Hur är Echinacoside, den effektiva ingrediensen i Cistanche Deserticola, pankreatisk Adenocarcinom celltillväxt?

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com

Echinacoside undertrycker pankreatisk adenokarcinomcelltillväxt genom att inducera apoptos via den mitogenaktiverade proteinkinasvägen

WEI WANG, JINBIN LUO, YINGHUI LIANG och XINFENG LI

Abstrakt.

Den kliniska tillämpningen av naturliga produkter som härrör från traditionell kinesisk medicin har fått uppmärksamhet inom cancerkemoterapeutika.Echinacoside(ECH), en av fenyletanoider, isolerad från stjälkarna avCistanchesalsa (en kinesisk örtmedicin) har vävnadsskyddande och anti-apoptotiska effekter på det centrala nervsystemet. Det är dock i stort sett svårfångat omEchinacoside har tumörundertryckande aktivitet. I den föreliggande studien visades detEchinacosidekan markant hämma proliferationen av pankreasadenokarcinomceller genom att inducera produktionen av reaktiva syrearter och störningen av mitokondriell membranpotential och därmed utlösaapoptos. Vidare klargjordes attEchinacosideundertrycker tumörcelltillväxt genom att modulera MAPK-aktivitet. Sammanfattningsvis avslöjar denna studie en ny funktion av ECH för att förebygga cancerutveckling och antyder att användningen avEchinacoside kan vara en potentiell kemoterapeutisk strategi för cancer.

Echinacoside i cistanche att minskapankreatisk adenokarcinom celltillväxt

Introduktion

Cancer är en livshotande sjukdom och en av de främsta orsakerna till dödlighet i världen. Cancerceller kännetecknas av hämmadeapoptos, okontrollerad tillväxt och proliferation och metastaser (1). Utvecklingen av cancer, ofta initierad av genetiska förändringar, är en komplex process som involverar interaktioner mellan onkogena proteiner och tumörsuppressorer som bildar ett invecklat signalnätverk. Till exempel har onkogenen Myc visat sig amplifieras eller överuttrycks i olika typer av cancer och det Myc-kodade onkoproteinet kan främja tumörbildning genom att driva cellcykelprogression, stimulera celltillväxt och inducera angiogenes (2). De Myc-utlösta onkogena signalerna kan emellertid aktivera p53-tumörsuppressorvägen via induktionen av tumörsuppressorn, ARF som mildrar den onkogena E3-ligas-mus-dubbelminut (MDM)2--medierad p53-nedbrytning ( 3). Detta är en autoreglerad, självskyddande mekanism som förhindrar celler från malign transformation. Noterbart kan p53 undertrycka Myc-aktivitet genom att transkriptionellt aktivera, till exempel, miR-145 som är inriktat på Myc-mRNA för translationsavstängning (4,5), vilket bildar en negativ återkopplingsreglerande loop.

Den mest enkla och effektiva strategin för att behandla cancer är att döda cancercellerna. De vanligen använda anticancerläkemedlen, såsom cisplatin (6), actinomycin D (7) och adriamycin (8) har visat sig hämma tumörtillväxt genom att främja apoptos. Nyligen har växande bevis visat att ett antal naturliga produkter och derivat från växter, särskilt från medicinalväxter som används i traditionell kinesisk medicin (TCM), uppvisar en tumörhämmande funktion genom att inducera apoptos av cancerceller och har potential för klinisk tillämpning i cancerterapi (9). Till exempel kan det naturliga antrakinonemodinet isolerat från TCM, Radix rhizome Rhei, undertrycka tillväxten av många typer av cancerceller (10,11). Camptothecin, som kommer från det kinesiska "lyckliga trädet", Camptotheca acuminate, är en värdefull naturprodukt som hämmar ligeringen av DNA efter topo I-medierade strängbrott (12). I en annan retrospektiv populationsbaserad kohortstudie av totalt 729 patienter med avancerad bröstcancer, föreslogs att TCM-terapi kan bidra till cancerbehandling. Av denna kohort var 115 patienter TCM-användare medan 614 patienter inte använde TCM. Den multivariata analysen visade att användningen av TCM, jämfört med icke-användare, var associerad med en signifikant minskad risk för dödlighet av alla orsaker (13). Alla ovannämnda fynd tydde på att TCM är en viktig komplementär och alternativ medicin som kan användas vid behandling av cancer.

