Epigallocatechin-3-Gallate förbättrad järnackumulation och apoptos och främjad neuronal regenerering och minne/kognitiva funktioner i Hippocampus inducerad av exponering för en kronisk höghöjdshypoximiljö

Abstrakt

Vi hade som mål att utforska de skyddande effekterna och potentiella behandlingsmekanismerna för Epigallocatechin-3-gallate (EGCG) i en djurmodell av kronisk exponering i en naturlig höghöjdshypoximiljö (HAH). Beteendeförändringar utvärderades med Morris vattenlabyrinttest. Järnackumulering i hippocampus detekterades genom att använda DAB-förstärkt Perls färgning, MRI, qPCR respektive kolorimetri. Oxidativ stress (malondialdehyd, MDA), apoptos (Caspase-3) och neural regenerering (hjärnhärledd neurotrofisk faktor, BDNF) detekterades med hjälp av ELISA och western blotting. Neurala ultrastrukturella förändringar utvärderades med transmissionselektronmikroskopi (TEM).

Förhållandet mellan apoptos och minne har alltid varit ett av neuroforskarnas heta ämnen. Apoptos hänvisar till processen för ordnad celldöd genom en rad interna regleringsmekanismer. Under normala omständigheter orsakar cellapoptos ingen skada på människokroppen, men hjälper till att upprätthålla god hälsa. Men under vissa patologiska tillstånd kan okontrollerad apoptos leda till förekomsten av olika sjukdomar.

Samtidigt har minnet också visat sig vara nära relaterat till cellapoptos. Vissa studier tyder på att lämplig apoptos spelar en viktig roll i bildandet och konsolideringen av minne. Detta förhållande följer en enkel regel: vissa onödiga eller utgångna neuroner rensas genom apoptos, vilket skapar mer utrymme och resurser för bildandet av nya neuroner och minneslagring. Dessutom kan lämplig apoptos också skydda neuroner från skador genom att eliminera toxiska proteiner i neuroner.

Men om det finns överdriven eller otillräcklig apoptos, kommer det att påverka minnets normala funktion. Överdriven apoptos kan leda till överdriven förlust av neuroner, vilket leder till minnesförlust. Å andra sidan, om det inte finns tillräckligt med apoptos för att rensa ut onödiga neuroner och celler, kommer dessa celler att förbruka för mycket begränsat utrymme och resurser, vilket också kan leda till minnesförsämring. Därför är det nödvändigt att undvika överdriven eller otillräcklig apoptos samtidigt som den normala graden av apoptos bibehålls.

Apoptos är en komplex biologisk process med många påverkande faktorer. Även om förhållandet till minne inte är helt förstått, tillåter detta fenomen oss att få en djupare förståelse av nervsystemet och öppnar nya vägar för att förbättra minnet. Sammanfattningsvis är det avgörande att bemästra lämplig apoptos för minnets hälsa. Det kan ses att vi behöver förbättra vårt minne. Cistanche deserticola kan förbättra minnet avsevärt eftersom Cistanche deserticola är ett traditionellt kinesiskt läkemedelsmaterial med många unika effekter, varav en är att förbättra minnet. Effekten av malet kött kommer från de olika aktiva ingredienserna det innehåller, inklusive syra, polysackarider, flavonoider, etc. Dessa ingredienser kan främja hjärnans hälsa på olika sätt.

Klicka på vet sätt att förbättra hjärnans funktion

Resultaten visade att inlärnings- och minnesprestanda hos råttor minskade när de exponerades för HAH-miljön. Det följdes av järnansamling, dysfunktionell järnmetabolism, minskad BDNF och uppreglering av MDA och Caspase-3. TEM bekräftade de ultrastrukturella förändringarna i neuroner och mitokondrier. EGCG minskade HAH-inducerad kognitiv försämring, järnavlagring, oxidativ stress och apoptos och främjade neuronal regenerering mot kronisk HAH-medierad neural skada.

