Urinsyrasänkande effekt och mekanism för acteosid och echinacoside extraherad från cistanche tubulosa
Mar 03, 2025
Abstrakt:Syftar till att undersöka urinsyrasänkande effekter och mekanismer för acteosid (AS) och echinacoside (ECH) extraherad frånCistanche tubulosa.
MetoderHyperuricemia (HUA) råttmodell etablerades med användning av kaliumoxonat (1,5 g · kg -1 · d -1) i kombination med adenin (100 mg · kg {{5} · d {6}}). HUA -modellråttorna delades slumpmässigt i en modellkontrollgrupp, en allopurinolgrupp (30 mg · kg -1 · d -1), så låg och hög (50, 100 mg · kg {{12} {d -1} dose -grupp mg · kg -1 · d -1) dosgrupper. En normal kontrollgrupp upprättades tidigare. Efter fyra veckors administrering användes blodbiokemianalysatorn för att detektera SuA -urea, crea, adenosindeaminas (ADA) och urinsyra (UUA) i urin. Enzymlänkad immunosorbentanalys användes för att detektera xantinoxidasnivåer (XOD) i serum. Njurvävnad uppsamlades och njurkoefficienten vägdes och beräknades. Hematoxylin eosin (HE) färgning användes för att observera patologiska förändringar i njurarna. Immunohistokemi (IHC) och PCR i realtid användes för att detektera protein- och mRNA -expressionsnivåerna för urattransporter 1 (URAT1), glukostransporter 9 (GLUT9), organisk anjontransportör 1 (OAT1) och organisk anjontransportör 3 (OAT3) i nävelvävnad. Resultat AS och ECH kan förbättra njurfunktionen i HUA -modellråttor, minska blodnivåerna i urinsyran, främja utsöndring av urinsyran, nedreglera serumnivåer av ADA och XOD, och uppreglera protein och mRNA -uttryck av URAT1 och GLUT9 i njurvävnad, medan uppreglerande protein och mRNA -uttryck av Oat1 och Oat3 i njurvävnad.
Slutsatser Fenyletanoidglykosiderna AS och ECH från cistanche tubulosa kan utöva urinsyrasänkande effekter genom att förbättra njurfunktionen i HuA -modellråttor, minska ADA- och XOD -nivåer och reglera uttrycket av URAT1, GLUT9, OAT1 och OAT3.
Nyckelord: Cistanche Tubulosa; acteosid; echinacoside; hyperuricemi; reducera urinsyra; mekanism
Cistanche Tubulosa -extrakt med 16% acteoside
Hyperuricemia (HUA) är en metabolisk sjukdom orsakad av störd purinmetabolism i människokroppen, vilket leder till förhöjda blodnivåer i blodet [1]. Det diagnostiseras vanligtvis när blodnivåerna överstiger 7. 0 mg · dl⁻ (416. 0 μmol·l⁻) hos män och 6. 0 mg · dl⁻ (357. 0 μmoldret. Utvecklingen av hyperuricemi är främst relaterad till faktorer som högkarieter, kronisk alkoholkonsumtion, medicinering av medicinering och hypotyreos. Det ökar inte bara risken för hjärt -kärlsjukdomar, diabetes och hypertoni [3-4] utan påverkar också patienternas hälsa avsevärt.
För närvarande inkluderar kliniska behandlingar för hyperurikemi främst läkemedel som hämmar urinsyratroduktion och främjar utsöndring av urinsyran. Dessa behandlingar har emellertid vissa begränsningar för patienter med nedsatt lever- eller njurfunktion [5-6]. Därför är att utforska effektiva läkemedel med låga biverkningar av stor betydelse för förebyggande och behandling av hyperuricemi.
Cistanche Tubulosa (Schenk) R. Wight, som vanligtvis används i traditionell kinesisk medicin som en njurtonifierande ört, används för att behandla tillstånd som impotens, infertilitet, brist på essens och blod, svaghet i nedre ryggen och knäna, muskelsvaghet och förstoppning på grund av tarm torrhet [7]. Studier har visat detCistanche tubulosahar neurobeskyttande [8], antiinflammatorisk [9], benmetabolismreglerande [10] och effektförbättrande effekter vid kemoterapi för cancerpatienter [11]. Bland dess olika aktiva komponenter är fenyletanoidglykosider de vanligaste.
Acteoside (AS) och Echinacoside (ECH), två fenyletanoidglykosider med högt innehåll iCistanche tubulosa, uppvisar stark biologisk aktivitet och har betydande potential för utveckling och tillämpning. Följaktligen valde vår forskargrupp AS och ECH för ytterligare studier. Genom nätverksfarmakologiska förutsägelser och före experiment hos möss upptäckte vi att fenyletanoid glykosidutdrag frånCistanche tubulosakan ha en viss urinsyrasänkande effekt. Vägarna och mekanismerna för dessa effekter förblir emellertid oklara.