Echinacoside(ECH) är en fenyletanoid isolerad från stjälkarna avCistanchersalsa, en kinesisk örtmedicin, som är ett viktigt råläkemedel som används som antiserum och medel mot trötthet (14). Det har visat sig att flera fenyletanoider har egenskaper som avlägsnar fria radikaler och skyddar mot oxidativ stress-inducerade toxiska skador (15). Dessutom mer biologiska egenskaper avEchinacosidehar sedan dess belysts. Till exempel kan ECH rädda de ökade nivåerna av inflammatoriska cytokiner och förbättra lunghistopatologiska avvikelser hos möss med akut lungskada (16,17). Också,Echinacoside har visat sig ha skyddande effekter på nervvävnad och förbättra beteendestörningar i murina modeller av Parkinsons sjukdom (18). Noterbart har det visat sig att ECH främjar cellproliferation och hämmarapoptosi musens tarmepitel- MODE-K-celler (19). Hittills har dock mindre uppmärksamhet ägnats åt den potentiella rollen av ECH i cancerprevention.

I denna studie undersöktes omEchinacoside behandling påverkar tumörcelltillväxt och proliferation och omEchinacosideinducerar apoptos, höjer produktionen av reaktiva syrearter (ROS) och minskar mitokondriell membranpotential (MMP), och undertrycker följaktligen tumörcelltillväxt. Dessutom syftade den aktuella studien till att identifiera de molekylära mekanismerna som är ansvariga för ECH-medierad celltillväxthämning.

Material och metoder

Cellinje, reagens och antikroppar.

SW1990 pankreasadenokarcinomceller (ATCC, Manassas, VA, USA) odlades i Dulbeccos modifierade Eagle-medium kompletterat med 10 procent fetalt bovint serum, 50 U/ml penicillin och 0,1 mg/ml streptomycin vid 37˚C i en 5 procent CO2 fuktad atmosfär.Echinacosideköptes från Jrdun Biotechnology Corp. (Shanghai, Kina). Antikroppar mot AKT, P-AKT, ERK, P-ERK, JNK, p-JNK, P38, p-P38 och GAPDH köptes från Cell Signaling Technology (Danvers, MA, USA); anti-Bax och anti-Bcl-2 köptes från Santa Cruz Biotechnology Inc. (Santa Cruz, CA, USA); och anti-Caspase-3 köptes från Abcam (Shanghai, Kina).

Cellviabilitetsanalys.

För att bedöma hastigheten för tumörcelltillväxt användes Cell Counting kit {{0}} (CCK-8; Dojindo Molecular Technologies, Rockville, MD, USA) enligt tillverkarens instruktioner. Cellsuspensioner såddes vid 5,000 celler per brunn med ECH-behandling under 0, 12, 24, 48 eller 72 timmar i 96-brunnsodlingsplattor. Celltillväxthämning bestämdes genom att tillsätta WST-8-reagens från CCK-8-kitet i en slutlig koncentration på 10 procent till varje brunn, och absorbansen av proverna mättes vid 450 nm med en mikroplattläsare (Multiskan MK3; Thermo Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA, USA).

Hoechst 33342 färgning.

Celler (60 procent sammanflöde) behandlades med Hoechst 33342 (Beyotime Institute of Biotechnology, Haimen, Kina) vid en slutlig koncentration av 1 µg/ml, inkuberades i 37˚C inkubator i 15 minuter, tvättades med fosfatbuffrad saltlösning två gånger, fixerad i 4 procent paraformaldehyd under 30 min vid rumstemperatur och monterad på objektglas. De morfologiska förändringarna av cellkärnorna observerades under ett fluorescensmikroskop (Olympus BX51, Melville, NY, USA). De normala kärnorna var runda och färgade ljusblå, medan de apoptotiska kärnorna var krympta och färgade ljusblå.