Nyckelord
Hög höjd · Hypoxi · Kvantitativ känslighetskartläggning · Järnackumulering · Läkemedelsintervention.

Introduktion
Mänskliga aktiviteter i områden på hög höjd (mer än 3000 m) har nyligen ökat markant [1]. Bland de 140 miljoner människor världen över som lever permanent på höga höjder [2, 3] och andra för turism eller försvar av gränser, löper 5–10 % risk att utveckla kronisk bergssjuka som kännetecknas av överdriven erytrocytos och svår hypoxemi [4, 5] . Hjärnan, som ett av de mest syreförbrukande organen, är känslig för hypoxi [6]. Dessutom stör höghöjdshypoxi (HAH) allvarligt den strukturella integriteten hos de viktigaste neuronerna och mitokondriell morfologi i hippocampus [7]. Symtomen som induceras av kronisk exponering för en HAH-miljö inkluderar huvudvärk, yrsel, sömnstörningar, trötthet och bristande mental koncentration [5, 8, 9]. Dessutom kan HAH också utlösa neurokognitiva dysfunktioner såsom rumslig inlärning, minne och humör [10]. Behandlingen av HAH-inducerad neural skada har därmed blivit ett fokus för uppmärksamhet inom området höghöjdsmedicin [11, 12].

Det är av stor betydelse att hitta lämpliga formuleringar för att förebygga HAH-inducerad hjärnskada. Grönt teblad innehåller (−)-epigallocatechin-3-gallat (EGCG) (50–60 %), (−)-epigallocatechin (EGC) (15–20 %), (−)-epikatekin-3- gallat (EKG) (10–15 %) och (−)-epikatekin (EC) (5–10 %) [13, 14]. EGCG, som enligt uppgift är rikligare i grönt teblad (7,1 g per 100 g) än i oolong-te (3,4 g per 100 g) och svarta teblad (1,1 g per 100 g) [15], har en potent antioxidantegenskap pga. till de åtta hydroxylgrupperna och två trifenolgrupper i sin grundstruktur [16, 17]. Dessutom har det visats kunna passera blod-hjärnbarriären och nå hjärnparenkymet i djurstudier [18, 19]. Det har förekommit några rapporter om de neuroprotektiva mekanismerna för EGCG såsom metallkeleringsegenskaper, undertryckande av oxidativ stress, inflammation, apoptos och acceleration av nervregenerering [20-22]. Zhang et al. granskade effekten av EGCG på många sjukdomar och påpekade att EGCG skyddade neuronala celler genom att inducera autofagi. De sammanfattade också att de antiinflammatoriska och antioxidanta egenskaperna hos EGCG var avgörande för dess skyddande roll vid sjukdomar i centrala nervsystemet [23].

Men få studier har rapporterat den neuroprotektiva effekten av EGCG mot kronisk HAH-medierad neural skada. För att fylla denna lucka etablerade vi i denna studie en råttmodell för kronisk exponering för en naturlig HAH-miljö i ett försök att verifiera den potentiella behandlingsmekanismen för EGCG. Dessutom använde vi kvantitativ känslighetskartläggning (QSM), genom gradient-eko MRI vid 7 T, vilket kan övervinna den icke-lokala effekten av magnetfältet och ge en kontrastmekanism för vävnader in vivo, för att kvantifiera hjärnans järninnehåll [24].
Material och metoder

Djur

Totalt 120 Sprague-Dawley-hanråttor som vägde 130–150 g erhölls från Chengdu Dashuo Laboratory Animal Co., Ltd. De hölls i ett djurhus vid 18–22 grader i en 12 timmars ljus/mörker-cykel med mat och vatten tillhandahålls ad libitum. Alla procedurer som utfördes på djur godkändes av Animal Care and Use Committee på West China Hospital.

