosomala peptider och metabolismen av xenobiotika genom cytokrom P450-vägar; efter behandlingen med hög- och medeldos CT-vattenextrakt återgick deras relativa överflöd till normala nivåer. Samtidigt minskade den relativa mängden av metabolismen av cyanoaminosyra under cefiximbehandlingen; den ökade dock efter behandlingen med högdos CT-vattenextraktet. Dessutom var förändringarna i olika metabolitvägar efter behandlingen med cefixim signifikant jämfört med de i den normala gruppen; dock kunde tillsatsen av det CTaqueous extraktet förhindra alltför stora förändringar (Figur 5).

4. Diskussion

Kolonmorfologi kan förändras av tillväxt, matsmältning och absorption, immunreglering och reparation av tarmskador [46–50]. *V/C-förhållandet kan heltäckande återspegla matsmältningsstatusen i tarmkanalen och är direkt proportionell mot matsmältnings- och absorptionskapaciteten hos gutttrakten [51, 52]. I den aktuella studien visade villi och recessesbiopsi och statistiska data att högdosvattenextraheraskulle delvis kunna förbättra den defekta morfologin inuti tjocktarmen.För att undersöka hur den vattenhaltigaextraheraförändrar tarmmorfologi och påverkar tarmmikrobiotan, arbetade vi bakåt från förändringar i tarmfloran. Vi fann att den relativa förekomsten av Proteobacteria, en navmarkör för störd tarmflora, ökade under behandlingen med cefixim jämfört med den utan cefiximbehandling.*e relativa förekomsten av andra navmarkörer, Bacteroidetes och Firmicutes, hade inga signifikanta förändringar, även om dessa grupper är dominerande i den mänskliga tarmen; förhållandet mellan Bacteroidetes/Firmicutes visade sig vara minskat hos överviktiga personer jämfört med det hos magra personer, och detta förhållande visade sig öka med viktminskning hos personer på två typer av lågkaloridieter [38, 41, 43–45, 48, 53, 54]. Samtidigt var Turicibacter, som är associerad med fetma [55], signifikant förhöjd i modellgruppen jämfört med den i de andra grupperna. Speciellt förbättrades mångfalden av tarmmikrobiota i modellmössen genom tillsats av det CTaqueous extraktet. Vi noterade några specifika tarmbakteriemöss under olika behandlingar; till exempel var Lactobacillus och Muribaculaceae de två huvudsakliga bakteriesläktena som ökade i gruppen som behandlades med högdos CT-vattenextrakt jämfört med de i modellgruppen (Figur 4). Nyligen genomförda studier har visat att polysackariderna av CT-vattenextrakt har betydande antioxidantaktiviteter in vitro [56] och kan främja tillväxten av vissa mjölksyrabakterier, vilket kan gynna värdhälsan [43]. Parallellt är Muribaculaceae probiotiska organismer kopplade till livslängd [57]. Dessa antydde att mekanismen genom vilken det vattenhaltiga CT-extraktet förbättrar tarmmikrobiotan kan vara att främja eller skydda tillväxten av probiotiska organismer. En annan bakterie värd att notera var bakterien YE57. Även om det högdoserade CTaqueous-extraktet främjade den relativa förekomsten av bakterie YE57 i den aktuella studien (Figur 4), har tidigare studier funnit att dess förekomst var högre i normal guttan än i tarmen som behandlats med högkoncentrerad herbaltea-rester [58] och att dess överflöd minskade efter interventionen med Bacillus licheniformis kombinerat med XOS (xylooligosackarider) [59]. *oss, denna bakteries roll i tarmmikrobiotan förtjänar ytterligare studier. Dessutom kan ett relativt litet antal prover i denna studie orsaka mätning av falskt positiva och falskt negativa, och framtida studier på större prover föreslås för att validera de identifierade bakteriella markörerna.