Analyser av fluorescensaktiverad cellsortering (FACS).

För bedömning avapoptosfluoresceinisotiocyanat (FITC)-annexin VApoptosDetektionskit (BD Biosciences, Shanghai, Kina) användes enligt tillverkarens instruktioner. Kortfattat tvättades 5x104 celler med iskall PBS, återsuspenderades i 0,1 ml bindningsbuffert (Beyotime Institute of Biotechnology) och färgades med 10 ml FITC-konjugerad Annexin V (10 mg/ml) och 10 ml propidiumjodid (PI) (50 mg/ml). Efter inkubation i 15 minuter vid rumstemperatur i mörker och tillsats av 400 ml bindningsbuffert analyserades cellerna med en flödescytometer (C6; BD Biosciences, Shanghai, Kina).

Mätning av reaktiva syreämnen (ROS).

För att utvärdera produktionen av ROS användes analyssatsen Reactive Oxygen Species (Vigorous Biotechnology, Peking, Kina) enligt tillverkarens instruktioner. I korthet skördades celler (80 procent sammanflöde) och tvättades med PBS före färgning med dihydroetidium (DHE)-lösningen (Beyotime Institute of Biotechnology). Celler analyserades sedan genom flödescytometriska analyser.

Mätning av mitokondriell membranpotential (MMP).

Ett testkit för tetrametylrhodaminmetylester (TMRM) (ImmunoChemistry Technologies, Bloomington, MN, USA) användes för att detektera förändringarna i MMP. Kortfattat skördades celler (80 procent konfluens), tvättades med PBS och färgades med TMRM under 15-20 minuter i en 37˚C inkubator. Cellerna tvättades sedan en gång med PBS och utsattes för flödescytometriska analyser.

Immunblottinganalyser.

Cellerna (80 procent konfluens) skördades och lyserades i RIPA-buffert (Jrdun Biotechnology) bestående av 50 mM Tris-HCl, pH 7,4; 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 procent NP-40, 1 procent natriumdeoxicholsyra och 0,1 procent SDS och nytillsatta proteasomhämmare. Lika mängder klart cellysat användes för immunoblotting-analys såsom beskrivits tidigare (20).

Statistisk analys.

Kvantitativa data uttrycks som medelvärde ± standardavvikelse. Statistiska skillnader utvärderades med oparat Students t-test med statistisk SPSS 15.0 programvara. P<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">

Resultat

Echinacoside hämmar tumörcelltillväxt. Även om det har rapporterats attEchinacoside uppvisar en skyddande roll genom att hämmaapoptosoch inflammatoriska signaler i somatiska celler, såsom neuronala och intestinala epitelceller (16-19), är det fortfarande svåröverskådligt om ECH kontrollerar cancercelltillväxt och -proliferation. För att testa detta genomfördes en cellöverlevnadsanalys genom att behandla SW1990-celler, härledda från ett bukspottkörteladenokarcinom grad II, med titrerade doser av ECH som visas i Fig. 1. Det visades särskilt att ECH signifikant fördröjer tumörcellsproliferation i en dos -beroende sätt under en 5-dag odlingsperiod (Fig. 1).

Echinacoside utlöser apoptos. Som förlust avapoptosär en av de viktigaste orsaksmekanismerna bakom den okontrollerade proliferationen av pankreascancerceller (21), genomförde den aktuella studien en uppsättning experiment för att avgöra om ECH utlöser apoptos. För det första, genom att färga tumörcellernas kärnor med Hoechst 33342, visades det att ECH resulterar iapoptospå ett dosberoende sätt (Fig. 2A). Dessutom utfördes FACS-analyser med användning av Annexin V/PI-färgning för att ytterligare bekräfta den apoptotiska effekten av tyEchinacoside (Fig. 2B). Den genomsnittliga andelen apoptotiska celler var 1,1 procent under normala odlingsförhållanden, medan denna procentandel signifikant ökade till 10,6, 21,4 och 51,3 procent som svar på ECH-behandling på ett dosberoende sätt (Fig. 2C). Dessa resultat, tillsammans med cellviabilitetsanalysen som visas i fig. 1, visar dettaEchinacosidebehandling undertrycker proliferationen av tumörceller genom att triggaapoptos.