Genom att använda mekanismerna för urinsyratroduktion och dess primära utsöndringsvägar som forskningsfokus undersökte vi således de urinsyrasänkande effekterna av fenyletanoidglykosidextrakt AS och ECH. Denna studie syftar till att belysa vägar och mekanismer genom vilka AS och ECH utövar deras urinsyrasänkande effekter.
1 Material
1.1 Experimentella djur
Sjuttio manliga SPF-klass Sprague-Dawley (SD) råttor, som väger 150–180 g, köptes från det experimentella djurcentret vid Xinjiang Medical University. Djurproduktionslicensnummer: SCXK (xin) 2023-0001. Detta experiment godkändes av Animal Ethics Committee i Xinjiang Autonomous Region Uygur Medicine Research Institute, med djuretikens godkännandenummer: IACUC- (ZHUN) -2024-009.
1.2 Läkemedel och reagens
Fenyletanoid glykosidextrakt (AS och ECH)frånCistanche tubulosa (purity >98%, verifierad genom högpresterande vätskekromatografi) extraherades, renades och framställdes av Key Laboratory of Uygur Formulation Science, Xinjiang Autonomous Region Uygur Medicine Research Institute. Batchnummer: 20220617 (AS) och 20220526 (ECH).
Allopurinoltabletter, Batchnummer: 62208726, tillverkad av Jiangsu Wanbang Biochemical Pharmaceutical Group Co., Ltd.
Kaliumoxonatochadenin, Batchnummer: I2130050 och C2202255, köpt från Shanghai Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd.
Crea (kreatinin), UA (urinsyra), urea och ADA (adenosindeaminas) analysatser, Batchnummer: 141123010, 141223004, 141323008 och 043624005, köpt från Shenzhen Mindray Bio-Medical Electronics Co., Ltd.
XOD (Xanthine Oxidase) aktivitetsanalyspaket, Batchnummer: Y10001219, köpt från Shanghai Macklin Biochemical Technology Co., Ltd.
Antikroppar (URAT1, GLUT9, OAT1, OAT3), Batchnummer: 3i5723 0, 92F0296/4, 0F33081/2I44618, köpt från Affinity Biosciences.
HRP-märkta get-anti-kanin IgG, Batchnummer: 245440113, köpt från ZSGB-Bio.
Hematoxylinfärgning, Batchnummer: 24135741H, köpta från Peking Lanjieke Technology Co., Ltd.
DAB -kromogent reagenspaket, Batchnummer: 240010512, köpt från ZSGB-Bio.
DEPC (dietylpyrokarbonat), Katalognummer: D 60029-500 ML, köpt från Amresco (USA).
M5 HICARA DL2000 DNA -markör, Katalognummer: MF025, köpt från Peking Genomics Biotechnology Co., Ltd.
Trizol ™ Reagens, Katalognummer: 15596026, köpt från Thermo Fisher Scientific (USA).
5x allt-i-ett RT-mastermixochEvagreen Express 2 × QPCR Mastermix-Low Rox, Katalognummer: G492 och G891, båda köpte från Applied Biologiska material Inc. (ABM).
Två metoder
2.1 Modell Etablering och gruppering
Sjuttio manliga Sprague-Dawley (SD) -råttor acklimatiserades och delades upp i två grupper: en normal kontrollgrupp (1 0 råttor) och en modellkontrollgrupp (60 råttor). Den normala kontrollgruppen administrerades 0,5% CMC-NA via gavage. Modellkontrollgruppen administrerades kaliumoxonat (1,5 g · kg⁻) i kombination med adenin (100 mg · kg⁻) vid en dos av 10 ml · kg⁻, en gång dagligen under 14 dagar i rad. Modellen ansågs framgångsrikt etablerad när urea, crea och suA -nivåer ökade signifikant, mätt med en biokemisk analysator.