Studera design

Råttor randomiserades och delades in i fyra grupper. Råttor i hypoxigruppen och h-EGCG-gruppen matades och hölls i Yushu, Kina på en höjd av 4500 m. Råttor i normalhöjdsgruppen (n-gruppen) och n-EGCG-gruppen matades i Chengdu, Kina på en höjd av 500 m. Dessa råttor fick normalt foder under en månad, följt av olika behandlingar. (1) Hypoxigrupp: råttor injicerades intraperitonealt varje dag med fysiologisk koksaltlösning (0,9%) under en månad. (2) h-EGCG-grupp: råttor injicerades intraperitonealt varje dag med 50 mg/kg EGCG (renhet, 98 %; Cas, 989-51-5; Sigma-Aldrich; lagrades vid 4 grader) under en månad. (3) n-grupp: råttor injicerades intraperitonealt varje dag med fysiologisk koksaltlösning (0,9%) under en månad. (4) n-EGCG-grupp: råttor injicerades intraperitonealt varje dag med 50 mg/kg EGCG under en månad.

EGCG (5 mg/ml) löstes i vatten i ett förhållande av 1:1. Volymen som injicerades i råttor bestämdes av råttornas vikt, som nådde en slutlig injektionsmängd på 50 mg/kg. Efter den behandlingen användes några råttor för Morris vattenlabyrintanalys (n=10 för varje grupp) respektive hjärn-MRI-analys (n=10 för varje grupp). Några andra råttor avlivades och hjärnvävnader samlades in för DAB-förstärkt Perls-färgning (n=3 för varje grupp), för Western blotting, biokemiska bedömningar och qPCR-analyser (n=6 för varje grupp) och transmissionselektronmikroskopanalys (n=1 för varje grupp).

Beteendeexperiment

Morris vattenlabyrint (MWM) utfördes som tidigare beskrivits för att analysera inlärning och minne av råttor [25], det utfördes på samma plats där råttorna hölls. MWM bestod av en rund stålpool (160 cm i diameter, 60 cm på höjden och 31 cm på djupet) fylld med vatten till en nivå av 1 cm ovanför toppen av en plattform (10 cm i diameter och 30 cm på djupet) ). Vattentemperaturen hölls vid 22±2 grader och gjordes ogenomskinlig med briljant svart bläck. Plattformen fixades i en av de fyra kvadranter som sattes upp under utbildningen under fyra dagar i följd. Rättegången avslutades när råttorna nådde plattformen. Utrymningsfördröjningen registrerades. Om råttorna misslyckades med att nå plattformen inom 60 s, leddes de sedan manuellt till plattformen och fick stanna kvar på den i 15 sekunder. På den femte dagen, efter att plattformen avlägsnats, gick råttorna in i kvadranten motsatt den för den ursprungliga plattformen. Därefter registrerades antalet plattformskorsningar och rörelsevägar inom 60 sekunder.

MRI-protokoll

QSM utvärderades med MRT, vilket har rapporterats i en tidigare studie [26]. MRT utfördes på en 7 Tesla-skanner (BioSpec 70/30, Bruker, Tyskland). En tredimensionell (3D) multi-eko gradient-återkallad eko (GRE) sekvens användes för QSM. De experimentella parametrarna ställdes in enligt följande: upprepningstid (TR)=60 ms, flip-vinkel=15 grad, skivtjocklek=23 mm, insamlingsmatrisstorlek=256×256, fält syn (FOV)=32 mm×32 mm, ekotid för första ekot (TE1)=5 ms, ekoavstånd (ΔTE)=5.77 ms, antal ekon{{19 }} och bandbredd=50 kHz. Både magnitud- och fasbilder sparades för QSM-rekonstruktion. Det fanns tre steg i QSM-kartläggningsalgoritmerna som utfördes med MATLAB R2014a (The Math Works, Natick, MA), packa upp den inslagna fasen, ta bort bakgrundsfältet och generera känslighetskartor från vävnadsfältet.