Echinacoside föranleder produktionen av reaktiva syreämnen (ROS). Flera kemoterapeutiska läkemedel för cancer, såsom doxorubicin och cisplatin, har visat sig vara potenta generatorer av ROS som är en avgörande roll i apoptosinduktion under fysiologiska och patologiska tillstånd (22). Därmed undersöktes om ECH-behandling även kunde reglera ROS-produktion. För att testa detta användes DHE, som kan oxideras för att generera etidium som interkaleras med DNA, i denna studie för att utvärdera ROS-produktion. Det visade sig att, liksom andra läkemedel mot cancer,Echinacoside stimulerar också ROS-produktion på ett dosberoende sätt som visas av den förhöjda fluorescensintensiteten vid ECH-behandling (Fig. 3).

Echinacosideminskar MMP. Mitokondriell dysfunktion har visat sig vara inblandad i induktionen av apoptos. Öppning av den mitokondriella permeabilitetsövergångsporen har visats inducera depolarisering av transmembranpotentialen och frisättning av pro-apoptotiska faktorer (23). Därför testades det omEchinacoside kan inducera förlust av MMP i tumörceller genom att utföra en TMRM-analys, vilket är ett väletablerat tillvägagångssätt, eftersom intensiteten av TMRM-fluorescens är proportionell mot membranpotentialen. Det visades detEchinacoside behandling minskar MMP signifikant på ett dosberoende sätt (fig. 4).

Echinacoside kontrollerar tumörcelltillväxt via mitogenaktiverat proteinkinas (MAPK), men inte AKT-signaler. För att ytterligare undersöka den molekylära grunden förEchinacoside-medierad tumörcellsdöd, aktiviteten hos flera vitala signalvägar, såsom MAPK och AKT (24,25), som kontrollerar cellöverlevnad och död undersöktes. MAPK:erna är evolutionärt konserverade, prolinriktade Ser/Thr-proteinkinaser, inklusive extracellulära signalreglerade kinaser (ERK), c-Jun NH 2-terminalkinas (JNKs) och p38-familjens medlemmar som aktiveras genom tre -tier-kinassignaleringskaskader (26,27). I denna studie bedömdes uttrycket av MAPK och AKT, såväl som deras aktiverade fosforylerade former, och det avslöjades attEchinacoside undertrycker markant JNK- och ERK1/2-aktivitet, men förstärker p38-aktivitet (Fig. 5). Noterbart visades det att AKT-aktivitet, som också är avgörande för cellproliferation, inte påverkas av ECH-behandling (Fig. 5). Dessutom visades det att ECH-behandling höjer uttrycket av Bax och Caspase-3 samtidigt som det minskar Bcl-2-uttrycket (Fig. 5), vilket överensstämmer med Fig. 2. Resultaten indikerar således attEchinacosideutlöser tumörcellapoptos via MAPK-vägen.

cistancheechinakosidmot apoptos

Diskussion

Så vitt vi vet är detta den första studien som visar detEchinacoside har en tumörhämmande funktion genom att utlösaapoptos(Fig. 2), främjar ROS-produktion (Fig. 3) och inducerar mitokondriell membranpotentialdepolarisering (Fig. 4), vilket leder till hämning av tumörcelltillväxt (Fig. 1). Dessutom visades den molekylära grunden för ECH-medierad tumörcellsdöd inträffa genom att reglera MAPK-signalvägar (Fig. 5). Dessa fynd visar en ny funktion av ECH för att förhindra tumörbildning och antyder således att det kan vara ett kandidatmedel för cancerterapi.