CT vattenhaltigextraherasammansättningen kan vara viktig för dess effekter på sammansättningen och funktionella förändringar i tarmmikrobiotan hos möss med tarmsjukdomar. PHG är vanliga aktiva komponenter som finns i CD och CT, och echinakosid identifierades som den viktigaste PHG inCT [60]. Under de senaste decennierna har echinakosid visat sig ha många farmakologiska aktiviteter, såsom antiåldrande och neuroprotektiva effekter, förbättring av hjärtfunktionen, minskning av hyperlipidemi och hyperglykemi och förebyggande av fetma-inducerad diabetes och metabolt syndrom [53, 61-65]. Faktum är att vi upptäckte förändringar i de metaboliska vägarna i tarmmikrobiotan.*e behandling av cefixim ledde till anrikning av bakterier relaterade till etylbensennedbrytning och biosyntes av icke-ribosomala peptider från sideroforgruppen, medan behandlingar med hög- och medeldos CT-vattenhaltigextraherakunde lindra dessa förändringar, vilket indikerar att detta extrakt modererade bakteriesamhället relaterade till dessa funktioner. Dessutom indikerade den ökade bakterieberikningen relaterad till cyanoaminosyrametabolismvägen under behandlingen med högdosvattenextraktet och dess minskade anrikning i modellmöss att CT-vattenextraktet kan främja metabolismen av cyanoaminosyra. *e förändringar i relevanta metaboliter kan ge detta vattenextrakt med farmakologiska aktiviteter.

Referenser

[1] A. Heintz-Butchart och P. Wilmes, "Human gut microbiome: function matters," Trends in Microbiology, vol. 26, nr. 7, s. 563–574, 2018.

[2] CA Thaiss, N. Zmora, M. Levy och E. Elinav, "*emicrobiome and medfödd immunitet," Nature, vol. 535, nr. 7610, s. 65–74, 2016.

[3] G. Quaranta, M. Sanguinetti och L. Masucci, "Fecal microbiota transplantation: a potential tool for treatment of humanfemale reproductive tract diseases," Frontiers in Immunology, vol. 10, sid. 2653, 2019.

[4] GA Weiss och T. Hennet, "Mekanismer och konsekvenser av intestinal dysbios," Cellular and Molecular Life Sciences, vol. 74, nr. 16, s. 2959–2977, 2017.

[5] Y. Li, Y. Peng, P. Ma et al., "Antidepressiva-liknande effekter av Cistanche tubulosa-extrakt på kronisk oförutsägbar stressråttor genom återställande av tarmmikrobiotahomeostas," Frontiersin Pharmacology, vol. 9, sid. 967, 2018.

[6] L. Fan, Y. Peng, J. Wang, P. Ma, L. Zhao och X. Li, "Totalglykosider från stammar av Cistanche tubulosa lindrar depressionsliknande beteenden: dubbelriktad interaktion mellan fytokemikalier och tarmmikrobiota," Phytomedicine, vol. 83, artikel-ID 153471, 2021.

[7] Y. Li, Y. Peng, M. Wang, P. Tu och X. Li, "Human gastrointestinal metabolism of the cistanches herba water extract invitro: klargörande av den metaboliska profilen baserat på omfattande metabolitidentifiering i magsaft, intestinaljuice, mänskliga tarmbakterier och tarmmikrosomer," Journal of Agricultural and Food Chemistry, vol. 65, nr. 34, s. 7447–7456, 2017.

[8] H. Wang, Y. Sun, W.-C. Ye et al., "Antioxidative phenylethanoid and phenolic glycosiders from Picrorhiza scrophulariiflora," Chemical and Pharmaceutical Bulletin, vol. 52, nej. 5, s. 615–617, 2004.

[9] S.-L. Ji, K.-K. Cao, X.-X. Zhao et al., "Antioxidant aktivitet av fenyletanoidglykosider på glutamatinducerad neurotoxicitet," Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry, vol. 83, nr. 11, s. 2016–2026, 2019.

[10] Q. Wang, J. Dong, W. Lu et al., "Fenyletanolglykosider från Cistanche tubulosa förbättrade reproduktiv dysfunktion genom att reglera testikulära steroider genom CYP450-3 -HSDpathway," Journal of Ethnopharmacology, vol. 251, artikel ID112500, 2020.

[11] S.-P. Du, L. Ma, J. Zhao, S.-L. Zhang och T. Liu, "Fenyletanolglykosider från Cistanche tubulosa undertrycker aktivering av leverstjärnceller och blockerar ledning av signalvägar i TGF- 1/smad som potentiella medel mot hepatisk fibros," Molecules, vol. 21, nr. 1, sid. 102, 2016.

[12] S.-P. Du, J. Zhao, L. Ma, M. Tudimat, S.-L. Zhang och T. Liu,"Förebyggande effekter av fenyletanoidglykosider från Cistanche tubulosa på bovint serumalbumin-inducerad leverfibros hos råttor," DARU Journal of Pharmaceutical Sciences, vol. 23, nr. 1, sid. 52, 2015.