Vävnadsberedning

Råttorna i varje grupp administrerades intraperitonealt 10 % kloralhydrat för djup anestesi (1,5 mg/kg) och perfuserades sedan transkardialt med iskall koksaltlösning (cirka 30 min) av en peristaltisk pump (BT100-2 J, LongerPump, Shanghai, Kina). För DAB-förstärkt Perls-färgning dissekerades hjärnorna och efterfixerades i 2,5 % paraformaldehyd över natten vid 4 grader. Nästa dag togs koronala sektioner från hippocampus för färgning. För andra bestämningar förutom immunhistokemi, strippades hippocampus snabbt på is och lagrades vid 80 grader.

DAB Enhanced Perls' färgning

DAB-förstärkt Perls-färgning användes för att detektera cellulär järnansamling [27]. Sektioner av hjärnvävnad nedsänktes i destillerat vatten i 3 minuter och inkuberades sedan med nyberedd Perls-lösning (2% kaliumferrocyanid/2% saltsyra) i 30 minuter, följt av fosfatbuffrad saltlösning (PBS) tvättar. Endogen peroxidasaktivitet blockerades med 0,3 % väteperoxidlösning i metanol under 15 minuter, följt av 3 tvättar i PBS. Signaler utvecklades genom inkubation under 3 minuter i 3,3-diaminobensidin (DAB) och hematoxylin (Sigma-Aldrich) användes för motfärgning.

Biokemiska bedömningar

Hippocampus isolerades och omrördes jämnt för att erhålla ett 10 % homogenat som sedan centrifugerades vid 30,000–40,000 RPM i 10 minuter för att erhålla en supernatant för att uppskatta hippocampusjärnet med ett kolorimetriskt kit (E-BCK139S, Elabscience, Wuhan, Kina) och malondialdehyd (MDA) detekterades i supernatant med användning av ett ELISA-kit (Elabscience, Wuhan, Kina).

Western Blotting

Proteinkoncentrationen bestämdes med användning av en bicinchoninsyraanalys (BCA, Biosharp, Beijing, Kina) kit. Proteinerna separerades med 12% SDS-PAGE och överfördes sedan till polyvinylidenfluorid (PVDF)-membran. De senare blockerades i 2 timmar vid rumstemperatur i 5 % skummjölkspulver utspätt med buffert och inkuberades sedan med primära antikroppar över natten vid 4 grader, inklusive anti-klyvt kaspas från kanin-3 (1:1000 , Affinity Biosciences, Jiangsu, Kina), kanin-anti-hjärnhärledd neurotrofisk faktor (BDNF) (1:1000, Affinity Biosciences, Jiangsu, Kina) och kanin-anti-aktin (1:5000, Affinity Biosciences, Jiangsu, Kina). Nästa dag tvättades membranen tre gånger med TBST i 5 minuter varje gång och inkuberades sedan med en HRP-märkt get anti-kanin sekundär antikroppslösning (1:10 000, Servicebio, Wuhan, Kina) i 1 timme och tvättades tre gånger i 5 min.

Kvantitativ realtids-PCR

Animal Total RNA Isolation Kit (Foregene), 5×All-In-One MasterMix (med AccuRT Genomic DNA Removal kit) (abm), och EvaGreen Express2×qPCR MasterMix-No Dye (abm) användes enligt tillverkarens instruktioner. De specifika paren av primrar var enligt följande: Fpn, forward primer, 5'-CACCACAGGATATGCTTACAC TCAGG-3'; omvänd primer, 5'-GAGAACAGACCAGTC CGAACAAGG-3'; b-aktin, framåtriktad primer, 5'-TGTCAC CAACTGGGACGATA-3'; omvänd primer: 5ʹ-GGGGTG TTGAAGGTCTCAAA-3ʹ. Fpn-mRNA-nivån för varje prov normaliserades till den för b-aktin-mRNA:t.