Majoriteten av anticancerläkemedel kan inducera tumörcellapoptos, senescens och/eller cellcykelstopp, vilket leder till hämning av tumörcelltillväxt och -proliferation. Cellcykelstopp är ett cellulärt svar på milda stresssignaler som tillåter celler att reparera skadat DNA innan replikativ DNA-syntes eller mitos initieras, medan apoptos och åldrande (permanent cellcykelstopp) inträffar som svar på stresssignaler som eliminerar irreparerbara eller maligna celler ( 28,29). Därför bara den apoptotiska effekten avEchinacoside på tumörceller bedömdes i denna studie, eftersom dödande av cancerceller är ett viktigt kriterium för att utvärdera styrkan hos ett anticancermedel. Noterbart visades det att ECH inducerar uttrycket av Bax (Fig. 5), en pro-apoptotisk gen, transkriptionellt aktiverad av tumörsuppressorn p53 (30). Därför är det värt att testa omEchinacoside kan aktivera p53-signalvägen. Om så är fallet kan ECH också kunna framkalla p53-beroende cellcykelstopp, senescens, apoptos eller autofagi. I denna studie klargjordes den tumörundertryckande funktionen av ECH i SW1990 pankreatisk adenokarcinomcellinje. Ytterligare studier som observerar fler pankreascancercellinjer krävs dock. Det har visats att mutationer i det onkogena proteinet RAS och tumörsuppressorn p53 är associerade med utvecklingen av pankreascancer (31); SW1990-cellinjen har dock ingen p53-mutation, enligt IARC p53-databasen. Därför är det viktigt att undersöka omEchinacoside kan påverka tillväxten och spridningen av andra pankreascancercellinjer med olika p53-mutationer. Dessutom skulle det vara intressant att avgöra om ECH kan främja apoptos och hämma tillväxten av andra typer av tumörer.

ROS-höjning och MMP-reduktion, som orsakades avEchinacoside behandling, har visat sig vara väsentliga iapoptosinduktion (22). Dessutom har det visat sig att ROS kan inducera oxidation av mitokondriella porer, vilket bidrar till frisättningen av cytokrom c, en intermediär i apoptos, på grund av störningar av MMP (22). Det återstår alltså att fastställa om ECH stör MMP indirekt genom induktion av ROS. Dessutom har ROS-framkallad oxidativ stress också visat sig vara involverad i att modulera en myriad av celltillväxtkontrollerande signaler, inklusive p53, NF-KB, HIFs och PI3K (32). Det återstår att fastställa om och i så fall hur ECH reglerar dessa viktiga signalvägar. Särskilt orsakar oxidativ stress olika neurodegenerativa sjukdomar på grund av den höga syreförbrukningen, svaga antioxidativa system och terminaldifferentieringsegenskaper hos det centrala nervsystemet (33). Det har dock flera studier visatEchinacosidehar skyddande och anti-apoptotiska effekter på nervvävnad. I detta avseende är det rimligt att anta att ECH kan minska ROS-produktionen i de terminaldifferentierade neurala cellerna. Därför återstår det också att fastställa om regleringen av ROS-produktion av ECH är beroende av celldifferentieringsstatus. Därför visar de nuvarande resultaten tillsammans med andra studier att ECH, den allmänt använda TCM, kan vara en viktig kemoterapeutisk strategi inte bara för behandling av neurodegenerativa sjukdomar utan även maligna karcinom.

Nyligen har användningen av TCM i cancerterapi fått allt mer uppmärksamhet. Potentialen hos naturliga produkter från medicinalväxter som används i TCM har erkänts av forskarvärlden även i västvärlden (9). Det krävs ansträngningar för att klargöra de underliggande verkningsmekanismerna för dessa naturliga produkter, vilket så småningom kan leda till utvecklingen av effektiva och säkra läkemedel för cancerterapi.