[13] T. Morikawa, H. Xie, Y. Pan et al., "En recension av biologiskt aktiva naturprodukter från en ökenväxt Cistanche tubulosa," Chemical and Pharmaceutical Bulletin, vol. 67, nr. 7, s. 675–689, 2019.

[14] J. Li, J. Li, A. Aipire et al., "Fenyletanoidglykosider från Cistanche tubulosa hämmar tillväxten av B16-F10-celler både in vitro och in vivo genom induktion av apoptos via mitokondrieberoende väg, " Journal of Cancer, vol. 7, nej. 13, s. 1877–1887, 2016.

[15] Y. Hu, J. Huang, Y. Li et al., "Cistanche deserticola polysaccharide inducerar melanogenes i melanocyter och minskar oxidativ stress via aktiverande NRF2/HO-1-väg," Journalof Cellular and Molecular Medicine, vol. 24, nr. 7, s. 4023–4035, 2020.

[16] S. Peng, P. Li, P. Liu et al., "Cistanches lindrar sevofluraninducerad kognitiv dysfunktion genom att reglera PPAR-c-beroende antioxidant och antiinflammatorisk hos råttor," Journalof Cellular and Molecular Medicine, vol. 24, nr. 2, s. 1345–1359, 2020.

[17] Y. Liu, H. Wang, M. Yang et al., "Cistanche deserticolapolysaccharides skyddar PC12-celler mot OGD/RP-inducerad skada," Biomedicine & Pharmacotherapy, vol. 99, s. 671–680,2018.

[18] Z. Fu, L. Han, P. Zhang et al., "Cistanche polysaccharidesenhance echinacoside absorption in vivo och påverkar gutmicrobiota," International Journal of Biological Macromolecules, vol. 149, s. 732–740, 2020.

[19] NT Williams, "Probiotics," American Journal of Health-System Pharmacy, vol. 67, nr. 6, s. 449–458, 2010.[20] R. Ashraf och NP Shah, "Immunsystemstimulering av probiotiska mikroorganismer," Critical Reviews in Food Scienceand Nutrition, vol. 54, nr. 7, s. 938–956, 2014.

[21] G. La Fata, P. Weber och MH Mohajeri, "Probiotika och tarmens immunsystem: indirekt reglering," Probiotics andAntimicrobial Proteins, vol. 10, nr. 1, s. 11–21, 2018.

[22] MA Zocco, LZ dal Verme, F. Cremonini et al., "Efficacy oflactobacillus GG för att upprätthålla remission av ulcerös kolit," Alimentary Pharmacology and 8erapeutics, vol. 23, nr. 11, s. 1567–1574, 2006.

[23] MJ Saez-Lara, C. Gomez-Llorente, J. Plaza-Diaz och A. Gil,"*e roll av probiotiska mjölksyrabakterier och bifidobakterier i förebyggande och behandling av inflammatoriska tarmsjukdomar och andra relaterade sjukdomar: en systematisk genomgång av randomiserade mänskliga kliniska prövningar," BioMed Research International, vol. 2015, artikel-ID 505878, 15 sidor, 2015.

[24] MAO Dawood, S. Koshio, M. Ishikawa, et al., "Effekter av kosttillskott av Lactobacillus rhamnosus eller/och Lactococcus lactis på tillväxt, tarmmikrobiota och immunsvar av röd havsruda, Pagrus major," Fish & ShellfishImmunology, vol. 49, s. 275–285, 2016.

[25] A. Sivan, L. Corrales, N. Hubert et al., "Kommensal bifidobacterium främjar antitumörimmunitet och underlättar anti-PD-L1-effektivitet," Science, vol. 350, nr. 6264, s. 1084–1089,2015.

[26] PJ Whorwell, L. Altringer, J. Morel et al., "Efficacy of anencapsulated probiotic Bifidobacterium infantis 35624 inwomen with irritable bowel syndrome," 8e American Journal of Gastroenterology, vol. 101, nr. 7, s. 1581–1590, 2006.

[27] Y. Wang, Y. Wu, Y. Wang et al., "Antioxidantegenskaper hos probiotiska bakterier," Nutrients, vol. 9, nr. 5, sid. 521, 2017.