The hyperuricemia model rats were further divided into the following groups based on SUA, UREA, and CREA levels: model control group, allopurinol group (30 mg·kg⁻¹), low-dose AS group (50 mg·kg⁻¹), high-dose AS group (100 mg·kg⁻¹), low-dose ECH group (50 mg·kg⁻¹), and high-dose ECH Grupp (100 mg · kg⁻), med 10 råttor i varje grupp. För att upprätthålla stabil hyperurikemi administrerades alla grupper utom den normala kontrollgruppen kaliumoxonat (500 mg · kg⁻) i kombination med adenin (100 mg · kg⁻) via blov på morgonen, följt av administrering av respektive läkemedel i varje behandlingsgrupp på eftermiddagen. Den normala kontrollgruppen fick 0,5% CMC-NA-lösning på morgonen och dricksvatten på eftermiddagen vid en dos av 10 ml · kg⁻, en gång dagligen i 14 dagar i rad. Därefter stoppades administrering av modelleringsmedel och respektive läkemedel administrerades kontinuerligt dagligen under ytterligare 14 dagar.
2.2 Provsamling
Efter den slutliga dosen fastades råttorna över natten (vatten var inte begränsat). Urin från varje grupp uppsamlades för urinsyratestning. Kroppsvikt mättes efter fasta, och blodprover uppsamlades under anestesi. Serum separerades genom centrifugering och lagrades för framtida användning. Njurvävnader uppsamlades och vägdes. En njure fixerades i 4% paraformaldehydlösning, medan den andra var snäpp-fryst i flytande kväve för ytterligare analys.
2.3 Mätning av urinsyra i råtta urin
Urinprover från varje grupp centrifugerades (3, 000 r · min⁻, 10 min, centrifugradie 14 cm), och supernatanten uppsamlades. Urinprover utspäddes 1: 9 med saltlösning och analyserades med avseende på urinsyrainnehåll med användning av en biokemisk analysator.
2.4 Mätning av ADA, urea, crea och SUA i råttserum
Blodprover från varje grupp centrifugerades (3, 000 r · min⁻, 10 min, centrifugradie 14 cm) och serum uppsamlades. ADA-, urea-, crea- och SUA -nivåer i serumet mättes med användning av en biokemisk analysator.
2.5 Mätning av XOD i råttserum
Förändringar i XOD -nivåer i råttserum mättes med användning av en enzymatisk analys enligt tillverkarens instruktioner. Den initiala absorbansen (A₁) och slutlig absorbans (A₂) vid 290 nm registrerades och ΔA (ΔA=A₂ - A₁) beräknades. ΔA ersattes i formeln:
Xod (nmol⁻ · min⁻ · ml⁻)=[Δa × reaktionssystem Totalt volym ÷ (molär utrotningskoefficient för urinsyra × optisk banlängd) × 10⁹] ÷ provvolym ÷ tid=4262 × × ΔAa,
För att beräkna mängden urinsyrakatalyserad per minut per milliliter serum.
2.6 Njurkoefficientmätning
Njurvävnader uppsamlades, tvättades med saltlösning och överskott av vatten avlägsnades. Organvikten mättes exakt och njurkoefficienten beräknades enligt följande:
Njurkoefficient=njurvikt (mg) / kroppsvikt (g).
2.7 Histopatologisk observation av njurvävnad genom färgning
Njurvävnader fixerade i 4% paraformaldehydlösning dehydratiserades med graderade etanolkoncentrationer, rensade med xylen, inbäddad i paraffin och sektionerade i 4- μM -skivor. Sektionerna deparaffiniserades med xylen, hydratiserade med graderad etanol, färgades med hematoxylin och eosin (HE) och förseglades med neutralt gummi. De morfologiska förändringarna i njurvävnad observerades under ett ljusmikroskop och bilder fångades vid 400 × förstoring.
2.8 Upptäckt av URAT1-, GLUT9-, OAT1- och OAT3 -proteinuttryck i njurvävnad av IHC
Njurvävnader fixerade i 4% paraformaldehydlösning dehydratiserades med graderade etanolkoncentrationer, rensade med xylen, inbäddad i paraffin och sektion. Antigenåtervinning och get serumblockering utfördes. Primära antikroppar (URAT1, GLUT9, OAT1, OAT3) tillsattes vid en 1: 200 -utspädning och inkuberades över natten vid 4 grader. Nästa dag tvättades sektionerna med PBS, lufttorkades och inkuberades med biotinmärkta get-anti-kanin IgG vid 37 grader i 30 minuter. Sektionerna tvättades med PBS och inkuberades med DAB -kromogent reagens under 10 minuter, följt av PBS -sköljning, hematoxylinfärgning i 3 minuter, differentiering med saltlorsyra -etanollösning, litiumkarbonatblökning, dehydrering med gradientetanol, rensning med xylen och tätning med neutralt gummi.
För varje råtta valdes två slumpmässiga 4 0 0 × fält av njursektioner. Positiv färgning (brungul) analyserades och den integrerade optiska densiteten (IOD) för varje fält mättes med användning av bild-pro plus 6.0 för statistisk analys.