Sammanfattningsvis visade föreliggande studie den tumörhämmande funktionen avEchinacoside och utvecklar också den molekylära grunden förEchinacoside-medierad tumörsuppression, vilket tyder på den potentiella kliniska tillämpningen avEchinacoside i cancerterapi.

echinakosidi cistanche

Erkännanden

Denna studie finansierades och stöddes av FMUs nyckelprogram för vetenskaplig forskning (bidrag nr. 09ZD014). Författarna vill tacka Biomedworld (Shanghai, Kina) för hjälpen med att redigera manuskriptet.

FrånEchinacosideundertrycker pankreatisk adenokarcinom celltillväxt genom att induceraapoptosvia den mitogenaktiverade proteinkinasvägen av WEI WANG, JINBIN LUO, YING HUI LIANG och XINFENG LI

---MOLEKYLÄR MEDICIN RAPPORTER 13: 2613-2618, 2016 DOI: 10.3892/mmr.2016.4867

Referenser

1. Hanahan D och Weinberg RA: Cancers kännetecken: nästa generation. Cell 144: 646-674, 2011.

2. Alderton GK: Transkription: Transkriptionseffekterna av MYC. Nat Rev Cancer 14: 513, 2014.

3. Zindy F, Eischen CM, Randle DH, Kamijo T, Cleveland JL, Sherr CJ och Roussel MF: Myc-signalering via ARF-tumörsuppressorn reglerar p53-beroendeapoptosoch odödlighet. Genes Dev 12: 2424-2433, 1998.

4. Sachdeva M, Zhu S, Wu F, Wu H, Walia V, Kumar S, Elble R, Watabe K och Mo YY: p53 undertrycker c-Myc genom induktion av tumörsuppressorn miR-145. Proc Natl Acad Sci USA 106: 3207-3212, 2009.

5. Liao JM, Cao B, Zhou X och Lu H: Nya insikter om p53-funktioner genom dess målmikroRNA. J Mol Cell Biol 6: 206-213, 2014.

6. Zamble DB och Lippard SJ: Cisplatin och DNA-reparation i cancerkemoterapi. Trends Biochem Sci 20: 435-439, 1995.

7. Kleeff J, Kornmann M, Sawhney H och Korc M: Actinomycin D inducerarapoptosoch hämmar tillväxten av pankreascancerceller. Int J Cancer 86 399-407, 2000.

8. Tacar O, Sriamornsak P och Dass CR: Doxorubicin: En uppdatering om molekylär verkan mot cancer, toxicitet och nya system för läkemedelstillförsel. J Pharm Pharmacol 65: 157-170, 2013.

9. Efferth T, Li PC, Konkimalla VS och Kaina B: Från traditionell kinesisk medicin till rationell cancerterapi. Trends Mol Med 13: 353-361, 2007.

10. Yim H, Lee YH, Lee CH och Lee SK: Emodin, ett antrakinonderivat isolerat från rhizomer av Rheum palmatum, hämmar selektivt aktiviteten av kaseinkinas II som en kompetitiv inhibitor. Planta Med 65: 9-13, 1999.

11. Zhang L, Chang CJ, Bacus SS och Hung MC: Undertryckt transformation och inducerad differentiering av HER-2/neu-överuttryckande bröstcancerceller av emodin. Cancer Res 55: 3890-3896, 1995.

12. Pommier Y: Topoisomeras I-hämmare: Camptothecins och vidare. Nat Rev Cancer 6: 789-802, 2006.

13. Lee YW, Chen TL, Shih YR, Tsai CL, Chang CC, Liang HH, Tseng SH, Chien SC och Wang CC: Tilläggsbehandling med traditionell kinesisk medicin förbättrar överlevnaden hos patienter med avancerad bröstcancer: En befolkningsbaserad studie. Cancer 120: 1338-1344, 2014.

14. Xiong Q, Hase K, Tezuka Y, Namba T och Kadota S: Acteosid hämmarapoptosvid D-galaktosamin och lipopolysackarid-inducerad leverskada. Life Sci 65: 421-430, 1999.