[28] JMC Gutteridge, R. Richmond och B. Halliwell, "Hämning av den järnkatalyserade bildningen av hydroxylradikaler från superoxid och av lipidperoxidation av desferrioxamin," Biochemical Journal, vol. 184, nr. 2, s. 469–472, 1979.

[29] E. Deriu, JZ Liu, M. Pezeshki, et al., "Probiotiska bakterier reducerar salmonella Typhimurium tarmkolonisering genom att konkurrera om järn," Cell Host & Microbe, vol. 14, nr. 1, s. 26–37, 2013.

[30] T. Kullisaar, M. Zilmer, M. Mikelsaar, et al., "Två antioxidativa laktobacillistammar som lovande probiotika," International Journal of Food Microbiology, vol. 72, nr. 3, s. 215–224, 2002.

[31] JG LeBlanc, S. del Carmen, A. Miyoshi, et al., "Användning av superoxiddismutas och katalasproducerande mjölksyrabakterier TNBS inducerade Crohns sjukdom hos möss," Journal of Biotechnology, vol. 151, nr. 3, s. 287–293, 2011.

[32] M. Rossi, A. Amaretti och S. Raimondi, "Folatproduktion av probiotiska bakterier," Nutrients, vol. 3, nr. 1, s. 118–134,2011.

[33] A. Pompei, L. Cordisco, A. Amaretti, et al., "Administrering av folatproducerande bifidobakterier förbättrar folatstatus hos Wistar-råttor," 8e Journal of Nutrition, vol. 137, nr. 12, s. 2742–2746, 2007.

[34] L.-X. Wang, K. Liu, DW Gao och JK Hao, "Protectiveeffects of two Lactobacillus Plantarum-stammar in hyperlipidemic möss," World Journal of Gastroenterology, vol. 19, nej. 20, s. 3150–3156, 2013.

[35] EO Petrof, K. Kojima, MJ Ropeleski, et al., "Probiotika hämmar nukleär faktor-KB och inducerar värmechockproteiner inkoloniska epitelceller genom proteasomhämning," Gastroenterology, vol. 127, nr. 5, s. 1474–1487, 2004.

[36] A. Seth, F. Yan, DB Polk och RK Rao, "Probiotika förbättrar den väteperoxid-inducerade epitelbarriäravbrottet genom en PKC- och MAP-kinasberoende mekanism," American Journal of Physiology-Gastrointestinal andLiver Physiology, vol. 294, nr. 4, sid. G1060–G1069, 2008.

[37] M. Gomez-Guzman, M. Toral, M. Romero, et al., "Antihypertensiva effekter av probiotika lactobacillus-stammar i spontant hypertensiva råttor," Molecular Nutrition & FoodResearch, vol. 59, nr. 11, s. 2326–2336, 2015.

[38] H. Zeng, L. Huang, L. Zhou, P. Wang, X. Chen och K. Ding, "En galaktoglukan isolerad från Cistanchedeserticola YC Ma. och dess bioaktivitet på tarmbakteriestammar," Carbohydrate Polymers, vol. 223, artikel-ID 115038, 2019.

[39] S. Zheng, X. Jiang, L. Wu, Z. Wang och L. Huang, "Chemicaland genetisk diskriminering av cistanches herba baserat på UPLC-QTOF/MS och DNA-streckkodning," PLoS One, vol. 9, nej. 5, artikel-id e98061, 2014.

[40] M. Li, T. Xu, F. Zhou et al., "Neuroprotective effects of fourphenylethanoid glycosider on H2O2-induced apoptos onPC12 cells via Nrf2/ARE pathway," International Journal of Molecular Sciences, vol. 19, nr. 4, sid. 1135, 2018.

[41] A. Wu, Z. Yang, Y. Huang et al., "Naturliga fenyletanoidglykosider isolerade från Callicarpa kwangtungensis undertryckt lipopolysackarid-medierad inflammatorisk respons via aktiverande Keap1/Nrf2/HO-1-väg i RAW 264.7-makrofager. " Journal of Ethnopharmacology, vol. 258, artikel-id 112857, 2020.

[42] GM Douglas, VJ Maffei, JR Zaneveld et al., "PICRUSt2for prediction of metagenom functions," Nature Biotechnology, vol. 38, nr. 6, s. 685–688, 2020.