Transmissionselektronmikroskopi (TEM)

Hippocampi efterfixerades i 2,5 % glutaraldehyd-elektronmikroskopstationär vätska och dehydrerades sedan i acetonlösningar vid ökande koncentrationer och inbäddades med Epox 812. Därefter färgades sektionerna med uranylacetat och blycitrat. Ultrastrukturella bilder i CA3-fältet i hippocampus togs sedan med ett transmissionselektronmikroskop (TEM) med en JEM-1400-FLASH (JEOL, Tokyo, Japan).

Statistiska metoder

Data presenteras som medelstandardavvikelsen (SD). Variabler som uppfyllde de parametriska testvillkoren utvärderades genom att använda Welchs t-test, envägs- eller tvåvägsanalys av variansmätning (ANOVA), följt av Tukeys multipla jämförelsetest. De variabler som inte uppfyllde de parametriska testvillkoren utvärderades genom att använda Mann-Whitney U-testet, Kruskal-Wallis-testet eller Welch och Brown-Forsythe ANOVA. Ett värde på P<0.05 was considered statistically significant. Statistical analysis and figures were obtained by GraphPad Prism Version 9.0 (GraphPad Software, CA, USA).

Resultat

Effekt av EGCG på inlärning och minne hos råttor exponerade för kronisk HAH

För att verifiera om EGCG har en effekt på rumslig inlärning och minnesprestanda hos råttor som exponerats för kronisk HAH, utfördes MWM-testet. Som visas i Fig. 1A minskade antalet plattformskorsningar av hypoxigruppen signifikant (P< 0.001, vs. the n group). The treatment of EGCG did not affect the number of crossings of rats in either the normal altitude group (n group vs. n-EGCG group, P>{{0}}.05) eller HAH-gruppen (hypoxigrupp vs. h-EGCG-grupp, P > 0,05). Därefter beräknades flyktlatensen som den tid det tog för råttan att nå den dolda plattformen (Fig. 1B). Resultaten visade att den andra till den fjärde dagen av träningen ökade flyktlatensen för råttor i hypoxigruppen signifikant (alla P-värden<0.01, vs. the n group). Moreover, the h-EGCG group showed reduced escape latency than that in the hypoxia group (all P values<0.05). Also, the swimming speed and distance in MWM were measured. No significant difference was found among these four groups at different time points (All P values>0.05, Fig. 1C). Sedan fann vi att simhastigheten för råttor i hypoxigruppen minskade jämfört med n-gruppen på andra dagen och tredje dagen (alla P-värden<0.01, Fig. 1D). Also, the swimming speed of rats in h-EGCG group was higher than that in hypoxia group (all P values<0.05, Fig. 1D).

DAB Enhanced Perls' färgning

Efter 8 veckors kronisk HAH-exponering ökade järn signifikant i CA1- och CA3-områdena i hippocampus i hjärnan jämfört med n-gruppen (alla P-värden)<0.01). After EGCG intervention, iron accumulation in CA3 and CA1 of the hippocampus was reduced compared to that of the hypoxia group (P<0.0001, P<0.001, respectively; Fig. 2).

Magnetiska känslighetsförändringar i hippocampusregioner

Känslighetsvärdena i hippocampus ökade signifikant efter HAH-exponering jämfört med n-gruppen (P<0.0001, Fig. 3A). After EGCG intervention, the values decreased compared to those of the hypoxia group (P<0. 0001, Fig. 3A).

Effekter av EGCG på Hippocampus oxidativ stress, järn och Fpn
Jämfört med n-gruppen var MDA- och järnhalten i hypoxigruppen förhöjda (P<0.05, Fig. 3B, C). EGCG treatment reduced the levels of MDA and iron, indicating that alleviation of oxidative stress may facilitate EGCG to play a protective role in chronic HAH-induced brain injury in rats. To understand the mechanisms by which brain iron contents were changed by HAH, we further examined the mRNA expression of hippocampal Fpn and found that the Fpn decreased in the hypoxia group and increased in the h-EGCG group (P < 0.01, P < 0.05, respectively, Fig. 3D).