15. Gao JJ, Igarashi K och Nukina M: Radikal rensande aktivitet av fenylpropanoidglykosider i Caryopteris incana. Biosci Biotechnol Biochem 63: 983-988, 1999.

16. Zhang Y, Xing J, Ai T, Wen T, Guan L och Zhao J: Skydd avechinakosidmot akut lungskada orsakad av oljesyra hos råttor. Free Radic Res 41: 798-805, 2007.

17. Li X, Gou C, Yang H, Qiu J, Gu T och Wen T:Echinacosidelindrar D-galaktosamin plus lipopolysackarid-inducerad akut leverskada hos möss via hämning avapoptosoch inflammation. Scand J Gastroenterol 49: 993-1000, 2014.

18. Zhao Q, Gao J, Li W och Cai D: Neurotrofiska och neuroräddningseffekter avEchinacosidei den subakuta MPTP-musmodellen av Parkinsons sjukdom. Brain Res 1346: 224-236, 2010.

19. Jia Y, Guan Q, Guo Y och Du C:Echinacosidestimulerar cellproliferation och förhindrar cellapoptos i intestinala epitelial MODE-K-celler genom uppreglering av transformerande tillväxtfaktor-1-uttryck. J Pharmacol Sci 118: 99-108, 2012.

20. Liao P, Wang W, Shen M, Pan W, Zhang K, Wang R, Chen T, Chen Y, Chen H och Wang P: En positiv återkopplingsslinga mellan EBP2 och c-Myc reglerar rDNA-transkription, cellproliferation, och tumörbildning. Cell Death Dis 5: e1032, 2014.

21. Westphal S och Kalthoff H: Apoptos: Mål vid pankreascancer. Mol Cancer 2: 6, 2003.

22. Simon HU, Haj-Yehia A och Levi-Schaffer F: Rollen för reaktiva syreämnen (ROS) iapoptosinduktion.Apoptos5: 415-418, 2000.

23. Ly JD, Grubb DR och Lawen A: Den mitokondriella membranpotentialen (delta psi(m)) vid apoptos; en uppdatering.Apoptos8: 115-128, 2003.

24. Munshi A och Ramesh R: Mitogenaktiverade proteinkinaser och deras roll i strålningssvar. Genes Cancer 4: 401-408, 2013.

25. Abraham AG och O'Neill E: PI3K/Akt-medierad reglering av p53 i cancer. Biochem Soc Trans 42: 798-803, 2014.

26. Tournier C: The 2 Faces of JNK Signaling in Cancer. Genes Cancer 4: 397-400, 2013.

27. Koul HK, Pal M och Koul S: Roll av p38 MAP kinassignaltransduktion i solida tumörer. Genes Cancer 4: 342-359, 2013.

28. Brady CA och Attardi LD: p53 i korthet. J Cell Sci 123: 2527-2532, 2010.

29. Carvajal LA och Manfredi JJ: Ännu en gaffel i vägen-liv eller dödsbeslut av tumörsuppressorn p53. EMBO Rep 14: 414-421, 2013.

30. Miyashita T och Reed JC: Tumörsuppressor p53 är en direkt transkriptionell aktivator av den humana Bax-genen. Cell 80: 293-299, 1995.

31. Morton JP, Timpson P, Karim SA, Ridgway RA, Athineos D, Doyle B, Jamieson NB, Oien KA, Lowy AM, Brunton VG, et al: Mutant p53 driver metastaser och övervinner tillväxtstopp/ålderdom i pankreascancer. Proc Natl Acad Sci USA 107: 246-251, 2010.

32. Schieber M och Chandel NS: ROS-funktion vid redoxsignalering och oxidativ stress. Curr Biol 24: R453-R462, 2014.

33. Li J, OW, Li W, Jiang ZG och Ghanbari HA: Oxidativ stress och neurodegenerativa störningar. Int J Mol Sci 14: 24438-24475, 2013.