[43] H.-L. Li, L. Lu, X.-S. Wang et al., "Alteration of gut microbiotand inflammatory cytokine/chemokine profiles in 5-fluoro uracil induced intestinal mucositis," Frontiers in Cellular andInfection Microbiology, vol. 7, sid. 455, 2017.

[44] M. Pammi, J. Cope, PI Tarr, et al., "Intestinal dysbios för tidigt födda barn före nekrotiserande enterokolit: en systematisk översikt och metaanalys," Microbiome, vol. 5, nr. 1, sid. 31, 2017.

[45] N.-R. Shin, TW When och J.-W. Bae, "Proteobacteria:microbial signature of dysbios in gut microbiota," Trends inBiotechnology, vol. 33, nr. 9, s. 496–503, 2015.

[46] M. de Oliveira Belem, CP Cirilo, AP de Santi-Rampazzo et al., "Tarmmorfologijusteringar orsakade av kostrestriktioner förbättrar näringsstatusen under åldrandeprocessen hos råttor," Experimental Gerontology, vol. 69, s. 85–93,2015.

[47] B. Potsic, N. Holliday, P. Lewis, D. Samuelson, V. DeMarco och J. Neu, "Glutamintillskott och deprivation: effekt på artificiellt uppfödda råttor tunntarmsmorfologi," Pediatric Research, vol. 52, nr. 3, s. 430–436, 2002.

[48] ​​JL Daniels, RJ Bloomer, M. van der Merwe, SL Davis, KK Buddington och RK Buddington, "Tarmanpassningar till en kombination av olika dieter med och utan uthållighetsträning," Journal of the International Society ofSports Nutrition, vol. 13, nr. 1, sid. 35, 2016.

[49] L. Muñoz, MJ Borrero, M. Ubeda et al., "Intestinal immun 'dysregulation driven av dysbios främjar barriäravbrott och bakteriell translokation hos råttor med cirros," Hepatology, vol. 70, nej. 3, s. 925–938, 2019.

[50] X. Li, Y. Wu, Z. Xu et al., "Effekter av hetiao jianpi avkok på tarmskada och reparation hos råttor med antibiotika-associerad diarré," Medical Science Monitor, vol. 26, artikel ID921745, 2020.

[51] Y. Xie, F. Ding, W. Di et al., "Inverkan av en diet med hög fetthalt på intestinala stamceller och epitelbarriärfunktion hos medelålders honmöss," Molecular Medicine Reports, vol. 21, nr. 3, s. 1133–1144, 2020.

[52] BL Bivolarski och EG Vachkova, "Morfologiska och funktionella händelser i samband med avvänjning hos kaniner," Journal ofAnimal Physiology and Animal Nutrition, vol. 98, nr. 1, s. 9–18, 2014.

[53] H. Shimoda, J. Tanaka, Y. Takahara, K. Takemoto, S.-J. Shan och M.-H. Su, "*e hypokolesterolemiska effekter av Cistanchetubulosa-extrakt, en kinesisk traditionell råmedicin, möss," 8e American Journal of Chinese Medicine, vol. 37, nr. 6, s. 1125–1138, 2009.[54] RE Ley, PJ Turnbaugh, S. Klein och JI Gordon, "Humangutmikrober förknippade med fetma," Nature, vol. 444, nr. 7122, s. 1022-1023, 2006.

[55] J.-Y. Kim, YM Kwon, I.-S. Kim et al., "Effekter av tillskott av bruntång laminaria japonica på serumkoncentrationer av IgG, triglycerider och kolesterol, och intestinal mikrobiotasammansättning hos råttor," Frontiers in Nutrition, vol. 5, sid. 23, 2018.

[56] W. Zhang, J. Huang, W. Wang et al., "Extraktion, rening, karakterisering och antioxidantaktiviteter av polysackarider från Cistanche tubulosa," International Journal of BiologicalMacromolecules, vol. 93, s. 448–458, 2016.

[57] M. Sibai, E. Altuntas¸, B. Yıldırım, G. Ozt¨urk, S. Yıldırım och ¨T. Demircan, "Microbiome and longevity: a high abundance oflongevity-linked Muribaculaceae in the gut of the long-livingrodent Spalax leucodon," OMICS: A Journal of IntegrativeBiology, vol. 24, nr. 10, s. 592–601, 2020.