Western Blotting-resultat

Vi utvärderade effekterna av EGCG på kaspas-{{0}}- och BDNF-nivåerna. Western blotting (WB)-analys visade högre uttryck av kaspas-3 och lägre uttryck av BDNF i hippocampus i hypoxigruppen än i n-gruppen (alla P-värden < 0,0001, fig. 4). Dessutom minskade EGCG-behandling nivåerna av Caspase-3 och ökade nivåerna av BDNF (alla P-värden<0.0001, Fig. 4).

Neurala ultrastrukturella förändringar

Efter 2 månaders kronisk HAH-exponering svullnade mitokondrier i hippocampus CA3 i hypoxigruppen på grund av minskningen eller brottet av åsen. Dessutom visade råttorna i hypoxigruppen kondenserat nukleärt kromatin, kärnkrympning, en hög grad av svullnad av endoplasmatiskt retikulum, ökade lysosomer och ökad elektrondensitet. Efter behandling med EGCG minskade mitokondriell svullnad, mitokondriell kristallupplösning och elektrondensitet markant jämfört med de i hypoxigruppen (Fig. 5).

Diskussion

I den aktuella studien fann vi att behandling med EGCG avsevärt förbättrade inlärnings-, minnes- och rumslig utforskningsförmåga hos råttorna i hypoxigruppen och mildrade den hippocampala neurala skadan som inducerades av kronisk exponering för HAH-miljön. Dessutom fann vi också att, trots betydande förbättringar av alla indikatorer efter EGCG-behandling, återgick dessa indikatorer sällan till normala hypoxinivåer.

Tidigare studier har funnit att EGCG har vissa effekter på olika typer av inlärnings- och minnesstörningsmodeller [28, 29]. Safar et al. fann att EGCG kan förbättra minnet hos morfinbehandlade råttor [30]. I överensstämmelse med deras resultat, i vår studie, efter daglig intervention med 50 mg/kg EGCG hos råttor som kroniskt exponerades för HAH, förbättrades försökspersonernas inlärnings-, minnes- och rumsliga utforskningsförmåga, vilket tyder på att EGCG kan förbättra inlärnings- och minnesförsämringar vid höga höjder.

Många studier har visat att överproduktionen av järn i hjärnan har en neurotoxisk effekt då det bidrar till oxidativ skada [31]. I denna studie upptäcktes järnansamling genom MRT, immunhistokemifärgning och biokemiska bedömningar. Dessutom utvärderades FPN, som det enda kända multitransmembrana järnexportproteinet i däggdjursceller, med PCR. Känslighetsvärdena, positiva celler av DAB förbättrade Perls färgning och hippocampus järnhalt ökade i hypoxigruppen och minskade i h-EGCG-gruppen medan FPN-uttryck visade motsatt trend. Därför drog vi slutsatsen att HAH-inducerad järnackumulering kan ske genom hämning av järnutflöde via en minskning av FPN-uttryck.

MDA är slutprodukten av lipidperoxidation [32, 33] och kan användas som en indikator på peroxidation. Tidigare studier har visat att oxidativ stress kan öka med ökande höjd [34]. Vår studie visade också att MDA-koncentrationerna ökade markant på höga höjder. Dessutom analyserade vi uttrycket av Caspase-3 och BDNF. Kaspas-3 är den viktigaste initiatorn och utföraren av terminala klyvningsenzymer och apoptos [35], medan BDNF, som ett neurotrofin, som kan reglera neuronöverlevnad och differentiering samt förbättra synaptisk transmission [36], främjar regenerering. Lin et al. rapporterade att hypoxi kan öka nivåerna av Caspase-3 och inducera apoptos i hippocampus neuroner [37]. Lee et al. rapporterade att efter 3 minuter av global ischemi i gerbilen förhindrade EGCG ischemi-inducerad hippocampus celldöd [38]. I vår studie fann vi också att EGCG minskade nivåerna av det proapoptotiska proteinet Caspase-3 och ökade uttrycket av BDNF.

Mitokondriella strukturella skador och dysfunktion är viktiga patologiska egenskaper i hjärnan under hypoxi [39]. I vår studie upptäckte ultrastrukturell observation närvaron av djup färgning, svullnad av mitokondrierna och crista-försvinnande i hippocampusneuroner under HAH, medan hippocampusneuroner efter EGCG-behandling var avsevärt skyddade från dessa skador såsom karyopyknos. Iwona Zwolak sammanfattade att EGCG kan skydda mot tungmetalltoxicitet genom att bevara mitokondriell membranpotential och förbättra mitokondriella antioxidanter och andningsfunktioner [40]. Vi misstänker att dessa mekanismer också kan vara närvarande i EGCG:s skyddande roll vid hjärnexponering för HAH-miljön. Sammanfattningsvis kan EGCG minska järnackumulering, sänka nivåer av oxidativ stress och apoptos, och främja neuronal regenerering, vilket på så sätt förbättrar hjärnans försämring hos råttor som orsakas av kronisk exponering för hypoxi på hög höjd. Därför har det potential att fungera som ett nytt läkemedel för att behandla och förebygga kronisk bergssjuka.

Erkännanden

Vi vill uttrycka vår uppriktiga tacksamhet till Core Facilities på West China Hospital, Sichuan University, Chengdu, Kina, för att de har försett oss med faciliteterna och assistansen såsom öppet fälttestet och Morris vattenlabyrinttest som används i denna studie.

Författarbidrag

CC och HC skapade, designade också och utförde denna studie; CC bearbetade uppgifterna och utarbetade manuskriptet; JC modifierade manuskriptet; BL, BH, YW, DZ och YQ hjälpte till med att utföra experimenten och FG ansvarade för alla processer.

Finansiering

Denna studie stöddes av National Natural Science Foundation of China (nr 81930046, 81771800 och 81829003).

Datatillgänglighet

Datauppsättningarna som genereras under och/eller analyseras under den aktuella studien är tillgängliga från motsvarande författare på rimlig begäran.

Deklarationer

Intressekonflikt

Författarna har inga relevanta finansiella eller icke-finansiella intressen att avslöja.

Etiskt godkännande

Denna studie utfördes i enlighet med principerna i Helsingforsdeklarationen. Godkännande beviljades av den experimentella djuretiska kommittén vid West China Hospital, Sichuan University, Chengdu, Kina.

Fri tillgång

Den här artikeln är licensierad under en Creative Commons Attribution 4.0 internationell licens, som tillåter användning, delning, anpassning, distribution och reproduktion i vilket medium eller format som helst, så länge du ger lämplig kredit till originalförfattaren/författarna ) och källan, tillhandahåll en länk till Creative Commons-licensen och ange om ändringar har gjorts. Bilderna eller annat material från tredje part i denna artikel ingår i artikelns Creative Commons-licens om inte annat anges i en kreditgräns till materialet. Om material inte ingår i artikelns Creative Commons-licens och din avsedda användning inte är tillåten enligt lagstadgade regler eller överskrider den tillåtna användningen, måste du få tillstånd direkt från upphovsrättsinnehavaren.