[58] Y. Xie, Z. Chen, D. Wang et al., "Effects of fermented herbaltea rests on the intestinal microbiota characteristics of Holstein heifers under heat stress," Frontiers in Microbiology, vol. 11, sid. 1014, 2020.

[59] Y. Li, M. Liu, H. Liu et al., "Orala tillskott av kombinerade Bacillus licheniformis zhengchangsheng och xylooligosackarider förbättrar fettrik dietinducerad fetma och modulerar tarmmikrobiotan hos råttor," BioMed Research International, vol. 2020, artikel-id 9067821, 17 sidor, 2020.

[60] Y. Jiang och P.-F. Tu, "Analysis of chemical constituents incistanche species," Journal of Chromatography A, vol. 1216, nr. 11, s. 1970–1979, 2009.

[61] F. Li, Y. Yang, P. Zhu et al., "Echinacoside främjar benbildning genom att öka OPG/RANKL-förhållandet i MC3T3-E1-celler," Fitoterapia, vol. 83, nr. 8, s. 1443–1450, 2012.

[62] F. Tang, Y. Hao, X. Zhang och J. Qin, "Effekt av echinacosideon njurfibros genom hämning av TGF- 1/Smads signalväg i db/db-mössmodellen för diabetisk nefropati," Drug Design, Development and 8erapy, vol. 11, s. 2813–2826, 2017.

[63] W.-T. Xiong, L. Gu, C. Wang, H.-X. Sun och X. Liu, "Antihyperglycemic and hypolipidemic effects of Cistanche tubulosa in typ 2 diabetic db/db-möss," Journal of Ethnopharmacology, vol. 150, nr. 3, s. 935–945, 2013.

[64] X.-x. Bao, H.-h. Ma, H. Ding, W.-w. Li och M. Zhu, "Preliminär optimering av en formel för kinesisk örtmedicin baserad på de neuroprotektiva effekterna i en råttmodell av rotenoninducerad Parkinsons sjukdom," Journal of IntegrativeMedicine, vol. 16, nr. 4, s. 290–296, 2018.

[65] Y. Chen, Y.-Q. Li, J.-Y. Fang, P. Li och F. Li, "Etablering av den samtidiga experimentella modellen för osteoporos i kombination med Alzheimers sjukdom hos råtta och de dubbla effekterna av ekinakosid och acteosid från Cistanche tubulosa," Journal of Ethnopharmacology, vol. 257, artikel-id 112834, 2020.

[66] M. Hensel, AP Hinsley, T. Nikolaus, G. Sawers och B. C. Berks, "*e genetiska grunden för tetrationatandning i Salmonella typhimurium," Molecular Microbiology, vol. 32, nej. 2, s. 275–287, 1999.

[67] SE Winter, P. Thiennimitr, MG Winter et al., "Tarminflammation ger en respiratorisk elektronacceptor för Salmonella," Nature, vol. 467, nr. 7314, s. 426–429, 2010.

[68] SE Winter, MG Winter, MN Xavier et al., "Värdhärlett nitrat ökar tillväxten av E. coli i den inflammerade tarmen," Science, vol. 339, nr. 6120, s. 708–711, 2013.

[69] C. Lupp, ML Robertson, ME Wickham et al., "Värdmedierad inflammation stör tarmmikrobiotan och främjar överväxten av Enterobacteriaceae," Cell Host & Microbe, vol. 2, nr. 2, s. 119–129, 2007.

[70] B. Stecher, R. Robbiani, AW Walker et al., "Salmonellaenterica serovar typhimurium utnyttjar inflammation för att konkurrera med tarmmikrobiotan," PLoS Biology, vol. 5, nej. 10, s. e244–2189, 2007.

[71] V. Mishra, C. Shah, N. Mokashe, R. Chavan, H. Yadav och J. Prajapati, "Probiotika som potentiella antioxidanter: en systematisk översikt," Journal of Agricultural and Food Chemistry, vol. 63, nr. 14, s. 3615–3626, 2015.

[72] JMP Mart´ın, PF Freire, L. Daimiel et al., "*e antioxidantbutylated hydroxyanisol potentiates the toxic effects ofpropylparaben in cultured mammalia cells," Food andChemical Toxicology, vol. 72, s. 195–203, 2014.

[73] RS Lanigan och TA Yamarik, "Slutlig rapport om säkerhetsbedömningen av BHT," International Journal of Toxicology, vol. 21, nr. 2, s. 19–94, 2002