Referenser

1. Jain V (2016) Brain food på hög höjd. Adv Neurobiol 12:307– 321. https://doi.org/10.1007/978-3-319-28383-8_16

2. Singh LC (2017) High altitude dermatology. Indian J Dermatol 62:59–65. https://doi.org/10.4103/0019-5154.198050

3. Shi J, Wang J, Zhang J, Li X, Tian X, Wang W, Wang P, Li M (2020) Polysackarid extraherad från Potentilla anserina L lindrar akut hypobarisk hypoxi-inducerad hjärnnedsättning hos råttor. Phytother Res 34:2397–2407. https://doi.org/10.1002/ptr.6691

4. Leon-Velarde F, Maggiorini M, Reeves JT, Aldashev A, Asmus I, Bernardi L, Ge RL, Hackett P, Kobayashi T, Moore LG, Penaloza D, Richalet JP, Roach R, Wu T, Vargas E, Zubieta -Castillo G, Zubieta-Calleja G (2005) Konsensusuttalande om kroniska och subakuta höghöjdssjukdomar. High Alt Med Biol 6:147–157.https://doi.org/10.1089/ham.2005.6.147

5. Villafuerte FC, Corante N (2016) Kronisk bergssjuka: kliniska aspekter, etiologi, hantering och behandling. High Alt Med Biol 17:61–69. https://doi.org/10.1089/ham.2016.0031

6. Germuska M, Chandler HL, Stickland RC, Foster C, Fasano F, Okell TW, Steventon J, Tomassini V, Murphy K, Wise RG (2019) Dubbelkalibrerad fMRI-mätning av den absoluta cerebrala metaboliska hastigheten för syreförbrukning och effektiv syrediffusion. Neurobild 184:717–728. https://doi.org/10.1016/j.neuroimage.2018. 09.035

7. Maiti P, Singh SB, Mallick B, Muthuraju S, Ilavazhagan G (2008) Minnesförsämring på hög höjd beror på neuronal apoptos i hippocampus, cortex och striatum. J Chem Neuroanat 36:227– 238. https://doi.org/10.1016/j.jchemneu.2008.07.003

8. Turner CE, Barker-Collo SL, Connell CJ, Gant N (2015) Akut hypoxisk gasandning försämrar allvarligt kognition och uppgiftsinlärning hos människor. Physiol Behav 142:104–110. https://doi.org/10. 1016/j.physbeh.2015.02.006

9. McMorris T, Hale BJ, Barwood M, Costello J, Corbett J (2017) Effekt av akut hypoxi på kognition: en systematisk översikt och metaregressionsanalys. Neurosci Biobehav Rev 74:225–232.https://doi.org/10.1016/j.neubiorev.2017.01.019

10. Wilson MH, Newman S, Imray CH (2009) De cerebrala effekterna av uppstigning till höga höjder. Lancet Neurol 8:175–191. https://doi. org/10.1016/S1474-4422(09)70014-6

11. Hu S, Shi J, Xiong W, Li W, Fang L, Feng H (2017) Oxiracetam eller fastigial kärnstimulering minskar kognitiv skada på hög höjd. Brain Behav 7:e00762. https://doi.org/10.1002/brb3.762

12. Zhang XY, Zhang XJ, Xv J, Jia W, Pu XY, Wang HY, Liang H, Zhuoma L, Lu DX (2018) Crocin dämpar akut hypobarisk hypoxi-inducerad kognitiva brister hos råttor. Eur J Pharmacol 818:300–305. https://doi.org/10.1016/j.ejphar.2017.10.042

13. Graham HN (1992) Grönt tesammansättning, konsumtion och polyfenolkemi. Föregående Med 21:334–350. https://doi.org/10. 1016/0091-7435(92)90041-f 14. Musial C, Kuban-Jankowska A, Gorska-Ponikowska M (2020) De välgörande egenskaperna hos katekiner av grönt te. Int J Mol Sci. https:// doi.org/10.3390/ijms21051744

15. Eng QY, Thanikachalam PV, Ramamurthy S (2018) Molekylär förståelse av Epigallocatechin gallate (EGCG) vid hjärt- och kärlsjukdomar och metabola sjukdomar. J Ethnopharmacol 210:296-310.

For more information:1950477648nn@gmail.com